식품의약품안전처 고시 제2022-16호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

2022. 2. 21.

식품의약품안전처

식품의약품안전처 고시 제2022-16호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

1. 개정 이유

치즈류의 식품유형 명칭 및 정의를 합리적으로 개정하여 치즈류 분류체계의 국제조화를 도모하고, 다양한 제품이 개발될 수 있도록 하는 한편,

크릴유에 대한 지표 지방산 규격 및 인지질 등 관련 시험법을 신설하여 저가의 다른 식용유지를 혼합한 제품을 크릴유로 판매하는 소비자 기만 행위를 방지하고자 함

2. 주요 내용

가. 치즈류의 식품유형 분류 개정[안 제2. 3. 4) (2) 가. 다) ②, 제2. 3. 4) (2) 가. 라) ②,  제5. 19. 19-9 1), 제5. 19. 19-9 3) (5), 제5. 19. 19-9 4) (1) 및 (2), 제5. 19. 19-9 5), 제8. 4. 4.8 4.8.2 다, 제8. 6. 6.10 6.10.9 가]

1) 치즈류의 식품유형 명칭으로 인한 소비자의 혼선 및 주요 외국과 치즈류 분류기준이 달라 분류 및 기준 적용에 지속적인 문제 발생

2) 식품유형 중 자연치즈를 치즈로 하고, 치즈와 가공치즈의 정의를 변경

3) 치즈류 분류체계의 합리적 개선 및 국제조화를 통한 식품산업 활성화

나. 크릴유의 지방산 규격 및 관련 시험법 신설[안 제5. 7. 7-2 5) (10) 및 제8. 6. 6.3 6.3.2 6.3.2.3 신설]

1) 최근 건강식품으로 주목받는 크릴유에 저가의 다른 식용유지를 혼합하는 사기 행위를 근절하기 위해 기준·규격 마련 필요

2) 지표 지방산 규격 및 규격 확인 시험법과 인지질 시험법 신설

3) 크릴유의 진위확인을 위한 기준·규격 마련으로 소비자 기만행위 방지 및 식품시장의 신뢰도 제고

다. 잔류동물용의약품 시험법 개정(안 제8. 8.)

1) 동물용의약품 시험법의 효율성 증대를 위해 시험법 개정 필요

2) 동물용의약품 동시 다성분(151종) 정량시험법 신설

- 분석대상 식품의 구분 없이 축·수산물에 적용 가능한 시험법

3) 다성분 시험법과 중복되는 시험법 삭제

- 현행 112개* 정량시험법을 73개로 개정

* 식약처 공고 제2021-288호(2021.6.30.)로 행정예고된 겐타마이신 등 아미노글리코시드계(10종) 시험법 개정사항 반영

4) 시험법 용어, 문구, 표기법 등 통일

- 검체 →시료, 개미산 → 포름산, 칼럼 → 컬럼, 잔사 → 잔류물 등

5) 잔류동물용의약품 시험법의 효율성 증대로 검사 신뢰도 향상

라. 재검토기한 신설(안 제9. 신설)

1) ｢훈령·예규 등의 발령 및 관리에 관한 규정｣에 따라 법령의 위임에 의해 발령되는 행정규칙은 재검토기한 설정 필요

2) ｢식품의 기준 및 규격｣ 고시 본문에 재검토 기한(매 3년마다) 설정

3) 고시의 주기적 재검토 및 정비를 통한 실효성 확보

3. 기타 참고사항

가. 관계법령 : 「식품위생법」 제7조제1항

나. 예산조치 : 별도조치 필요 없음

다. 합    의 : 해당사항 없음

라. 기    타

1) 행정예고

가) 공고 제2021-464호(2021. 9. 30. ∼ 2021. 11. 30.)

2) 식품·축산물위생심의위원회

가) 식품위생심의위원회 위생제도분과 심의: 2021. 12. 24. ∼  12. 28.(서면)

나) 축산물위생심의위원회 잔류물질분과 심의: 2021. 12. 20 ∼  12. 24.(서면)

다) 축산물위생심의위원회 기준·규격분과 심의: 2022. 1. 17 ∼ 1.19.(서면)

3) 규제심사

가) 국무조정실 규제심사 대상여부 : 규제심사 대상 제2021-4558호(2021. 9. 27.)

나) 식약처 자체규제심사(2022. 1. 6 ∼ 1. 10, 원안의결)

다) 법제처 심사 : 법령위반 및 위임범위 일탈 없음(2022. 1. 10 ∼ 1. 19)

라) 국무조정실 규제개혁위원회 예비심사 : 비중요규제(822회, 2022.2.11.)

식품의약품안전처 고시 제2022-16호

「식품위생법」 제7조제1항에 따른 「식품의 기준 및 규격」을 다음과 같이 개정 고시합니다.

2022년  2월  21일

식품의약품안전처장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

식품의 기준 및 규격 일부를 다음과 같이 개정한다.

제2. 3. 4) (2) 가. 다) ② 중 “자연치즈”를 “치즈”로 한다.

제2. 3. 4) (2) 가. 라) ② 중 “자연치즈”를 “치즈”로 한다.

제5. 7. 7-2 5) 중 (10)을 다음과 같이 신설한다.

유 형 항 목	식용 우지	식용 돈지	원료 우지	원료 돈지	어유	기타동물성유지
(10) 리놀레산(%)	-	-	-	-	3 이하 (크릴유에 한함)	-

제5. 19. 19-9 중 1)을 다음과 같이 한다.

1) 정의

치즈류라 함은 원유 또는 유가공품에 유산균, 응유효소, 유기산 등을 가하여 응고, 가열, 농축 등의 공정을 거쳐 제조･가공한 치즈 및 이를 원료로 가열‧유화하여 제조·가공한 가공치즈를 말한다.

제5. 19. 19-9 3) (4) 중 “자연치즈”를 “치즈”로 한다.

제5. 19. 19-9 4) 중 (1)을 다음과 같이 한다.

(1) 치즈∶원유 또는 유가공품에 유산균, 응유효소, 유기산 등을 가하여 응고시킨 후 유청을 제거하여 제조·가공한 유고형분 18% 이상(다만 응고 공정 이후 추가된 유고형분은 제외)의 것을 말한다. 또한 유청 또는 유청에 원유, 유가공품 등을 가한 것을 농축하거나 가열 응고시켜 제조·가공한 것도 포함한다. 다만, 가공치즈에 해당하는 것은 제외한다.

제5. 19. 19-9 4) 중 (2)를 다음과 같이 한다.

(2) 가공치즈∶치즈를 원료로 하여 가열·유화공정을 거쳐 제조·가공한 것으로 원료 치즈 유래 유고형분 18%이상의 것을 말한다.

제5. 19. 19-9 5) 중 “자연치즈”를 “치즈”로 한다.

제8. 4. 4.8 4.8.2 다. 중 “자연치즈”를 “치즈”로 한다.

제8. 6. 6.3. 6.3.2 중 6.3.2.3을 다음과 같이 신설한다.

6.3.2.3 어유

6.3.2.3.1 인지질

가. 핵자기공명분광기에 의한 정량(제1법)

1) 시험법 적용범위

크릴유에 적용한다.

2) 분석원리

시료 중의 인지질을 클로로포름과 메탄올로 추출 후 핵자기공명분광기를 이용하여 정량하는 방법이다.

