식품의약품안전처 공고 제2016-7호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안)

행정예고

2016. 1. 6.

식품의약품안전처

식품의약품안전처 공고 제2016-7호

｢식품의 기준 및 규격｣ (식품의약품안전처고시 제2015-78호, 2015. 10. 29.)을 일부 개정함에 있어 국민에게 미리 알려 의견을 수렴하고자 그 취지, 개정 이유 및 주요 내용을 ｢행정절차법｣ 제46조에 따라 다음과 같이 공고합니다.

2016년 1월 6일

식품의약품안전처장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안) 행정예고

1. 개정 이유

식품조사처리기술을 조미건어포류에 살균의 목적으로 사용할 수 있도록 허용하여 조미건어포류를 위생적으로 생산할 수 있는 기반을 마련하고, 면류, 장류, 조미식품, 드레싱류, 젓갈류, 주류의 위생지표균 규격에 통계적 개념을 도입하여 미생물 규격을 과학적·합리적으로 관리하고자 함

국내외에서 사용되는 농약의 잔류허용기준을 개정하고 관련 시험법을 개정하여 식품 중 잔류물질의 안전관리를 강화하고자 함.

국내에서 허가되어 판매되고 있으나 잔류허용기준이 설정되지 않은 동물용의약품 26종의 잔류허용기준과 시험법을 신설하고, 동물용의약품 잔류물의 정의를 개정하여 검사 대상을 명확히 함으로써 식품의 안전성을 제고하고자 함.

2. 주요 내용

가. 식품조사(Food Irradiation)처리 기준 개정[안 제2. 5. 6)의 (6)]

1) 살균의 목적으로 식품조사처리를 허용하여 위생적으로 조미건어포류를 생산할 수 있는 기반 마련

2) 식품조사처리 허용대상 품목인 조류식품과 환자식을 구체적 품목으로 명확화

3) 합리적 규제 개선으로 위생적 식품공급 및 국제 기준과의 조화

나. 식품 중 미생물 기준·규격에 통계적 개념 도입[안 제5. 15. 5) (3) 및 (4), 제5. 20. 5) (3), 제5. 21-2. 5) (1) 및 (2), 제5. 21-3. 5) (2), 제5. 21-4. 5) (2), (3) 및 (4), 제5. 21-7. 5) (3), 제5. 22. 5) (2), 제5. 24. 5) (2) 및 (5), 제5. 27-1. 5) (4), (5) 및 (6) 제5. 27-2. 5) (4), (5) 및 (6)]

1) 미생물의 특성상 제품 중 오염이 균일하지 않음에도 불구하고 하나의 시료를 검사하여 판정하는 제도를 개선하기 위하여 국제식품규격위원회(Codex), 미국, EU 등 주요 외국에서 운영하고 있는 통계적 개념의 미생물 기준·규격 도입 필요

2) 면류, 혼합장, 조미식품, 드레싱류, 젓갈류, 주류의 위생지표균 규격에 통계적 개념[이군법(n, c, m) 및 삼군법(n, c, m, M)]을 도입

3) 미생물 검사의 대표성과 신뢰도가 확보됨에 따라 식품산업활성, 국민건강보호 및 수출입 시 무역마찰 감소

다. 일반시험법 개정 및 신설[안 제9. 4.1.2.2, 제9. 4.1.4.46, 제9. 4.1.4.76, 제9. 4.1.4.132, 제9. 4.1.4.181∼4.1.4.183, 제9. 5.2.2, 제9. 5.3, 제9. 8. 8.2. 8.2.2]

1) 옥사티아피프롤린 등 8종 분석법 신설 및 개정

2) 구충제 19종 및 비스테로이드성 항염증제 9종 동시 다성분 시험법 신설

3) 식품 중 겐타마이신 등 아미노글리코사이드계, 옥시테트라싸이클린 등 테트라싸이클린계 및 알벤다졸 등 벤지미다졸계 정량시험법 개정

4) 식품 중 날록손 등 26종 동물용의약품 시험법 신설

5) 식품조사처리 기준 개정에 따라 조사식품 확인시험에 조미건어포류 품목 추가

라. 농산물 중 농약 잔류허용기준 개정 및 신설[안 별표 4 중 (2) 글루포시네이트, (9) 델타메트린, (31) 마이클로뷰타닐, (45) 메티다티온, (111) 카바릴, (131) 클로르피리포스, (133) 테부코나졸, (140) 트랄로메트린, (162) 페니트로티온, (178) 폭심, (206) 클로르페나피르, (218) 디메토모르프, (228) 아족시스트로빈, (233) 펜사이큐론, (234) 펜피록시메이트, (239) 플루아지남, (242) 루페뉴론, (286) 에트리디아졸, (309) 플루톨라닐, (353) 메트코나졸, (391) 만디프로파미드, (399) 사이플루메토펜, (408) 스피네토람, (422) 펜티오피라드, (423) 피콕시스트로빈, (424) 피리플루퀴나존, (426) 아메톡트라딘, (435) 펜피라자민, (437) 플룩사피록사드, (439) 스피로테트라맷, (441) 피리벤카브, (442) 플루피라디퓨론, (450) 옥사티아피프롤린, (451) 인다지플람, (452) 아이속사플루톨]

1) 「농약관리법」에 신규 등록된 농약의 안전관리 및 수입 농산물에 농약 잔류허용기준 설정 신청에 따른 관련 기준 신설 및 개정 필요

2) 옥사티아피프롤린 등 농약 35종의 잔류허용기준 신설 및 개정

3) 농산물에 농약 잔류허용기준을 합리적으로 개정하여 국민에게 안전한 식품 공급

마. 인삼 중 농약 잔류허용기준 신설[안 별표 5 중 (80) 델타메트린, (81)펜피라자민]

1) 「농약관리법」상 인삼에 사용할 수 있는 농약이 확대되어 해당 농약의 잔류허용기준 신설 필요

2) 델타메트린 등 2종의 농약 잔류허용기준 신설

3) 농약 잔류허용기준 신설을 통하여 국민에게 안전한 식품을 공급하고자 함

바. 식품 중 동물용의약품 잔류허용기준 신설, 동물용의약품 명칭, 기준 적용 식품명 및 잔류물의 정의 개정 [안 별표 7 중 (5) 다노플록사신, (16) 벤질페니실린/프로케인벤질페니실린, (22) 아목시실린, (23) 알벤다졸, (25) 암피실린, (37) 티아벤다졸, (41) 트리클라벤다졸, (44) 페반텔/펜벤다졸/옥스펜다졸, (45) 플루벤다졸, (80) 나프실린, (82) 디클록사실린, (84) 마보플록사신, (85) 세파세트릴, (86) 세파졸린, (87) 세파피린, (88) 세팔렉신, (89) 세팔로니움, (90) 세포페라존, (91) 세푸록심, (92) 세프퀴놈, (93) 오비플록사신, (94) 옥시벤다졸, (96) 카나마이신, (97) 클라불라닌산, (98) 클록사실린, (99) 키타사마이신, (114) 메벤다졸, (120) 설피린/디피론/메타미졸, (148) 알트레노제스트 (149)날록손 , (150) 요힘빈, (151)치오펜네이트 (152) 비치오놀, (153) 폴리믹신 비, (154) 페노뷰카브, (155) 페노티아진, (156) 푸마길린, (157) 미노싸이클린, (158) 파로모마이신, (159) 니스타틴, (160) 메토미데이트, (161) 부파바쿠온, (162) 아르사닐산, (163) 나이트록소린, (164) 데하이드로콜산, (165) 안트라닐산, (166) 메텐아민, (167) 토노포스판, (168) 세파드록실, (169) 수산화브롬글루타민 마그네슘염, (170) 아미노메탄설폰산, (171) 염산메틸에페드린, (172) 플루메타손, (173) 하이드록시디메틸피리미딘]