3) 장치 및 기구

가) 장치

(1) 핵자기공명분광기(NMR, 최소 300 Mhz 이상)

나) 기구

(1) 유리 메디아병(250 mL)

(2) 유리바이알

(3) 1 mL 케미칼 실험용 일회용 주사기(all plastic syringe)

(4) 칼·가위 등의 커팅 도구

(5) 유리섬유 시린지 필터

(6) 교반기(vortex mixer)

(7) 원심분리기

(8) 질소농축기

(9) 분석저울(0.0001g 까지 측정 가능)

4) 시약 및 시액

가) 시약

(1) 증류수

(2) 중수소클로로포름(chloroform-d)[중수소비율: 99.8 이상, 테트라메틸실란(tetramethylsilane) 0.05% (v/v)]

(3) 중수소메탄올(methanol-d4)[중수소비율: 99.8 이상, 테트라메틸실란(tetramethylsilane) 0.05% (v/v)]

(4) 탄산세슘(Cesium carbonate, CsCO3)

(5) 이.디.티.에이(EDTA(Ethylene diamine tetraacetic acid))

(6) 클로로포름(HPLC grade)

(7) 메탄올(HPLC grade)

나) 내부표준물질

(1) 트리페닐인산(Triphenyl phosphate)(TPP, 31P-qNMR Standard grade)

다) 시액

(1) 클로로포름/메탄올 혼합액: 클로로포름, 메탄올을 2:1의 부피비로 혼합하여 조제한다.

(2) 이.디.티.에이, 탄산세슘 혼합액: 0.2 M 이.디.티.에이 용액을 제조한 후, 1 M 탄산세슘 용액을 이용하여 pH를 7.2 ～ 7.5로 하여 조제한다.

5) 시험용액의 조제

가) 액상 시료

(1) 유리바이알에 트리페닐인산 20 ～ 25 mg를 넣은 뒤 정확한 무게를 기록하고, 300 ～ 350 mg의 액상(원료) 시료를 넣고 정확한 무게를 기록한다.

(2) 유리바이알에 중수소클로로포름, 중수소메탄올을 각각 1 mL씩 넣고 잘 녹인 후 이.디.티.에이, 탄산세슘 혼합액을  1 mL 씩 넣고 30분간 충분히 섞은 후 원심분리한다. 하부의 유기용매층을 핵자기공명분광기 튜브에 옮겨 담은 것을 시험용액(최소 0.6 mL 이상)으로 한다.

나) 캡슐 제품

(1) 캡슐 제품의 경우, 크릴유 5g 정도에 해당하는 수의 캡슐을 핀셋, 커팅도구를 이용해 반으로 자른 뒤 유리 메디아병에 넣고,  핀셋, 면도칼(커팅도구)에 묻은 시료는 클로로포름/메탄올 혼합용액으로 씻어내어 유리 메디아병에 합친다. 50 mL의 클로로포름/메탄올 혼합용액을 추가하여 넣고 내용물을 완전히 용해시킨 후, 100 mL 부피플라스크에 옮긴다. 유리병, 빈 캡슐 등은 30 mL의 클로로포름/메탄올 혼합용액으로 씻어내어 부피플라스크에 합치고 클로로포름/메탄올 혼합용액으로 부피플라스크의 표선까지 채워 균일하게 섞은 것을 시험원액으로 한다.

(2) 유리바이알에 트리페닐인산 20 ～ 25 mg을 넣은 뒤 정확한 무게를 기록한다. 여기에 크릴유 300 ～ 350 mg에 해당하는 시험원액(통상, 캡슐 당 내용량이 1,000 mg일 경우, 6 mL을 취한다.)을 넣은 후  가해진  시험원액의 정확한 양을 기록하고 질소농축기를 이용하여 용매를 완전히 제거한다.

(3) 유리바이알에 중수소클로로포름과 중수소메탄올을 각각 2 mL씩 넣고 잘 녹인 후 이.디.티.에이, 탄산세슘 혼합액을 2 mL 넣고 30분간 충분히 섞은 후 원심분리한다. 하층의 유기용매층을 핵자기공명분광기 튜브에 옮겨 담은 것을 시험용액(최소 0.6 mL 이상)으로 한다.

6) 분석 및 계산

가) 핵자기공명분광기의 측정조건

※ 감도(sensitivity) 및 선모양(line shape) 테스트는 핵자기공명분광기 제조사에서 규정하는 점검 기간 내에 수행되어져야 한다. 이때, 최소 월간점검의 수행이 요구되며 분해능(Resolution) 테스트는 매 분석 시 마다 수행하고 분석결과와 함께 제시하여야 한다.

(1) 반복측정(number of transients) : 128회 이상

(2) 측정 간 이완 시간(relaxation delay) : 10 sec 이상

(3) FID(free induction decay) 측정 시간(acquisition time) : 5 sec 이상

(4) 펄스 넓이(pulse width) : 45○

(5) 측정 온도(temperature) : 25°C

(6) 펄스 프로그램(pulse program) : 1H-decoupled 31P (inverse gated)

(7) 스펙트럼 폭(spectral width) : 50 ppm(-25 ppm to 25 ppm)

(8) 트랜스미터 오프셋(transmitter offset) : 스펙트럼 폭의 중심, 0 ppm

(9) 데이터 셋의 크기(size of data set) : 64K (32K with zero-filling) 이상

나) 계산

(1) 계산

(가) 인지질 함량(wt/wt%) = 포스파티딜콜린(PC) 함량(wt/wt%) + 리소포스파티딜콜린(1-리소포스파티딜콜린(1-LPC)과 2-리소포스파티딜콜린(2-LPC)) 함량(wt/wt%) + 포스파티딜에탄올아민(PE) 함량(wt/wt%) + N-아실-포스파티딜에탄올아민(NAPE) 함량(wt/wt%) + 리소포스파티딜에탄올아민(LPE) 함량(wt/wt%) + 기타(Others) 함량(wt/wt%)

(나) 각 인지질 함량(wt/wt%)

CPL(wt%) = (MWPL x molPL x 100) / WS

CPL = 시험용액 중 개별 인지질의 함량(%, w/w)

MWPL = 개별 인지질의 분자량(g/mol, 표 1. 참고)

Ws = 시료채취량(g)

※ 캡슐 제품의 경우, 동 시험과는 별도로 캡슐 당 내용량 확인시험을 하여야 하며, Ws = 시험원액을 취한 부피(mL) × 시험원액 농도[(1캡슐 당 내용량(mg/캡슐) × 캡슐 수) ÷ 100mL]

molPL = 시험용액 중 개별 인지질의 mole수(mol)

= (IPL x AIS x molIS) / (IIS x APL)

IIS = 내부표준물질의 피크면적

IPL = 개별 인지질의 피크면적

AIS = 내부표준물질의 분자당 인의 원자수(atoms/mol)

APL = 개별 인지질의 분자당 인의 원자수(atoms/mol)

molIS = 시험용액 중 내부표준물질의 mole수(mol)

= (WIS x CIS) / (MWIS x 100)

WIS  = 시험용액에 첨가한 내부표준물질의 량(g)

CIS  = 내부표준물질의 순도(%)

MWIS = 내부표준물질의 분자량, 326.3g/mol

그림 1. 크릴유의 인 핵자기공명(31P NMR) 스펙트럼

표 1.  각 인지질 성분들의 chemical shift 및 분자량

성분	Chemical shift (ppm)	분자량 (g/mol)	분자당 인의 수
TPP(Triphenyl phosphate, internal STD)	-17.8	326.3	1
PC(Phosphatidylcholine)	-0.93	791	1
1-LPC(1-Lysophosphatidylcholine)	-0.49	534.5	1
2-LPC(2-Lysophosphatidylcholine)	-0.39	534.5	1
PE(Phosphatidylethanolamine)	-0.19	770	1
NAPE(N-acyl-phosphatidylethanolamine)	-0.06	1032	1
LPE(Lysophosphatidylethanolamine)	0.29	492.5	1
기타		800

나. 액체크로마토그래프에 의한 정량(제2법)

1) 시험법 적용범위

크릴유의 제조·가공기준 확인시 제1법을 대체하여 사용할 수 있다. 이때 제2법에 따른 판정이 제1법에 따른 판정과 상이한 경우에는 제1법의 결과를 우선한다.