1) 동물용의약품으로 허가되어 판매되고 있으나 잔류허용기준이 없는 동물용의약품에 대한 기준 신설 및 동물용의약품 명칭, 기준 적용 식품명, 잔류물의 정의 일부 개정 필요

2) 알트레노제스트 등 26종에 대한 잔류허용기준 신설

3) 벤질페니실린 및 설피린 동물용의약품 명칭 개정

4) 알벤다졸, 티아벤다졸 등 벤지미다졸계 구충제 잔류물의 정의 개정

5) 식품명 중 유(乳), 알(卵)의 한자어 병기 삭제

6) 동물용의약품 잔류허용기준을 확대하여 국민에게 안전한 식품을 공급하고, 동물용의약품 명칭, 기준 적용 식품명, 잔류물의 정의를 개정하여 시험검사의 신뢰도 제고

3. 의견 제출

「식품의 기준 및 규격」 일부개정고시(안)에 대하여 의견이 있는  단체 또는 개인은 2016년 3월 6일까지 다음 사항을 기재한 의견서를 식품의약품안전처장(우편번호 : 28159, 주소 : 충청북도 청주시 흥덕구 오송읍 오송생명2로 187 오송보건의료행정타운 식품의약품안전처, 참조 : 식품기준과, 전화 043-719-2417, 팩스 043-719-2400)에게 제출하여 주시기 바랍니다.

가. 예고사항에 대한 항목별 의견(찬․반 여부와 그 이유)

나. 성명(단체의 경우 단체명과 그 대표자의 성명), 주소 및 전화번호

다. 기타 참고사항

식품의약품안전처 고시 제2015-00호

「식품위생법」 제7조제1항에 따른 「식품의 기준 및 규격」(식품의약품안전처 고시 제2015-78호, 2015. 10. 29.)을 다음과 같이 개정 고시합니다.

2016년  00월  00일

식품의약품안전처장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안) 행정예고

식품의 기준 및 규격 일부를 다음과 같이 개정한다.

제2. 5. 6)의 (6)을 다음과 같이 한다.

품 목	조사목적	선량(kGy)
감자 양파 마늘	발아억제 발아억제 발아억제	0.15 이하 0.15 이하 0.15 이하
밤	살충․발아억제	0.25 이하
버섯(건조포함)	살충․숙도조절	1 이하
난분 곡류(분말포함), 두류(분말포함) 전분	살균 살균․살충 살균	5 이하 5 이하 5 이하
건조식육 어류분말, 패류분말, 갑각류분말 된장분말, 고추장분말, 간장분말 건조채소류(분말포함) 효모식품, 효소식품 클로렐라제품, 스피루리나제품 알로에분말 인삼(홍삼 포함) 제품류 조미건어포류	살균 살균 살균 살균 살균 살균 살균 살균 살균	7 이하 7 이하 7 이하 7 이하 7 이하 7 이하 7 이하 7 이하 7 이하
건조향신료 및 이들 조제품 복합조미식품 소스류 침출차 분말차 특수의료용도등식품	살균 살균 살균 살균 살균 살균	10 이하 10 이하 10 이하 10 이하 10 이하 10 이하

제5. 15. 5)의 (3)을 삭제하고 (4) 및 (5)를 각각 (3) 및 (4)로 하며, (3) 및 (4)를 각각 다음과 같이 한다.

5) 규격

(3) 대장균 : n=5, c=1, m=0, M=10(주정처리제품에 한한다.)

(4) 대장균군 : n=5, c=1, m=0, M=10(살균제품에 한한다.)

제5. 20. 5)의 (3)을 다음과 같이 한다.

5) 규격

(3) 대장균군 : n=5, c=1, m=0, M=10[혼합장(살균제품)에 한한다.]

제5. 21-2. 5)의 (1) 및 (2)를 다음과 같이 한다.

5) 규격

(1) 대장균군 : n=5, c=1, m=0, M=10

(2) 세균수 : n=5, c=0, m=0(멸균제품에 한한다.)

제5. 21-3. 5)의 (2) 및 6)의 (2)를 다음과 같이 한다.

5) 규격

(2) 대장균군 : n=5, c=1, m=0, M=10

6) 시험방법

(2) 대장균군

제9. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.7 대장균군에 따라 시험한다.

제5. 21-4. 5) 및 6)의 (2) 및 (3)을 각각 다음과 같이 하고, (4)를 각각 다음과 같이 신설한다.

5) 규격

(2) 세균수 : n=5, c=0, m=0(멸균제품에 한한다.)

(3) 대장균군 : n=5, c=1, m=0, M=10(살균제품에 한한다.)

(4) 대장균 : n=5, c=1, m=0, M=10(살균제품은 제외한다.)

6) 시험방법

(2) 세균수

제9. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.5.1 일반세균수에 따라 시험한다.

(3) 대장균군

제9. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.7 대장균군에 따라 시험한다.

(4) 대장균

제9. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.8 대장균에 따라 시험한다.

제5. 21-7. 5)의 (3)을 다음과 같이 한다.

5) 규격

(3) 대장균 : n=5, c=2, m=0, M=10

제5. 22. 5)의 (2)를 다음과 같이 한다.

5) 규격

(2) 대장균군 : n=5, c=1, m=0, M=10

제5. 24. 5)의 (2) 및 (5)를 다음과 같이 한다.

5) 규격

(2) 대장균군 : n=5, c=1, m=0, M=10(액젓, 조미액젓에 한한다.)

(5) 대장균 : n=5, c=1, m=0, M=10(액젓, 조미액젓은 제외한다.)

제5. 27-1. 5) 및 6)의 (4)를 각각 다음과 같이 하고 (5) 및 (6)을 다음과 같이 각각 신설한다.

5) 규격

(4) 보존료 : 검출되어서는 아니된다.

(5) 대장균군 : n=5, c=2, m=0, M=10(살균제품에 한한다.)

(6) 대장균 : n=5, c=2, m=0, M=10(살균제품은 제외한다.)

6) 시험방법

(4) 보존료

제9. 일반시험법 2.1 보존료에 따라 시험한다.

(5) 대장균군

제9. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.7 대장균군에 따라 시험한다.

(6) 대장균

제9. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.8 대장균에 따라 시험한다.

제5. 27-2. 5) 및 6)의 (4)를 각각 다음과 같이 하고 (5) 및 (6)을 다음과 같이 각각 신설한다.

5) 규격

(4) 보존료 : 검출되어서는 아니된다.

(5) 대장균군 : n=5, c=2, m=0, M=10(살균제품에 한한다.)

(6) 대장균 : n=5, c=2, m=0, M=10(살균제품은 제외한다.)

6) 시험방법

(4) 보존료

제9. 일반시험법 2.1 보존료에 따라 시험한다.

(5) 대장균군

제9. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.7 대장균군에 따라 시험한다.

(6) 대장균

제9. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.8 대장균에 따라 시험한다.

제9. 4.1.2.2를 다음과 같이 개정한다.

4.1.2.2 다종농약다성분 분석법(Multi class pesticide multiresidue methods)-제2법

1) 시험법 적용범위

곡류, 서류, 콩류, 견과종실류, 과일류, 채소류, 버섯류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 아세토니트릴 또는 아세톤으로 추출한 다음, 기체크로마토그래프 측정농약은 플로리실 및 카본 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 측정하고 액체크로마토그래프 측정농약은 아미노프로필 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 측정한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프：전자포획검출기(electron capture detector), 질소․인 검출기(NPD) 또는 불꽃광도검출기(FPD), 질량분석기(MS 또는 MS/MS)

나) 액체크로마토그래프：Post-column derivatization system, 형광검출기(FLD), 자외부흡광검출기(UV photometric detector), 질량분석기(MS 또는 MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매：잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

나) 일회용 카트리지：플로리실(1 g), 카본(500 mg) 및 아미노프로필(1 g) 등의 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지

다) 표준원액：각 농약의 표준품을 유기용매에 녹여 표준원액으로 사용한다.

라) 표준용액：표준원액을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.

마) 기타시약：특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 추출

(1) 아세토니트릴 추출법

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 50 g, 채소류, 과일류, 서류 및 견과종실류는 약 1 kg을 대형분쇄기(Cutter mixer)에 넣고 분쇄한 50 g, 차는 10 g)를 정밀히 달아 혼합추출분쇄기(Omni mixer)병에 넣고(곡류 및 콩류의 경우 물 30 mL를 넣어 2시간 방치, 차의 경우 물 40 mL를 넣어 2시간 방치) 아세토니트릴 100 mL를 넣은 후 혼합추출분쇄기로 2～3분간 균질화한다. 이를 여지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과한다. 여액을 염화나트륨 10～15 g이 들어있는 500 mL 분액깔때기에 옮기고 마개를 막은 후 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한다. 아세토니트릴층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수한 후 별도의 아세토니트릴을 가하여 최종 부피가 100 mL가 되게 한다. 아세토니트릴층 20 mL를 각각 취하고 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하여 용매를 날려버린다. ★ 잔류물을 기체크로마토그래프 분석 대상 농약의 경우 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL로 용해하고, 액체크로마토그래프 분석 대상 농약은 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL로 용해한다.

(2) 아세톤 추출법

검체[곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 50 g. 채소류, 과일류, 서류 및 견과종실류는 약 1 kg을 대형분쇄기(Cutter mixer)에 넣고 분쇄한 50 g, 차는 10 g]를 정밀히 달아 혼합추출분쇄기(Omni mixer)병에 넣고(곡류 및 콩류의 경우 물 30 mL를 넣어 2시간 방치, 차의 경우 물 40 mL를 넣어 2시간 방치) 아세톤 100 mL를 넣은 후 균질기로 2～3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과한다. 여과액을 1 L 분액깔때기로 옮기고 포화염화나트륨 용액 50 mL, 물 100 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 가하고 마개를 막은 후 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치하고 디클로로메탄층을 취한다. 다시 디클로로메탄 50 mL로 상기의 과정을 되풀이 하여 여액을 합하고 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수한 후 별도의 디클로로메탄을 가하여 최종 부피가 100 mL가 되게 한다. 디클로로메탄층 20 mL를 각각 취하고 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하여 용매를 날려버린다. ★ 잔류물을 기체크로마토그래프 분석 대상 농약의 경우 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL에 녹이고, 액체크로마토그래프 분석 대상 농약은 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL로 용해한다.

※ 추출은 상기 (1) 또는 (2) 중 선택하여 사용함.

주1) 용매추출액을 저온에서 정치하면 층분리가 빨라질 수 있음.

주2) 곡류, 콩류, 견과종실류 등 지방성 검체의 경우 ★ 까지 시험하고 잔류물에 미리 아세토니트릴(또는 메탄올)로 포화시킨 헥산 30 mL를 건고물에 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴(또는 메탄올) 30 mL씩으로 2회 분배 추출하여 지방을 제거한다. 2회 추출된 아세토니트릴(또는 메탄올) 층을 합친 후 40℃에서 감압 농축하고 잔사(residue)를 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL(기체크로마토그래프 측정 농약) 및 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL(액체크로마토그래프 측정 농약)에 완전히 녹인다.

나) 정제

(1) 기체크로마토그래프 측정 농약

미리 플로리실 카트리지(Florisil cartridge)에 헥산 5 mL를 2∼3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이 카트리지에 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 위와 같은 방법으로 유출하여 버린다. 이어서 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 초당 1～2방울 정도의 속도로 용출시켜 시험관에 받는다. 다시 카트리지가 용매에 젖어 있는 상태에서 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 용출하여 동일 시험관에 모은다. 이를 미리 헥산 5 mL와 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL로 활성화시킨 카본 카트리지에 용출액을 넣고 초당 1∼2방울 정도의 속도로 용출시켜 시험관에 받는다. 추가로 20% 아세톤 함유 헥산 15 mL로 용출시켜 동일 시험관에 모은다. 용출액은 40℃ 이하 수욕상에서 질소 또는 공기를 낮은 유속으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 20% 아세톤함유 헥산에 녹여서 일정량으로 한 후 막 여과지(membrane filter)(PTFE 0.45 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다. (단, 카본 카트리지는 색소 등 방해물질 제거에 필요시에 사용한다.)

주3) 정제과정 중에는 모든 카트리지의 충전제가 마르지 않도록 해야 한다.

주4) 기체크로마토그래프 측정 농약을 전처리할 때 항상 감압농축하기 전에 2% 디에틸렌글리콜(Diethylen glycol) 함유 아세톤 0.2 mL를 첨가한다.