2) 분석원리

시료 중의 인지질을 클로로포름과 메탄올로 추출 후 질소로 농축한 후 헥산과 이소프로판올로 녹여 순상칼럼으로 분리한 후 액체크로마토그래프/증기화광산란검출기를 이용하여 정량하는 방법이다.

3) 장치 및 기구

가) 장치

액체크로마토그래프/증기화광산란검출기(LC/ELSD)

나) 기구

(1) 유리 메디아병(250 mL)

(2) 유리바이알

(3) 부피플라스크(10 mL, 100 mL 및 200 mL)

(4) 멤브레인 필터(0.45 μm)

(5) 1 mL 케미칼실험용 일회용 주사기(all plastic syringe)

(6) 칼·가위 등의 커팅 도구

(7) 유리섬유 시린지 필터

(8) 교반기(vortex mixer)

(9) 원심분리기

(10) 질소농축기

(11) 분석저울(0.0001g 까지 측정 가능)

4) 시약 및 시액

가) 시약

(1) 증류수 : 3차 증류수

(2) n-헥산 : HPLC grade

(3) 이소프로판올 : HPLC grade

(4) 아세트산

(5) 트리에틸아민

(6) 클로로포름 : HPLC grade

(7) 메탄올 : HPLC grade

(8) 포스파티딜콜린(Phosphatidylcholine)

: CAS No. 97281-47-5 또는 이와 동등한 것

(9) 리소포스파티딜콜린(1-palmitoyl-2-hydroxy-sn-glycero-3-phosphocholine, LPC)

: CAS No. 17364-16-8 또는 이와 동등한 것

(10) 포스파티딜에탄올아민(Phosphatidylethanolamine, PE)

: CAS No. 39382-08-6 또는 이와 동등한 것

(11) N-아실-포스파티딜에탄올아민(N-acyl-Phosphatidylethanolamine, NAPE)

: European Pharmacopoeia (EP) Reference Standard 또는 이와 동등한 것

나) 표준용액

(1) 표준원액 : 포스파티딜콜린, 리소포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, N-아실-포스파티딜에탄올아민을 각각 100 mg을 n-헥산/이소프로판올 혼합액(8:2, v/v) 100 mL에 녹여 조제한다.

(2) 표준용액 : 표준원액을 n-헥산/이소프로판올 혼합액(8:2, v/v)로 적절히 희석하여 표준용액으로 한다.

다) 시액

(1) n-헥산/이소프로판올 혼합액 : n-헥산과 이소프로판올을 8:2의 부피비로 혼합하여 조제한다.

(2) 클로로포름/메탄올 혼합액 : 클로로포름, 메탄올을 2:1의 부피비로 혼합하여 조제한다.

(3) 이동상 A : n-헥산, 이소프로판올, 아세트산 및 트리에틸아민을 81.42:17.00:1.50:0.08의 부피비로 혼합한 후 0.45 μm 여지로 여과하고 탈기하여 조제한다.

(4) 이동상 B : 이소프로판올, 증류수, 아세트산, 트리에틸아민을 84.42:14.00:1.50:0.08의 부피비로 혼합한 후 0.45 um 여지로 여과하고 탈기하여 조제한다.

5) 시험용액 조제

가) 시험원액 조제

(1) 액상 시료

액상의 시료 약 2,500 mg을 취하여 100 mL 부피플라스크에 넣은 후 n-헥산/이소프로판올 혼합액을  넣어 녹인 뒤,  n-헥산/이소프로판 혼합액으로 정용한 것을 시험원액으로 한다.

(2) 캡슐 제품

캡슐 제품인 경우, 크릴유 5g 정도에 해당하는 수의 캡슐을 핀셋, 커팅도구를 이용해 반으로 자른 뒤 유리 메디아병에 넣고, 핀셋, 면도칼(커팅도구)에 묻은 시료는 클로로포름/메탄올 혼합용액으로 씻어내어 유리 메디아병에 합친다. 50 mL의 클로로포름/메탄올 혼합용액을 추가하여 넣고 내용물을 완전히 용해시킨 후, 100 mL 부피플라스크에 옮긴다. 유리병, 빈 캡슐 등을 30 mL의 클로로포름/메탄올 혼합용액으로 씻어내어 부피플라스크에 합치고 클로로포름/메탄올 혼합용액으로 부피플라스크의 표선까지 채워 균일하게 섞은 것을 시료액(★)으로 한다. 유리바이알에 크릴유 시료액(약 5mL)을 넣은 후 질소 농축기를 이용하여 용매를 완전히 제거한다. 용매가 제거된 유리바이알에  n-헥산/이소프로판올 혼합용액을 소량 넣고 녹인 후, 10 mL 부피플라스크로 옮긴 뒤 n-헥산/이소프로판올 혼합용액으로 정용한 것을 시험원액(☆)으로 한다.

나) 시험용액 조제

시험원액을 0.45 μm 나일론 멤브레인 필터로 여과한 여과액을 포스파티딜에탄올아민, N-아실-포스파티딜에탄올아민의 시험용액으로 하고, 여과액을 n-헥산/이소프로판올 혼합용액으로 2배 희석하여 리소포스파티딜콜린의 시험용액으로 하고, 여과액을 n-헥산/이소프로판올 혼합용액으로 20배 희석하여 포스파티딜콜린의 시험용액으로 한다.

6) 시험방법

가) 액체크로마토그래프 조건

(1) 칼럼 : Diol-bounded silica column(4.0 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 55℃

(3) Drift tube Temp. : 50℃

(4) 증기화광산란검출기 Pressure(N2 gas) : 2.5 bar

(5) 유  속 : 1.0 mL/min

(6) 주입량 : 20 μL

(7) 이동상

(가) 이동상 A : n-헥산:이소프로판올:아세트산:트리에틸아민(81.42:17.00:1.50:0.08, v/v/v/v)

(나) 이동상 B : 이소프로판올:증류수:아세트산:트리에틸아민(84.42:14.00:1.50:0.08, v/v/v/v)

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
5	80	20
8.5	60	40
15.0	0	100
17.5	95	5
34.0	95	5

나) 검량선 작성

각 표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프/증기화광산란검출기에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램 상의 각 피크 면적을 구하고 검량선을 작성한다.

7) 정량시험

표준용액과 시험용액의 크로마토그램상의 피크의 머무름 시간과 일치할 때 면적을 검량선에 대입하여 시험용액 중의 각 인지질(포스파티딜콜린, 리소포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, N-아실-포스파티딜에탄올아민)의 농도(mg/mL)를 구한다.