(2) 액체크로마토그래프 측정 농약

미리 아미노프로필 카트리지에 디클로로메탄 5 mL를 2∼3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 1∼2 방울/초의 속도로 용출시켜 시험관에 받는다. 다시 카트리지가 용매에 젖어 있는 상태에서 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 7 mL를 유출하여 동일 시험관에 합친다. 유출액은 40℃ 이하 수욕 상에서 질소 또는 공기를 낮은 유속으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 아세토니트릴에 녹여 일정량으로 한 후 막 여과지(membrane filter)(PTFE 0.45 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.(단, 카본 카트리지는 색소 등 방해물질 제거에 필요시에 사용한다)

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프 측정조건

(1) GC-ECD, GC-NPD

(가) 칼럼：DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm), DB-17(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 운반기체(carrier gas) 및 유량：N2, 1.0 mL/min

(다) 칼럼오븐온도：80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 7℃/min의 비율로 250℃까지 온도를 상승시키고 5℃/min의 비율로 280℃까지 상승시켜  20분 이상 유지한다.

(라) 주입부：split mode(20 : 1)

(마) 검출기온도：280℃

(2) GC-FPD

(가) 칼럼：DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm), DB-17(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 운반기체(carrier gas) 및 유량：N2, 1.0 mL/min

(다) 오븐 온도：80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 7℃/min의 비율로 250℃까지 온도를 상승시키고 5℃/min의 비율로 280℃까지 상승시켜 20분이상 유지한다.

(라) 주입부：splitless mode

(마) 검출기온도：280℃

(3) GC-MS/MS(GC-MS 포함)

(가) 칼럼：DB-5ms(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 운반기체(carrier gas) 및 유량：He, 0.8 mL/min

(다) 오븐 온도：70℃에서 시험용액을 주입하고 3분간 유지한 후 20℃/min의 비율로 180℃까지 온도를 상승시키고 5℃/min의 비율로 300℃까지 상승시켜 7분 이상 유지한다.

(라) 주입부：splitless mode

(마) 인터페이스 온도：300℃

(바) Solvent delay time：4 min

(사) Collision gas : Ar

(아) Collision energy 및 MRM : 주7) GC-MS/MS 분석 대상(283종) 및 상세 조건 참조

나) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) HPLC-FLD(Post-derivatization 포함)

(가) 칼럼：C18(3.9 mm × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 검출기：Excitation 340 nm, Emission 455 nm

(다) 이동상：물 및 메탄올

- 메탄올：물(3：7)의 혼합액에서 메탄올：물(7：3)의 혼합액으로 23분간 농도균배한 후 5분 이상 흘려보낸다.

(라) 이동상 유량：0.8 mL/min

(마) Post Reaction Pump 유량：0.5 mL/min(NaOH 0.25 mL/min, OPA 0.25 mL/min) 또는 기타 최적조건

(2) HPLC-UVD

(가) 칼럼：C18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 등등한 것

(나) 검출기：자외부흡광검출기(UV photometric detector)(254 nm)

(다) 이동상：물 및 아세토니트릴

- 아세토니트릴/물 혼합액(20/80, v/v)에서 (80/20, v/v)의 혼합액으로 40분간 농도균배한 후 10분 이상 흘려보낸다.

- 메탄올/물(35/65, v/v)에서 (90/10, v/v)의 혼합액으로 40분간 농도균배한 후 10분 이상 흘려보낸다.

※ 이동상의 조건은 상기 두 가지 중 선택하여 사용함

(라) 이동상 유량：1.0 mL/min

(3) LC-MS/MS(LC-MS 포함)

(가) 칼럼 : C18(2.0 mm × 100 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 이동상 : A(0.1% 포름산과 10 mM 아세트산암모늄 함유한 물 용액), B(0.1% 포름산과 2 mM 아세트산암모늄 함유한 아세토니트릴 용액) 또는 이와 동등한 것

- A/B(95/5, v/v)에서 (5/95, v/v)의 혼합액으로 20분간 농도균배한 후 10분 이상 흘려보낸다.

(다) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(라) 칼럼 온도 : 40℃

(마) 주입량 : 2 μL

(바) 이온화 : ESI positive-ion 또는 negative-ion mode

7) 정성시험

위의 조건에서 시험할 때 시험결과는 어느 측정조건에서도 표준품과 일치하여야 한다.

주5) GC-MS(MS/MS 포함) 및 LC-MS(MS/MS 포함) 상의 머무름시간(retention time) 및 질량분석 스펙트럼으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 정량한다.

주6) 정량시험은 단일 표준품으로 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

9) 이 시험법의 분석 대상농약 및 검출기

가) 기체크로마토그래프 분석 대상(207종)

1	Acrinathrin(ECD)	2	Aldrin(ECD)	3	Ametryn(NPD)
4	Anilofos(NPD,ECD)	5	Atrazine(NPD)	6	Azaconazole(NPD)
7	Azinphos-ethyl(FPD)	8	Azinphos-methyl(ECD,NPD)*	9	α-BHC(ECD)
10	β-BHC(ECD)	11	γ-BHC(ECD)	12	δ-BHC(ECD)
13	Bifenthrin(ECD)	14	Binapacryl(ECD)	15	Bromacil(ECD)
16	Bromobutide(NPD)	17	Bromophos-methyl(FPD)	18	Bromopropylate(ECD)
19	Bromoxynil(ECD)	20	Bupirimate(NPD)	21	Butafenacil(ECD)
22	Cadusafos(NPD,FPD)	23	Captafol(ECD)*	24	Captan(ECD)*
25	Carbophenothion(ECD,NPD)	26	Chinomethionat(ECD,NPD)	27	Chlordane(ECD)
28	Chlorfenapyr(NPD,FPD)	29	Chloridazon(ECD)	30	Chlorobenzilate(ECD)
31	Chlorothalonil(ECD)	32	Chlorpyrifos(ECD,NPD)*	33	Chlorpyrifos-methyl(ECD,NPD)
34	Chlorthal-dimethyl(ECD)	35	Clomeprop(ECD)	36	Cyanazine(ECD)
37	Cyanophos(NPD)	38	Cyflufenamid(ECD)*	39	Cyfluthrin(ECD)*
40	Cyhalothrin(ECD)*	41	Cypermethrin(ECD)*	42	Cyproconazole(NPD)
43	Cyprodinil(NPD)*	44	p,p-DDD(ECD)	45	p,p-DDE(ECD)
46	o,p-DDT(ECD)	47	p,p-DDT(ECD)	48	Deltamethrin(ECD)*
49	Diazinon(ECD,NPD)	50	Dichlofluanid(ECD,NPD)*	51	Dichlorvos(NPD,FPD)*
52	Dicloran(ECD)	53	Dicofol(ECD)	54	Dieldrin(ECD)*
55	Diethofencarb(NPD)	56	Diflufenican(ECD)	57	Dimepiperate(ECD,NPD,FPD)
58	Dimethachlor(ECD)	59	Dimethenamid(NPD,ECD)	60	Dimethoate(ECD,NPD)
61	Dimethylvinphos(NPD,FPD,ECD)	62	Diniconazole(ECD)	63	Diphenamid(NPD)
64	Diphenylamine(NPD)	65	Dithiopyr(ECD)	66	Edifenphos(ECD,NPD)
67	α-Endosulfan(ECD)	68	β-Endosulfan(ECD)	69	Endosulfan-sulfate(ECD)
70	Endrin(ECD)	71	EPN(ECD, NPD)	72	Esprocarb(ECD,NPD)
73	Ethion(ECD,NPD)	74	Ethoprophos(ECD,NPD)	75	Etoxazole(NPD)
76	Etrimfos(ECD,NPD)	77	Fenamidone(ECD,NPD)	78	Fenarimol(ECD,NPD)*
79	Fenazaquin(NPD,FPD)*	80	Fenbuconazole(ECD,NPD)*	81	Fenitrothion(ECD,NPD)
82	Fenobucarb(NPD)	83	Fenothiocarb(NPD)*	84	Fenoxanil(ECD,NPD)
85	Fenoxycarb(NPD)	86	Fenpropathrin(ECD,NPD)*	87	Fenthion(ECD,NPD)*
88	Fenvalerate(ECD)*	89	Fipronil(NPD,FPD,ECD)	90	Flonicamid(ECD)*
91	Fluacrypyrim(ECD)	92	Fludioxonil(NPD)	93	Flufenacet(ECD)
94	Flufenoxuron(NPD)	95	Flumiclorac-pentyl(ECD)	96	Flupyrazofos(NPD,FPD)**
97	Fluquinconazole(ECD)	98	Flusilazole(NPD)	99	Fluthiacet-methyl(ECD)
100	Flutolanil(ECD,NPD)	101	Fluvalinate(ECD)*	102	Folpet(ECD)*
103	Fonofos(NPD)	104	Fosthiazate(NPD,FPD)	105	Fthalide(ECD)
106	Furathiocarb(NPD)	107	Heptachlor(ECD)	108	Heptachlor epoxide(ECD)
109	Hexachlorobenzene(ECD)	110	Hexaflumuron(ECD)	111	Imazalil(ECD)*
112	Imibenconazole(NPD)	113	Indanofan(ECD)	114	Indoxacarb(ECD)
115	Iprobenfos(NPD,FPD)	116	Iprodione(ECD)	117	Iprovalicarb(ECD)
118	Isofenphos(NPD)	119	Isofenphos-methyl(NPD)*	120	Isoprothiolane(ECD)
121	Isoxathion(NPD)	122	Kresoxim-methyl(NPD)	123	Lactofen(ECD)
124	Lufenuron(ECD)	125	Malathion(ECD,NPD)	126	Mecarbam(ECD,NPD)
127	Mefenacet(ECD)	128	Mefenpyr-diethyl(ECD)	129	Mepronil(NPD)
130	Metconazole(NPD)	131	Methabenzthiazuron(NPD)	132	Methidathion(ECD,NPD)
133	Methoxychlor(ECD)	134	Metrafenone(ECD)	135	Molinate(NPD)
136	Myclobutanil(ECD,NPD)*	137	Nitrapyrin(ECD)	138	Nitrothal-isopropyl(ECD)
139	Nonachlor(ECD)	140	Novaluron(ECD)	141	Nuarimol(ECD)*
142	Ofurace(ECD)	143	Oxadixyl(ECD,NPD)	144	Oxydemeton-methyl(FPD)
145	Paclobutrazol(ECD,NPD)*	146	Parathion(ECD,NPD)	147	Parathion-methyl(ECD,NPD)
148	Penconazole(ECD,NPD)	149	Pencycuron(NPD)	150	Pendimethalin(ECD,NPD)
151	Permethrin(ECD)*	152	Phenthoate(ECD,NPD)	153	Phosalone(ECD,NPD)
154	Phosmet(ECD,NPD)	155	Phosphamidone(ECD,NPD)	156	Picolinafen(ECD)
157	Picoxystrobin(ECD)	158	Piperophos(NPD,FPD)	159	Pirimicarb(NPD)
160	Pirimiphos-ethyl(NPD)	161	Pirimiphos-methyl(NPD)	162	Probenazole(ECD)
163	Prochloraz(ECD)	164	Procymidone(ECD,NPD)	165	Profenofos(ECD,NPD)
166	Propazine(NPD)	167	Propisochlor(ECD,NPD)	168	Propoxur(NPD)
169	Propyzamide(ECD)	170	Prothiofos(NPD)	171	Pyraclofos(NPD)
172	Pyrazophos(ECD,NPD)	173	Pyridaben(NPD,ECD)*	174	Pyridalyl(ECD,NPD,FPD)
175	Pyrimethanil(NPD)	176	Pyrimidifen(ECD)	177	Pyriminobac-methyl(NPD)
178	Quinalphos(NPD)	179	Quintozene(ECD)	180	Simeconazole(NPD)
181	Sulprofos(FPD)	182	TCMTB(ECD)	183	Tebuconazole(NPD)*
184	Tebufenpyrad(NPD)*	185	Tebupirimfos(ECD,NPD, FPD)	186	Teflubenzuron(ECD)
187	Tefluthrin(ECD)	188	Terbufos(NPD)*	189	Terbutylazine(ECD,NPD)
190	Tetrachlorvinphos(FPD)	191	Tetradifon(ECD)	192	Thiazopyr(ECD,NPD)
193	Thifluzamide(ECD,NPD)	194	Thiometon(ECD,NPD)	195	Tolclofos-methyl(ECD,NPD)
196	Tolfenpyrad(NPD)	197	Tolylfluanid(ECD,NPD)	198	Tralomethrin(ECD,NPD)
199	Triadimefon(ECD,NPD)	200	Triazophos(NPD)	201	Tribufos(FPD)
202	Triflumizole(ECD,NPD)	203	Triflumuron(ECD)	204	Uniconazole(ECD)
205	Vernolate(ECD)	206	Vinclozoline(ECD,NPD)	207	Zoxamide(ECD,NPD)

주7) GC-MS/MS 분석 대상(283종) 및 상세 조건은 아래와 같다.