가) 인지질 함량(wt/wt%) = [포스파티딜콜린 함량(wt/wt%) + 리소포스파티딜콜린 함량(wt/wt%) + 포스파티딜에탄올아민 함량(wt/wt%) + N-아실-포스파티딜에탄올아민 함량(wt/wt%)] × 1.07

나) 각 인지질 함량(wt/wt%) = C × V/S × 희석배수 × [eqn: {100} over {1000}]

C : 검량선으로부터 얻은 시료의 각 인지질 농도(mg/mL)

V : 시험원액(☆)의 최종부피 (= 10 mL)

희석배수 : N-아실-포스파티딜에탄올아민(1),  리소포스파티딜콜린(2), 포스파티딜콜린(20)

S : 시료 채취량 (g)

※ 캡슐 제품의 경우, 동 시험과는 별도로 캡슐 당 내용량 확인 시험을 하여야 하며, S = 시료액(★) 취한 부피(5 mL) × 시료액 농도[(1캡슐 당 내용량(g/캡슐) × 캡슐 수) ÷ 100 mL]

[eqn: {100} over {1000}] : 단위환산

6.3.2.3.2 리놀레산

가. 시험법 적용범위

크릴유에 적용한다.

나. 분석원리

유지를 메탄올성 수산화나트륨용액으로 처리하여 알칼리염을 만든 후 트리플루오로보란메탄올 용액을 가하고 가열하여 에스테르화 한다. 생성된 지방산에스테르를 이소옥탄(isooctane)에 녹여 분석을 행한 후  크로마토그램의 지방산 피크의 총 면적 중 리놀레산(linoleic acid, C18:2) 피크의 면적 비율을 구하여 결과를 산출한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프 : 불꽃이온화검출기(Flame Ionization Detector, FID)

2) 교반기(vortex mixer)

3) 가열기(heating block)

4) 질소농축기

라. 시약 및 시액

1) 14% 트리플루오로보란메탄올 용액(125 g BF3/L MeOH)

2) 메탄올성 수산화나트륨용액(0.5 N) : 수산화나트륨 2 g을 메탄올 100 mL로 조제한다. 장시간 방치하는 경우 흰 침전(탄산나트륨)이 생길 수 있으나 이는 무시하여도 된다.

3) 이소옥탄

4) 무수황산나트륨

5) 포화 염화나트륨용액

6) 내부표준용액 : 내부표준용액의 농도는 지방산 표준용액의 감응도(피크의 면적 또는 높이)보다 높게 조절한다.

(가) 지방산 사용시 : Triundecanoin(C11:0)을 이소옥탄에 녹여 사용한다.

(나) 지방산 메틸 에스테르 사용시 : Undecanoic acid methyl ester를 이소옥탄에 녹여 사용한다.

7) 표준용액의 조제

(가) 지방산 사용 시 : 분석하고자 하는 지방산 0.01 g을 이소옥탄 10 mL에 녹여 표준원액으로 한다(1 mg/mL). 지방산 표준원액을 적절한 농도로 희석한 표준용액 1 mL를 유리 튜브에 취하고 내부표준용액 1 mL를 첨가한다. (단, 표준용액과 시험용액의 내부표준물질 농도가 동일한 농도가 되도록 조절한다.) ★이어 0.5 N 메탄올성 수산화나트륨용액 1.5 mL를 가하고 질소를 불어넣은 후 즉시 뚜껑을 덮고 혼합한다. 이어 100℃ heating block에서 약 5분간 가온한다. 이를 냉각한 후 14% 트리플루오로보란메탄올 용액 2 mL를 가하고 다시 질소를 불어넣은 후 즉시 뚜껑을 덮고 혼합하고 100℃에서 30분간 가온한다. 이어 30～40℃로 냉각하여 이소옥탄 1 mL를 가하여 질소를 불어넣은 후 뚜껑을 덮고 이 온도에서 30초간 격렬히 진탕한다. 다음 즉시 포화 염화나트륨용액 5 mL를 가하고 질소를 불어넣은 후 뚜껑을 덮고 진탕한다. 상온으로 냉각한 후 수층으로부터 분리된 이소옥탄층을 무수황산 나트륨으로 탈수하여 표준용액으로 한다.

(나) 개별 지방산 메틸 에스테르 사용 시 : 분석하고자 하는 지방산 메틸 에스테르를 이소옥탄에 녹여 표준원액으로 한다(1 mg/mL). 표준원액을 적절한 농도로 희석한 용액 1 mL에 바) 내부표준용액 (2) 1 mL를 첨가하여 표준용액으로 한다.

마. 시험용액의 조제

검체 약 25 mg을 유리 튜브에 정밀히 취하고 내부표준용액 1 mL를 첨가한다. 7) 표준용액 (가)의 ★ 이하에 따라 시험하여 시험용액으로 한다.

바. 기체크로마토그래프 조건

1) 칼럼 : SP-2560 (100 m ⨉ 0.25 mm ⨉ 0.2 μm) 또는 이와 동등한 것

2) 주입부온도 : 225℃

3) 칼럼온도 : 100℃에서 4분간 유지한 후 3℃/min의 비율로 240℃까지 온도를 상승시키고 이후 15분 이상 유지한다.

4) 검출기온도 : 285℃

5) 유량 : 헬륨 0.75 mL/min

6) split ratio : 200 : 1

사. 지방산 분석

리놀레산 표준용액 1～2 μL를 주입한 후 RRT (Relative Retention Time; 내부표준물질에 대한 각 지방산들의 머무름 시간의 비)를 사용하여 리놀레산 피크의 위치를 확인한다. 이어 시험용액 1～2 μL를 주입하여 후 얻어진 크로마토그램에서 확인되는 모든 지방산 피크의 면적을 합한 총 피크 면적과 내부표준물질, 리놀레산 피크의 면적을 각각 구한 후 다음의 식에 따라 총 지방산 중 리놀레산의 비율을 구한다.

% 지방산	=	Ax × 100
		Atotal - Ai

Atotal : 크로마토그램에서 확인 된 모든 지방산 피크 면적의 합

Ai : 크로마토그램 중 내부표준물질 피크의 면적

Ax : 크로마토그램 중 리놀레산 피크의 면적

제8. 6. 6.10 6.10.9 가 중 “자연치즈”를 “치즈”로 한다.

제8. 8.을 별지와 같이 한다.

제9.를 다음과 같이 신설한다.

제9. 재검토기한

식품의약품안전처장은 이 고시에 대하여 ｢훈령·예규 등의 발령 및 관리에 관한 규정｣에 따라 2022년 1월 1일 기준으로 매 3년이 되는 시점(매 3년째의 12월 31일까지를 말한다)마다 그 타당성을 검토하여 개선 등의 조치를 하여야 한다.

부칙

제1조(시행일) ① 이 고시는 고시한 날부터 시행한다.

② 제1항에도 불구하고 다음 각 호의 구분에 따른 개정규정은 다음 각 호에서 정한 날부터 시행한다.

1. 제8. 8.의 개정규정 : 2022년 7월 1일

2. 다음 각 목의 개정규정 : 2024년 1월 1일

가. 제2. 3. 4) (2) 가.

나. 제5. 19. 19-9

다. 제8. 4. 4.8 4.8.2 다.

라. 제8. 6. 6.10 6.10.9 가.

제2조(적용례) ① 이 고시는 이 고시 시행 이후 최초로 제조·가공 또는 수입한 식품(선적일 기준)부터 적용한다.

② 제1항에도 불구하고 이 고시 시행 전 부칙 제1조제2항제2호 각 목의 의 개정규정에 대하여 이 고시를 적용받고자 하는 자는 ｢식품위생법｣, ｢축산물위생관리법｣ 또는 ｢수입식품안전관리특별법｣에 따라 이 고시의 개정된 식품유형으로 품목제조보고 또는 변경하거나 수입신고하는 경우 개정규정을 미리 적용받을 수 있다.

제3조(경과조치) 이 고시는 이 고시 시행 당시 제조․가공․판매 또는 수입되어 검사가 진행 중인 사항에 대하여는 종전의 규정에 따른다.