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	토막이온 (Fragmention, m/z)	충돌 에너지 (Colllisionenergy, eV)
1	2,6-Diisoporpylnaphthalene	11.511	212.33	212	212	197	15
					197	167	5
2	Acrinathrin	24.552	541.4	541	181	152	30
						127	30
3	Aldrin	15.506	364.9	362	263	193	30
						226	20
4	Allethrin	17.187	302.4	302.2	123	81	10
						95	10
5	Allidochlor	8.078	173.6	173	132	132	5
						56	10
						138	5
6	Ametryn	14.399	227.3	227	227	185	10
						170	10
7	Anilofos	23.201	367.8	367	226	157	10
						184	10
8	Aspon	15.534	378.4	378.1	211	115	15
					210	146	10
9	Atrazine	12.334	216.7	215	215	173	10
						200	10
10	Azaconazole	18.742	300.1	299	217	217	5
						173	20
11	Azinphos-ethyl	25.081	345.4	345	160	132	5
						105	10
						77	15
12	Azinphos-methyl*	23.912	317.3	317	160	132	5
						104	5
13	Benalaxyl	21.237	325.4	325.2	148	105	15
					148	77	5
14	α-BHC	11.867	290.8	288	181	145	25
						109	25
15	β-BHC	12.367	290.8	288	181	109	30
						145	30
16	δ-BHC	12.615	290.8	288	181	145	10
						109	10
17	γ-BHC	13.227	290.8	288	181	145	10
						109	10
18	Benodanil	20.597	323.1	323	231	76	25
						203	15
19	Benzoylprop-ethyl	23.028	366.2	365.1	105	51	35
						77	15
20	Bifenox	23.957	342.1	341	341	310	15
21	Bifenthrin	22.71	422.9	422	190	126	10
					181	166	15
						167	15
22	Binapacry	18.939	322.3	322	83	83	5
						54	10
23	Bromacil	14.865	261.1	295	205	188	25
						162	25
24	Bromobutide	11.642	312.2	311	119	91	15
						65	30
25	Bromophos-methyl	15.996	366	364	331	316	25
						286	35
26	Bromopropylate	22.74	428.1	426	341	183	10
						185	10
27	Bupirimate	18.637	316.4	316	273	193	10
						109	15
						150	10
28	Butafenacil	26.673	474.8	474	331	331	10
						180	10
29	Butralin	16.316	295.3	295.2	266	174	20
						220	10
30	Butylate	7.815	217.4	217.2	156	57	5
					146	90	5
31	Cadusafos	11.589	270.4	270	159	131	15
						97	15
32	Captafol*	21.7	349.1	347	79	77	20
						51	20
33	Captan*	16.845	300.6	299	149	70	20
						79	20
34	Carbophenothion	20.648	342.9	342	342	157	10
						296	5
35	Chinomethionat	18.586	234.3	234	206	148	25
						121	25
36	Chlorbufam	11.776	223.7	223	153	90	20
					153	125	10
37	Chlordane	17.767	409.8	406	373	373	5
						265	15
						300	25
38	Chlordane-trans	17.606	409.8	406	272	237	15
					373	266	20
39	Chlorethoxyfos	10.106	336	333.9	97	65	15
					153	97	10
40	Chlorfenapyr	18.919	407.6	406	59	59	10
						57	25
41	Chlorfenson	18.379	303.2	302	111	75	15
					175	111	10
42	Chlorfluazuron	18.325	540.7	539	321	304	10
					321	97	15
43	Chlorflurenol-methyl	17.547	274.7	274	215	152	20
					217	152	25
44	Chloridazon	20.96	221.6	221	221	220	10
						105	15
						77	20
45	Chlorobenzilate	19.484	325.2	324	251	111	30
						139	30
46	Chloroneb	8.691	207.1	206	191	113	15
					206	191	10
47	Chloropropylate	20.044	339.2	338	139	111	15
					251	139	15
48	Chlorothalonil*	12.969	365.9	264	266	133	20
						170	20
49	Chlorpyrifos*	15.307	350.6	349	314	258	15
						285	15
50	Chlorpyrifos-methyl	14.007	322.5	321	286	93	20
						271	20
51	Chlorthal-dimethyl	15.475	332	330	301	301	10
						273	15
						222	25
52	Chlorthin	15.983	297.65	297	297	109	10
					109	79	10
53	Chlorthiophos	20.671	361.2	360	325	269	10
					297	269	5
54	Chlozolinate	17.001	332.1	331	186	145	15
					188	147	15
55	Cinmethylin	14.516	274.4	274	123	123	5
						81	10
						95	10
56	Clomeprop*	23.45	324.2	323	288	288	20
						132	25
						120	30
57	Cyanazine	15.369	240.7	240	225	225	10
						189	10
58	Cyanophos	12.64	243.2	243	243	148	5
						109	15
59	Cycloate	11.114	215.4	215	154	154	5
						73	10
						72	10
60	Cycloprothrin	15.3	482.4	481	209	116	20
						141	15
						169	15
61	Cyflufenamid*	18.9	412.4	412	188	88	30
62	Cyfluthrin*	27.487	434.3	433	226	206	10
						199	10
63	Cyhalofop-butyl	24.348	357.4	357	256	120	10
						91	20
						158	30
64	Cyhalothrin*	24.22	449.9	449	181	152	25
						127	25
65	Cypermethrin*	27.7	416.3	415	181	152	30
						127	30
66	Cyproconazole	19.087	291.8	291	222	82	10
						125	10
67	Cyprodinil*	16.315	225.3	225	224	208	25
						224	25
68	Deltamethrin*	30.821	505.2	503	253	93	25
						174	25
69	Demeton-O	9.952	258.3	258.1	88	60	5
					171	115	10
70	Demeton-S	11.526	258.3	258.1	88	60	5
					170	114	10
71	Demeton-S-methyl-sulfone	14.732	262.3	262	169	109	15
						125	5
72	Desmetryn	13.709	213.3	213.1	213	58	10
73	Diallate	11.678	270.2	269	234	171	5
						234	10
						192	10
						150	25
74	Diazinon	12.742	304.3	304	304	179	30
						137	30
75	Dichlofenthion	13.85	315.2	314	279	223	15
					223	205	15
76	Dichlofluanid*	15.07	333.2	332	224	123	25
						77	25
77	Dichlormid	7.135	207	207	166	56	10
					172	108	5
78	Dichlorvos*	7.738	221	220	185	93	20
						109	20
79	Dicloran	12.118	207	206	206	148	20
						176	20
80	Dicofol	15.771	370.5	368	139	75	25
						111	25
81	Dieldrin*	18.61	380.9	378	263	193	30
						228	20
82	Diethatyl-ethyl	18.487	311.8	311.1	162	147	10
					188	160	5
83	Diethofencarb	15.302	267.3	267	225	196	5
						168	5
84	Diflufenican	21.587	384.3	394	266	266	10
						246	15
						238	15
85	Dimepiperate	16.913	263.4	263	145	69	25
						111	25
86	Dimethachlor	13.848	255.7	255	134	134	10
						105	15
						78	25
87	Dimethenamid	13.875	275.8	275	230	154	20
						137	20
88	Dimethoate	12.06	229.3	229	125	79	20
						63	20
89	Dimethylvinphos	15.346	331.5	330	295	109	20
						280	20
90	Diniconazole	19.62	326.2	325	268	232	20
						171	20
91	Dinitramine	12.902	322.2	322.1	261	195	20