신․ 구조문 대비표

현  행

개  정(안)

제1. (생  략)

제1. (현행과 같음)

제2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1. ∼ 2. (생  략)

제2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1. ∼ 2. (현행과 같음)

3. 식품일반의 기준 및 규격

1) ∼ 3) (생  략)

4) 위생지표균 및 식중독규

(1) (생  략)

(2) 식중독균

가. (생  략)

가) ∼ 나) (생  략)

다) 클로스트리디움 퍼프린젠스(Clostridium perfringens)

대상 식품	규 격
① (생 략)	(생 략)
② 가)의 대상식품 중 생햄, 발효소시지, 자연치즈, 가공치즈	(생 략)
③ (생 략)	(생 략)
④ (생 략)	(생 략)

라) 황색포도상구균(Staphylococcus aureus)

대상 식품	규 격
① (생 략)	(생 략)
② 가)의 대상식품 중 생햄, 발효소시지, 자연치즈, 가공치즈	(생 략)
③ (생 략)	(생 략)

나. ∼ 바. (생  략)

5) ∼ 17) (생  략)

4. (생  략)

3. 식품일반의 기준 및 규격

1) ∼ 3) (현행과 같음)

4) 위생지표균 및 식중독규

(1) (현행과 같음)

(2) 식중독균

가. (현행과 같음)

가) ∼ 나) (현행과 같음)

다) 클로스트리디움 퍼프린젠스(Clostridium perfringens)

대상 식품	규 격
① (현행과 같음)	(현행과 같음)
② ---------- ---------- 치즈, ------ --	(현행과 같음)
③ (현행과 같음)	(현행과 같음)
④ (현행과 같음)	(현행과 같음)

라) 황색포도상구균(Staphylococcus aureus)

대상 식품	규 격
① (현행과 같음)	(현행과 같음)
② ---------- ---------- 치즈, ------ --	(현행과 같음)
③ (현행과 같음)	(현행과 같음)

나. ∼ 바. (현행과 같음)

5) ∼ 17) (현행과 같음)

4. (현행과 같음)

제3. ∼ 제4. (생  략)

제3. ∼ 제4. (현행과 같음)

제5. 식품별 기준 및 규격

1. ∼ 6. (생  략)

7. 식용유지류

(생  략)

7-1 (생  략)

7-2 동물성유지류

1) ∼ 4) (생  략)

5) 규격

유 형 항 목	식용 우지	식용 돈지	원료 우지	원료 돈지	어유	기타동물성유지
(1)∼(9) (생략)	(생략)	(생략)	(생략)	(생략)	(생략)	(생략)
<신 설>	<신 설>

6) (생  략)

7-3 (생  략)

8. ∼ 18. (생  략)

19. 유가공품

(생  략)

19-1 ∼ 19-8 (생  략)

19-9 치즈류

1) 정의

치즈류라 함은 원유 또는 유가공품에 유산균, 응유효소, 유기산 등을 가하여 응고, 가열, 농축 등의 공정을 거쳐 제조･가공한 자연치즈 및 가공치즈를 말한다.

2) (생  략)

3) 제조·가공기준

(1) ∼ (3) (생  략)

(4) 가공치즈의 원료로 사용하는 자연치즈는 분쇄한 후 균일한 조직이 되도록 충분히 교반 유화시켜야 한다.

4) 식품유형

(1) 자연치즈∶원유 또는 유가공품에 유산균, 응유효소, 유기산 등을 가하여 응고시킨 후 유청을 제거하여 제조한 것을 말한다. 또한, 유청 또는 유청에 원유, 유가공품 등을 가한 것을 농축하거나 가열 응고시켜 제조한 것도 포함한다. <신  설>

(2) 가공치즈∶자연치즈를 원료로 하여 이에 유가공품, 다른 식품 또는 식품첨가물을 가한 후 유화 또는 유화시키지 않고 가공한 것으로 자연치즈 유래 유고형분 18% 이상인 것을 말한다.

5) 규격

유형 항목	자연치즈	(생 략)
(1) ∼ (8) (생 략)	(생 략)	(생 략)

6) (생  략)

19-10 ∼ 19-14 (생  략)

20. ∼ 24. (생  략)

제5. 식품별 기준 및 규격

1. ∼ 6. (현행과 같음)

7. 식용유지류

(현행과 같음)

7-1 (현행과 같음)

7-2 동물성유지류

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

유 형 항 목	식용 우지	식용 돈지	원료 우지	원료 돈지	어유	기타동물성유지
(1)∼(9) (현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(10) 리놀레산(%)	-	-	-	-	3이하 (크릴유에 한함)	-

6) (현행과 같음)

7-3 (현행과 같음)

8. ∼ 18. (현행과 같음)

19. 유가공품

(현행과 같음)

19-1 ∼ 19-8 (현행과 같음)

19-9 치즈류

1) 정의

--------------------------

--------------------------

--------------------------

------------------ 치즈 및 이를 원료로 가열‧유화하여 제조·가공한 가공치즈를 말한다.

2) (현행과 같음)

3) 제조·가공기준

(1) ∼ (3) (현행과 같음)

(4) -----------------------

치즈는 -----------------

-----------------------

-------------.

4) 식품유형

(1) 치즈∶------------------

-----------------------

-----------------------

----------- 제조·가공한 유고형분 18% 이상(다만 응고 공정 이후 추가된 유고형분은 제외)의 것을 말한다.

-----------------------

----. 다만, 가공치즈에 해당하는 것은 제외한다.

(2) -------∶치즈를 원료로 하여 가열·유화공정을 거쳐 제조·가공한 것으로 원료 치즈 유래 ------------------

-----------------------

-----------------------

--------.

5) 규격

유형 항목	치즈	(현행과 같음)
(1) ∼ (8) (현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)

6) (현행과 같음)

19-10 ∼ 19-14 (현행과 같음)

20. ∼ 24. (현행과 같음)

제6. ∼ 제7. (생  략)

제6. ∼ 제7. (현행과 같음)

제8. 일반시험법

1. ∼ 3. (생  략)

4. 미생물 시험법

4.1 ∼ 4.7 (생  략)

4.8 대장균

4.8.1 (생  략)

4.8.2 정량시험

가. ∼ 나. (생  략)

다. 자동화된 최확수법(Automated MPN)

자연치즈, 식육추출가공품, 닭도체, 오리도체에 한한다.

별표 1. ∼ 별표 2. (생  략)

4.9 ∼ 4.28 (생  략)

5. (생  략)

제8. 일반시험법

1. ∼ 3. (현행과 같음)

4. 미생물 시험법

4.1 ∼ 4.7 (현행과 같음)

4.8 대장균

4.8.1 (현행과 같음)

4.8.2 정량시험

가. ∼ 나. (현행과 같음)

다. 자동화된 최확수법(Automated MPN)

치즈, 식육추출가공품, 닭도체, 오리도체에 한한다.

별표 1. ∼ 별표 2. (현행과 같음)

4.9 ∼ 4.28 (현행과 같음)

5. (현행과 같음)

6. 식품별 규격 확인 시험법

6.1 ∼ 6.2 (생  략)

6.3 식용유지류

6.3.1 (생  략)

6.3.2 동물성유지류

6.3.2.1 ∼ 6.3.2.2 (생  략)

<신  설>

6. 식품별 규격 확인 시험법

6.1 ∼ 6.2 (현행과 같음)

6.3 식용유지류

6.3.1 (현행과 같음)

6.3.2 동물성유지류

6.3.2.1 ∼ 6.3.2.2 (현행과 같음)

6.3.2.3 어유

6.3.2.3.1 인지질

가. 핵자기공명분광기에 의한 정량(제1법)

1) 시험법 적용범위

크릴유에 적용한다.

2) 분석원리

시료 중의 인지질을 클로로포름과 메탄올로 추출 후 핵자기공명분광기를 이용하여 정량하는 방법이다.

3) 장치 및 기구

가) 장치

(1) 핵자기공명분광기(NMR, 최소 300 Mhz 이상)

나) 기구

(1) 유리 메디아병(250 mL)

(2) 유리바이알

(3) 1 mL 케미칼 실험용 일회용 주사기(all plastic syringe)

(4) 칼·가위 등의 커팅 도구

(5) 유리섬유 시린지 필터

(6) 교반기(vortex mixer)

(7) 원심분리기

(8) 질소농축기

(9) 분석저울(0.0001g 까지 측정 가능)

4) 시약 및 시액

가) 시약

(1) 증류수

(2) 중수소클로로포름(chloroform-d)[중수소비율: 99.8 이상, 테트라메틸실란(tetramethylsilane) 0.05% (v/v)]

(3) 중수소메탄올(methanol-d4)[중수소비율: 99.8 이상, 테트라메틸실란(tetramethylsilane) 0.05% (v/v)]

(4) 탄산세슘(Cesium carbonate, CsCO3)

(5) 이.디.티.에이(EDTA(Ethylene diamine tetraacetic acid))

(6) 클로로포름(HPLC grade)

(7) 메탄올(HPLC grade)

나) 내부표준물질

(1) 트리페닐인산(Triphenyl phosphate)(TPP, 31P-qNMR Standard grade)

다) 시액

(1) 클로로포름/메탄올 혼합액: 클로로포름, 메탄올을 2:1의 부피비로 혼합하여 조제한다.

(2) 이.디.티.에이, 탄산세슘 혼합액: 0.2 M 이.디.티.에이 용액을 제조한 후, 1 M 탄산세슘 용액을 이용하여 pH를 7.2 ～ 7.5로 하여 조제한다.

5) 시험용액의 조제

가) 액상 시료

(1) 유리바이알에 트리페닐인산 20 ～ 25 mg를 넣은 뒤 정확한 무게를 기록하고, 300 ～ 350 mg의 액상(원료) 시료를 넣고 정확한 무게를 기록한다.

(2) 유리바이알에 중수소클로로포름, 중수소메탄올을 각각 1 mL씩 넣고 잘 녹인 후 이.디.티.에이, 탄산세슘 혼합액을  1 mL 씩 넣고 30분간 충분히 섞은 후 원심분리한다. 하부의 유기용매층을 핵자기공명분광기 튜브에 옮겨 담은 것을 시험용액(최소 0.6 mL 이상)으로 한다.

나) 캡슐 제품

(1) 캡슐 제품의 경우, 크릴유 5g 정도에 해당하는 수의 캡슐을 핀셋, 커팅도구를 이용해 반으로 자른 뒤 유리 메디아병에 넣고,  핀셋, 면도칼(커팅도구)에 묻은 시료는 클로로포름/메탄올 혼합용액으로 씻어내어 유리 메디아병에 합친다. 50 mL의 클로로포름/메탄올 혼합용액을 추가하여 넣고 내용물을 완전히 용해시킨 후, 100 mL 부피플라스크에 옮긴다. 유리병, 빈 캡슐 등은 30 mL의 클로로포름/메탄올 혼합용액으로 씻어내어 부피플라스크에 합치고 클로로포름/메탄올 혼합용액으로 부피플라스크의 표선까지 채워 균일하게 섞은 것을 시험원액으로 한다.

(2) 유리바이알에 트리페닐인산 20 ～ 25 mg을 넣은 뒤 정확한 무게를 기록한다. 여기에 크릴유 300 ～ 350 mg에 해당하는 시험원액(통상, 캡슐 당 내용량이 1,000 mg일 경우, 6 mL을 취한다.)을 넣은 후  가해진  시험원액의 정확한 양을 기록하고 질소농축기를 이용하여 용매를 완전히 제거한다.

(3) 유리바이알에 중수소클로로포름과 중수소메탄올을 각각 2 mL씩 넣고 잘 녹인 후 이.디.티.에이, 탄산세슘 혼합액을 2 mL 넣고 30분간 충분히 섞은 후 원심분리한다. 하층의 유기용매층을 핵자기공명분광기 튜브에 옮겨 담은 것을 시험용액(최소 0.6 mL 이상)으로 한다.

6) 분석 및 계산

가) 핵자기공명분광기의 측정조건

※ 감도(sensitivity) 및 선모양(line shape) 테스트는 핵자기공명분광기 제조사에서 규정하는 점검 기간 내에 수행되어져야 한다. 이때, 최소 월간점검의 수행이 요구되며 분해능(Resolution) 테스트는 매 분석 시 마다 수행하고 분석결과와 함께 제시하여야 한다.

(1) 반복측정(number of transients) : 128회 이상

(2) 측정 간 이완 시간(relaxation delay) : 10 sec 이상

(3) FID(free induction decay) 측정 시간(acquisition time) : 5 sec 이상

(4) 펄스 넓이(pulse width) : 45○

(5) 측정 온도(temperature) : 25℃

(6) 펄스 프로그램(pulse program) : 1H-decoupled 31P (inverse gated)

(7) 스펙트럼 폭(spectral width) : 50 ppm(-25 ppm to 25 ppm)

(8) 트랜스미터 오프셋(transmitter offset) : 스펙트럼 폭의 중심, 0 ppm

(9) 데이터 셋의 크기(size of data set) : 64K (32K with zero-filling) 이상

나) 계산

(1) 계산

(가) 인지질 함량(wt/wt%) = 포스파티딜콜린(PC) 함량(wt/wt%) + 리소포스파티딜콜린(1-리소포스파티딜콜린(1-LPC)과 2-리소포스파티딜콜린(2-LPC)) 함량(wt/wt%) + 포스파티딜에탄올아민(PE) 함량(wt/wt%) + N-아실-포스파티딜에탄올아민(NAPE) 함량(wt/wt%) + 리소포스파티딜에탄올아민(LPE) 함량(wt/wt%) + 기타(Others) 함량(wt/wt%)

(나) 각 인지질 함량(wt/wt%)

CPL(wt%) = (MWPL x molPL x 100) / WS

CPL = 시험용액 중 개별 인지질의 함량(%, w/w)

MWPL = 개별 인지질의 분자량(g/mol, 표 1. 참고)

Ws = 시료채취량(g)

※ 캡슐 제품의 경우, 동 시험과는 별도로 캡슐 당 내용량 확인시험을 하여야 하며, Ws = 시험원액을 취한 부피(mL) × 시험원액 농도[(1캡슐 당 내용량(mg/캡슐) × 캡슐 수) ÷ 100mL]

molPL = 시험용액 중 개별 인지질의 mole수(mol)

= (IPL x AIS x molIS) / (IIS x APL)

IIS = 내부표준물질의 피크면적

IPL = 개별 인지질의 피크면적

AIS = 내부표준물질의 분자당 인의 원자수(atoms/mol)

APL = 개별 인지질의 분자당 인의 원자수(atoms/mol)

molIS = 시험용액 중 내부표준물질의 mole수(mol)

= (WIS x CIS) / (MWIS x 100)

WIS  = 시험용액에 첨가한 내부표준물질의 량(g)

CIS  = 내부표준물질의 순도(%)

MWIS = 내부표준물질의 분자량, 326.3g/mol

그림 1. 크릴유의 인 핵자기공명(31P NMR) 스펙트럼

표 1.  각 인지질 성분들의 chemical shift 및 분자량

성분	Chemical shift (ppm)	분자량 (g/mol)	분자당 인의 수
TPP(Triphenyl phosphate, internal STD)	-17.8	326.3	1
PC(Phosphatidylcholine)	-0.93	791	1
1-LPC(1-Lysophosphatidylcholine)	-0.49	534.5	1
2-LPC(2-Lysophosphatidylcholine)	-0.39	534.5	1
PE(Phosphatidylethanolamine)	-0.19	770	1
	-0.06	1032	1
NAPE(N-acyl-phosphatidylethanolamine)
LPE(Lysophosphatidylethanolamine)	0.29	492.5	1
기타		800

나. 액체크로마토그래프에 의한 정량(제2법)

1) 시험법 적용범위

크릴유의 제조·가공기준 확인시 제1법을 대체하여 사용할 수 있다. 이때 제2법에 따른 판정이 제1법에 따른 판정과 상이한 경우에는 제1법의 결과를 우선한다.