						241	10
92	Dioxathion	12.189	456.5	456	125	97	10
93	Diphenamid	15.958	239.3	239	167	79	30
						165
							10
						152	10
94	Diphenylamine	11.013	169.2	169	169	169	10
						167	10
95	Dithiopyr	14.514	401.4	401	286	210	15
						238	15
96	p,p-DDD	19.772	320	318	235	165	30
						199	30
97	p,p-DDE	18.416	318.1	316	246	176	25
						211	25
98	o,p-DDT	19.872	354.5	352	235	165	20
						199	20
99	p,p-DDT	21.033	354.5	352	235	165	20
						199	20
100	Edifenphos	20.727	310.4	310	173	109	10
						155	10
101	α-Endosulfan	17.76	406.9	404	195	125	25
						159	25
102	β-Endosulfan	19.61	406.9	404	241	170	20
						206	20
103	Endosulfan-sulfate	20.87	422.9	420	272	237	30
						143	30
104	Endrin	19.28	380.9	378	263	193	30
						228	30
105	EPN	22.674	323.3	323	157	77	15
						110	15
106	Epoxiconazole	22.693	329.8	329.1	192	111	25
						138	10
107	EPTC	7.122	189.3	189.1	128	86	5
					132	90	5
108	Esprocarb	15.087	265.4	265	222	162	5
						151	5
109	Etaconazole	20.37	328.2	327.1	173	109	30
					173	145	15
110	Ethalfluralin	10.502	333.3	333.1	276	202	30
					316	276	15
111	Etofenprox	29.057	376.5	376.2	163	135	15
					163	107	10
112	Ethion	19.767	384.5	384	231	175	10
						157	10
113	Ethofumesate	15.139	286.3	286.1	161	105	10
					207	161	5
114	Ethoprophos	11.045	242.3	242	158	114	20
						97	20
115	Etoxazole	22.988	359.4	359	141	112	20
						113	15
						141	20
116	Etridiazole	8.096	247.5	245.9	183	140	10
					211	183	30
117	Etrimfos	13.157	292.3	292	181	153	5
						98	5
118	Fenamidone	23.024	311.4	311	238	103	30
						238	30
119	Fenarimol*	24.827	331.2	330	251	139	25
						111	25
120	Fenazaquin*	23.332	306.4	306	160	117	20
						145	20
121	Fenbuconazole*	26.95	336.8	336	129	102	10
						78	10
122	Fenchlorphos	14.609	321.5	319.9	285	93	20
						270	15
123	Fenfuram	12.848	201.2	201.1	109	53	15
					201	109	10
124	Fenitrothion	14.843	277.2	277	277	109	10
						260	10
125	Fenobucarb	10.733	207.3	207	121	103	15
						91	15
126	Fenothiocarb*	17.537	253.4	253	160	72	15
127	Fenoxanil	19.139	329.2	328	189	125	15
						154	15
128	Fenoxycarb	22.816	301.3	301	186	109	15
						157	15
129	Fenpropathrin*	23.024	349.4	349	265	210	10
						181	20
130	Fenson	16.091	268.7	268	141	77	5
					268	77	20
131	Fenthion	15.412	278.3	278	278	109	25
						125	25
132	Fenvalerate*	29.395	419.9	419	225	119	15
						147	10
133	Fipronil	17.198	437.2	436	367	213	30
					367	255	30
134	Flamprop-isopropyl	20.35	363.8	363.1	105	51	30
					105	77	15
135	Flonicamid*	10.504	229.2	229	174	146	10
						126	25
136	Fluchloralin	12.776	355.7	355.1	326
						119	25
						63
							15
					306	264	10
137	Fludioxonil	18.057	248.2	248	248	154	10
						182	10
138	Flufenpyr-ethyl	20.213	408.8	408	408	345	10
						373	10
139	Flumetralin	18.235	510.4	509.1	143	107	20
						117	20
140	Flumiclorac-pentyl*	31.119	423.9	423	318	260	20
						107	30
141	Flumioxazine	29.351	354.3	354	354	354	5
						326	10
						312	10
142	Fluopyram	17.096	396.76	396	173	145	20
					173	95	35
143	Fluorodifen	18.559	328.2	328	190	75	20
					190	126	10
144	Flurochloridone	16.13	312.1	311	187	159	10
					311	174	15
145	Flurtamone	24.543	333.3	333.1	333	120	15
					199	157	20
146	Flusilazole	18.567	315.4	315	233	165	30
						109	30
147	Fluthiacet-methyl	33.032	403.9	403	318	260	20
						107	30
148	Flutolanil	19.979	323.3	323	173	145	20
						95	20
149	Flutriafol	18.183	301.3	301.1	123	95	25
					123	75	15
150	Fluvalinate*	29.803	502.9	502	250	207	25
						200	25
151	Folpet*	17.023	296.6	295	260	130	10
						232	10
152	Fonofos	12.808	246.3	246	246	137	10
						109	15
153	Fosthiazate	15.975	283.3	283	195	103	10
						139	10
154	Fthalide	15.858	271.9	270	243	179	30
						215	30
155	Furathiocarb	23.527	382.5	382	163	107	10
						135	10
156	Halfenprox	28.586	477.3	476.1	265	115	15
157	Heptachlor	14.49	373.3	370	263	115	25
					272	237	20
						239	20
158	Heptachlor-epoxide	16.625	389.3	386	353	263	15
						282	15
159	Heptenophos	9.507	250.6	250	124	89	20
					124	63	30
160	Hexachlorbenzene	11.996	284.8	282	284	284	5
						249	20
						213	20
161	Hexaconazole	18.44	314.2	313.1	231	175	35
					214	159	30
162	Imazalil*	18.076	297.2	296	215	173	10
						215	10
163	Indanofan	23.172	340.8	340	139	75	30
						111	30
164	Indoxacarb	30.608	527.8	527	150	123	25
						114	25
165	Iprobenfos	13.43	288.3	288	204	91	5
						171	5
166	Iprodione	19.568	330.2	329	187	124	20
						159	20
167	Iprovalicarb	18.829	320.4	320	134	134	10
						94	15
						98	10
168	Isazofos	13.055	313.7	313	161	119	10
						146	10
169	Isofenphos	16.541	345.4	345	213	121	10
						185	10
170	Isofenphos-methyl*	16.129	331.4	331	199	121	15
						93	25
171	Isopropalin	16.579	309.4	309.2	264	222	5
					238	165	10
172	Isoprothiolane	18.178	290.4	290	118	90	15
						118	15
173	Isoxanthion	19.015	313.3	313	177	177	5
						130	5
						77	15
174	Kresoxim-methyl	18.654	313.4	313	131	90	20
						116	20
175	Lactofen*	24.641	461.8	461	344	223	20
						344	10
						167	25
176	Leptophos	24.718	412.1	409.9	171	77	15
					155	77	15
177	Malathion	15.07	330.4	330	173	99	10
						127	10
178	Mecarbam	16.646	329.4	329	131	74	15
						86	15
179	Mefenacet	24.252	298.4	298	192	136	10
						164	10
180	Mefenpyr-diethyl	22.038	373.3	372	299	299	5
						253	15
						272	5
181	Mepronil	20.21	269.3	269	119	91	5
						107	5
182	Metconazole	23.302	319.8	319	125	89	20
						99	20
						125	25