2) 분석원리

시료 중의 인지질을 클로로포름과 메탄올로 추출 후 질소로 농축한 후 헥산과 이소프로판올로 녹여 순상칼럼으로 분리한 후 액체크로마토그래프/증기화광산란검출기를 이용하여 정량하는 방법이다.

3) 장치 및 기구

가) 장치

액체크로마토그래프/증기화광산란검출기(LC/ELSD)

나) 기구

(1) 유리 메디아병(250 mL)

(2) 유리바이알

(3) 부피플라스크(10 mL, 100 mL 및 200 mL)

(4) 멤브레인 필터(0.45 μm)

(5) 1 mL 케미칼실험용 일회용 주사기(all plastic syringe)

(6) 칼·가위 등의 커팅 도구

(7) 유리섬유 시린지 필터

(8) 교반기(vortex mixer)

(9) 원심분리기

(10) 질소농축기

(11) 분석저울(0.0001g 까지 측정 가능)

4) 시약 및 시액

가) 시약

(1) 증류수 : 3차 증류수

(2) n-헥산 : HPLC grade

(3) 이소프로판올 : HPLC grade

(4) 아세트산

(5) 트리에틸아민

(6) 클로로포름 : HPLC grade

(7) 메탄올 : HPLC grade

(8) 포스파티딜콜린(Phosphatidylcholine, PC)

: CAS No. 97281-47-5 또는 이와 동등한 것

(9) 리소포스파티딜콜린(1-palmitoyl-2-hydroxy-sn-glycero-3-phosphocholine, LPC)

: CAS No. 17364-16-8 또는 이와 동등한 것

(10) 포스파티딜에탄올아민(Phosphatidylethanolamine, PE)

: CAS No. 39382-08-6 또는 이와 동등한 것

(11) N-아실-포스파티딜에탄올아민(N-acyl-Phosphatidylethanolamine, NAPE)

: European Pharmacopoeia (EP) Reference Standard 또는 이와 동등한 것

나) 표준용액

(1) 표준원액 : 포스파티딜콜린, 리소포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, N-아실-포스파티딜에탄올아민을 각각 100 mg을 n-헥산/이소프로판올 혼합액(8:2, v/v) 100 mL에 녹여 조제한다.

(2) 표준용액 : 표준원액을 n-헥산/이소프로판올 혼합액(8:2, v/v)로 적절히 희석하여 표준용액으로 한다.

다) 시액

(1) n-헥산/이소프로판올 혼합액 : n-헥산과 이소프로판올을 8:2의 부피비로 혼합하여 조제한다.

(2) 클로로포름/메탄올 혼합액 : 클로로포름, 메탄올을 2:1의 부피비로 혼합하여 조제한다.

(3) 이동상 A : n-헥산, 이소프로판올, 아세트산 및 트리에틸아민을 81.42:17.00:1.50:0.08의 부피비로 혼합한 후 0.45 μm 여지로 여과하고 탈기하여 조제한다.

(4) 이동상 B : 이소프로판올, 증류수, 아세트산, 트리에틸아민을 84.42:14.00:1.50:0.08의 부피비로 혼합한 후 0.45 um 여지로 여과하고 탈기하여 조제한다.

5) 시험용액 조제

가) 시험원액 조제

(1) 액상 시료

액상의 시료 약 2,500 mg을 취하여 100 mL 부피플라스크에 넣은 후 n-헥산/이소프로판올 혼합액을  넣어 녹인 뒤,  n-헥산/이소프로판 혼합액으로 정용한 것을 시험원액으로 한다.

(2) 캡슐 제품

캡슐 제품인 경우, 크릴유 5g 정도에 해당하는 수의 캡슐을 핀셋, 커팅도구를 이용해 반으로 자른 뒤 유리 메디아병에 넣고, 핀셋, 면도칼(커팅도구)에 묻은 시료는 클로로포름/메탄올 혼합용액으로 씻어내어 유리 메디아병에 합친다. 50 mL의 클로로포름/메탄올 혼합용액을 추가하여 넣고 내용물을 완전히 용해시킨 후, 100 mL 부피플라스크에 옮긴다. 유리병, 빈 캡슐 등을 30 mL의 클로로포름/메탄올 혼합용액으로 씻어내어 부피플라스크에 합치고 클로로포름/메탄올 혼합용액으로 부피플라스크의 표선까지 채워 균일하게 섞은 것을 시료액(★)으로 한다. 유리바이알에 크릴유 시료액(약 5 mL)을 넣은 후 질소 농축기를 이용하여 용매를 완전히 제거한다. 용매가 제거된 유리바이알에  n-헥산/이소프로판올 혼합용액을 소량 넣고 녹인 후, 10 mL 부피플라스크로 옮긴 뒤 n-헥산/이소프로판올 혼합용액으로 정용한 것을 시험원액(☆)으로 한다.

나) 시험용액 조제

시험원액을 0.45 μm 나일론 멤브레인 필터로 여과한 여과액을 포스파티딜에탄올아민, N-아실-포스파티딜에탄올아민의 시험용액으로 하고, 여과액을 n-헥산/이소프로판올 혼합용액으로 2배 희석하여 리소포스파티딜콜린의 시험용액으로 하고, 여과액을 n-헥산/이소프로판올 혼합용액으로 20배 희석하여 포스파티딜콜린의 시험용액으로 한다.

6) 시험방법

가) 액체크로마토그래프 조건

(1) 칼럼 : Diol-bounded silica column(4.0 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 55℃

(3) Drift tube Temp. : 50℃

(4) 증기화광산란검출기 Pressure(N2 gas) : 2.5 bar

(5) 유  속 : 1.0 mL/min

(6) 주입량 : 20 μL

(7) 이동상

(가) 이동상 A : n-헥산:이소프로판올:아세트산:트리에틸아민(81.42:17.00:1.50:0.08, v/v/v/v)

(나) 이동상 B : 이소프로판올:증류수:아세트산:트리에틸아민(84.42:14.00:1.50:0.08, v/v/v/v)

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
5	80	20
8.5	60	40
15.0	0	100
17.5	95	5
34.0	95	5

나) 검량선 작성

각 표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프/증기화광산란검출기에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램 상의 각 피크 면적을 구하고 검량선을 작성한다.

7) 정량시험

표준용액과 시험용액의 크로마토그램상의 피크의 머무름 시간과 일치할 때 면적을 검량선에 대입하여 시험용액 중의 각 인지질(포스파티딜콜린, 리소포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, N-아실-포스파티딜에탄올아민)의 농도(mg/mL)를 구한다.

가) 인지질 함량(wt/wt%) = [포스파티딜콜린 함량(wt/wt%) + 리소포스파티딜콜린 함량(wt/wt%) + 포스파티딜에탄올아민 함량(wt/wt%) + N-아실-포스파티딜에탄올아민 함량(wt/wt%)] × 1.07

나) 각 인지질 함량(wt/wt%) = C × V/S × 희석배수 × [eqn: {100} over {1000}]

C : 검량선으로부터 얻은 시료의 각 인지질 농도(mg/mL)

V : 시험원액(☆)의 최종부피 (10 mL)

희석배수 : N-아실-포스파티딜에탄올아민(1),  리소포스파티딜콜린(2), 포스파티딜콜린(20)

S : 시료 채취량 (g)

※ 캡슐 제품의 경우, 동 시험과는 별도로 캡슐 당 내용량 확인 시험을 하여야 하며, S = 시료액(★) 취한 부피(5 mL) × 시료액 농도[(1캡슐 당 내용량(g/캡슐) × 캡슐 수) ÷ 100mL]

[eqn: {100} over {1000}] : 단위환산

<신  설>

6.3.2.3.2 리놀레산

가. 시험법 적용범위

크릴유에 적용한다.

나. 분석원리

유지를 메탄올성 수산화나트륨용액으로 처리하여 알칼리염을 만든 후 트리플루오로보란메탄올 용액을 가하고 가열하여 에스테르화 한다. 생성된 지방산에스테르를 이소옥탄(isooctane)에 녹여 분석을 행한 후 크로마토그램의 지방산 피크의 총 면적 중 리놀레산(linoleic acid, C18:2) 피크의 면적 비율을 구하여 결과를 산출한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프 : 불꽃이온화검출기(Flame Ionization Detector, FID)

2) 교반기(vortex mixer)

3) 가열기(heating block)

4) 질소농축기

라. 시약 및 시액

1) 14% 트리플루오로보란메탄올 용액(125 g BF3/L MeOH)

2) 메탄올성 수산화나트륨용액(0.5 N) : 수산화나트륨 2 g을 메탄올 100 mL로 조제한다. 장시간 방치하는 경우 흰 침전(탄산나트륨)이 생길 수 있으나 이는 무시하여도 된다.

3) 이소옥탄

4) 무수황산나트륨

5) 포화 염화나트륨용액

6) 내부표준용액 : 내부표준용액의 농도는 지방산 표준용액의 감응도(피크의 면적 또는 높이)보다 높게 조절한다.

(가) 지방산 사용시 : Triundecanoin(C11:0)을 이소옥탄에 녹여 사용한다.

(나) 지방산 메틸 에스테르 사용시 : Undecanoic acid methyl ester를 이소옥탄에 녹여 사용한다.

7) 표준용액의 조제

(가) 지방산 사용 시 : 분석하고자 하는 지방산 0.01 g을 이소옥탄 10 mL에 녹여 표준원액으로 한다(1 mg/mL). 지방산 표준원액을 적절한 농도로 희석한 표준용액 1 mL를 유리 튜브에 취하고 내부표준용액 1 mL를 첨가한다. (단, 표준용액과 시험용액의 내부표준물질 농도가 동일한 농도가 되도록 조절한다.) ★이어 0.5 N 메탄올성 수산화나트륨용액 1.5 mL를 가하고 질소를 불어넣은 후 즉시 뚜껑을 덮고 혼합한다. 이어 100℃ heating block에서 약 5분간 가온한다. 이를 냉각한 후 14% 트리플루오로보란메탄올 용액 2 mL를 가하고 다시 질소를 불어넣은 후 즉시 뚜껑을 덮고 혼합하고 100℃에서 30분간 가온한다. 이어 30～40℃로 냉각하여 이소옥탄 1 mL를 가하여 질소를 불어넣은 후 뚜껑을 덮고 이 온도에서 30초간 격렬히 진탕한다. 다음 즉시 포화 염화나트륨용액 5 mL를 가하고 질소를 불어넣은 후 뚜껑을 덮고 진탕한다. 상온으로 냉각한 후 수층으로부터 분리된 이소옥탄층을 무수황산 나트륨으로 탈수하여 표준용액으로 한다.

(나) 개별 지방산 메틸 에스테르 사용 시 : 분석하고자 하는 지방산 메틸 에스테르를 이소옥탄에 녹여 표준원액으로 한다(1 mg/mL). 표준원액을 적절한 농도로 희석한 용액 1 mL에 바) 내부표준용액 (2) 1 mL를 첨가하여 표준용액으로 한다.

마. 시험용액의 조제

검체 약 25 mg을 유리 튜브에 정밀히 취하고 내부표준용액 1 mL를 첨가한다. 7) 표준용액 (가)의 ★ 이하에 따라 시험하여 시험용액으로 한다.

바. 기체크로마토그래프 조건

1) 칼럼 : SP-2560 (100 m ⨉ 0.25 mm ⨉ 0.2 μm) 또는 이와 동등한 것

2) 주입부온도 : 225℃

3) 칼럼온도 : 100℃에서 4분간 유지한 후 3℃/min의 비율로 240℃까지 온도를 상승시키고 이후 15분 이상 유지한다.

4) 검출기온도 : 285℃

5) 유량 : 헬륨 0.75 mL/min

6) split ratio : 200 : 1

사. 지방산 분석

리놀레산 표준용액 1～2 μL를 주입한 후 RRT (Relative Retention Time; 내부표준물질에 대한 각 지방산들의 머무름 시간의 비)를 사용하여 리놀레산 피크의 위치를 확인한다. 이어 시험용액 1～2 μL를 주입하여 후 얻어진 크로마토그램에서 확인되는 모든 지방산 피크의 면적을 합한 총 피크 면적과 내부표준물질, 리놀레산 피크의 면적을 각각 구한 후 다음의 식에 따라 총 지방산 중 리놀레산의 비율을 구한다.

% 지방산	=	Ax × 100
		Atotal - Ai

Atotal : 크로마토그램에서 확인 된 모든 지방산 피크 면적의 합

Ai : 크로마토그램 중 내부표준물질 피크의 면적

Ax : 크로마토그램 중 리놀레산 피크의 면적

6.4 ∼ 6.9 (생  략)

6.10 유가공품

6.10.1 ∼ 6.10.8 (생  략)

6.10.9 치즈류

가. 자연치즈

1) ∼ 4) (생  략)

나. (생  략)

6.10.10 ∼ 6.14 (생  략)

7. (생  략)

8. (생  략)

9. ∼ 12. (생  략)

6.4 ∼ 6.9 (현행과 같음)

6.10 유가공품

6.10.1 ∼ 6.10.8 (현행과 같음)

6.10.9 치즈류

가. 치즈

1) ∼ 4) (현행과 같음)

나. (현행과 같음)

6.10.10 ∼ 6.14 (현행과 같음)

7. (현행과 같음)

8. (별지와 같음)

9. ∼ 12. (현행과 같음)

<신  설>

제9. 재검토기한

식품의약품안전처장은 이 고시에 대하여 ｢훈령·예규 등의 발령 및 관리에 관한 규정｣에 따라 2022년 1월 1일 기준으로 매 3년이 되는 시점(매 3년째의 12월 31일까지를 말한다)마다 그 타당성을 검토하여 개선 등의 조치를 하여야 한다.

[별표 1] ∼ [별표 8] (생   략)

[별표 1] ∼ [별표 8] (현행과 같음)