183	Methidathion	17.217	302.3	302	145	145	5
						85	5
184	Methoprotryne	19.324	271.4	271.1	256	170	25
					256	212	15
185	Methoxychlor	22.923	345.7	344	227	169	25
						212	25
186	Methyl pentachlorophenyl sulfide*	15.064	296.4	294	296	246	30
						263	30
187	Methyl trithion	19.812	314.8	314.8	157	75	5
					157	121	15
188	Metolachlor	15.489	283.8	283.1	238	162	10
					162	133	20
189	Metrafenone	25.122	409.3	408	393	224	15
						362	15
190	Metribuzin	13.832	214.3	214.1	198	55	30
					198	89	15
191	MGK-264	16.166	275.39	275.39	164	98	40
					164	80	35
192	Molinate	10.219	187.3	173	126	98	15
						83	15
193	Myclobutanil	18.503	288.8	288	179	125	10
						152	10
194	Napropamide	18.374	271.4	271.2	128	72	20
					271	72	35
195	Nitrapyrin	9.384	230.9	229	194	133	20
						158	20
196	Nitrothal-isopropyl	15.758	295.3	295	236	194	10
						148	20
						120	30
197	cis-Nonachlor*	19.786	444.2	440	407	300	20
						144	20
						335	10
198	trans-Nonachlor*	17.847	444.2	440	409	301	25
						263	25
199	Nuarimol	21.403	314.7	314	107	107	5
						79	5
200	Ofurace	20.321	281.7	281	232	186	15
						158	15
201	Oxadixyl	19.673	278.3	278	233	118	25
						146	25
202	Oxydemeton-methyl	6.783	246.3	246	109	109	5
						79	10
203	Paclobutrazol	17.464	293.8	293	236	125	10
						167	10
204	Parathion-ethyl	15.511	291.3	291	291	109	15
205	Parathion-methyl	14.168	263.2	263	263	109	10
						127	20
						246	5
206	Pebulate	9.454	203.3	203	128	128	5
						72	5
207	Penconazole	16.467	284.2	283	248	157	30
						248	5
208	Pendimethalin*	16.294	281.3	281	252	208	5
						191	5
209	Pentachloroaniline	13.719	265.4	263	265	194	30
						203	30
210	Permethrin	26.293	391.3	390	183	182	10
						154	10
						166	15
211	Phenthoate	16.74	320.4	320	274	121	10
						246	10
212	Phentoxazone	23.882	353.8	353	285	70	10
						285	5
						187	20
213	Phosalone	23.817	367.8	367	182	111	25
						138	10
						102	25
214	Phosmet	22.538	317.3	317	160	132	15
						104	15
215	Phosphamidone	13.728	299.7	299	264	127	20
						193	10
216	Picolinafen	22.793	376.3	376	376	376	5
						239	10
						266	10
217	Picoxystrobin	17.674	367.3	367	145	116	10
						102	30
						115	30
218	Piperophos*	22.757	353.5	353	320	122	10
						81	25
219	Pirimicarb*	13.372	238.3	238	238	116	10
						96	25
220	Pirimiphos-ethyl	15.914	333.4	333	333	180	10
						163	10
221	Pirimiphos-methyl	14.755	305.3	305	305	180	15
						233	15
222	Probenazole	12.519	223.3	223	130	77	20
						103	20
223	Prochloraz*	26.367	376.7	375	180	180	10
						138	15
						95	25
224	Procymidone	16.892	284.1	283	283	96	10
						283	10
225	Profenofos	18.275	373.6	372	139	97	5
						121	5
226	Profluralin	12.392	347.3	347.1	318	54.8	10
					318	199	15
227	Prometon	11.72	225.3	225.2	210	168	5
					183	168	5
228	Pronamide	12.389	256.1	255	173	145	15
					175	147	15
229	Propachlor	10.811	211.7	211	176	120	15
						57	15
						92	20
230	Propazine	12.374	229.7	229	229	173	25
						105	30
231	Propetamphos	12.319	281.3	281.1	138	64	15
					138	110	10
232	Propham	9.419	179.2	179	179	137	10
						93	15
233	Propisochlor	14.319	283.8	283	162	119	20
						144	20
234	Propyzamide	12.722	256.1	255	173	145	15
						109	30
235	Prothiofos	18.139	345.2	344	267	221	20
						239	20
236	Pyracarbolid	16.222	217.3	217.11	125	55	15
					125	97	5
237	Pyraclofos	25.37	360.8	360	194	138	10
						132	10
238	Pyrazophos	24.863	373.4	373	221	149	15
						193	15
239	Pyridaben	26.304	364.9	364	147	105	10
						132	10
240	Pyridalyl*	28.416	491.1	489	204	147	15
						175	15
241	Pyrifenox	16.618	295.2	294	262	227	10
						192	15
						91	20
242	Pyrimidifen	29.07	377.9	377	184	169	20
						157	20
243	Pyriminobac-methyl	20.87	361.4	361	302	256	10
						230	10
244	Quinalphos	16.782	298.3	298	146	118	20
						91	20
245	Quinoxyfen	21.314	308.1	307	237	208	30
					307	237	20
246	Quintozene	12.519	295.3	293	237	143	20
						119	20
247	Secbumeton	12.856	225.3	225.2	196	85	10
					169	154	5
248	Simeconazole	14.187	293.4	293	121	101	15
						75	15
						91	15
249	Spiroxamine	14.977	297.5	297.3	100	58	10
					100	72	5
250	Sulfotep	10.962	322.3	322	322	146	25
					322	174	15
251	Sulprofos	20.315	322.4	322	322	156	15
						139	15
252	TCMTB	18.005	238.4	238	180	180	10
						136	20
253	Tebuconazole*	9.75	307.8	307	250	125	10
						153	10
254	Tebufenpyrad	23.201	333.9	333	171	88	25
						171	25
255	Tebupirimfos	13.349	318.4	318	261	137	15
						153	15
256	Tefluthrin	13.06	418.7	418	177	127	5
						157	5
257	Terbacil	12.837	216.7	216.1	160	76	15
					160	117	5
258	Terbufos	12.64	288.4	288	231	129	25
						175	25
259	Terbumeton	12.031	225.3	225.2	169	141	5
					169	154	5
260	Terbuthylazine	12.615	229.7	229	214	104	25
						83	25
261	Tetrachlorvinphos	17.407	366	396	109	109	5
						89	10
262	Tetraconazole	15.97	372.1	371	336	204	10
					336	218	20
263	Tetradifon	23.616	356	354	356	159	20
						229	20
264	Tetramethrin	23.563	331.4	331.2	164	77	25
					164	107	10
265	Tetrasul	20.702	324.1	321.9	324	252	15
					322	252	15
266	Thiazopyr	15.147	396.4	396	128	128	5
						85	25
267	Thifluzamide	18.445	528.1	526	194	125	20
						166	20
268	Thiometon	11.966	246.3	246	125	79	10
						63	20
269	Tolclofos-methyl	14.207	301.1	300	265	250	20
						93	20
270	Tolfenpyrad	31.684	383.9	383	383	171	171
						212	10
271	Tolyfluanid	16.567	347.3	542	238	91	35
						137	35
272	Tralomethrin	30.815	665	661	253	93	15
						172	15
273	Triadimefon	15.611	293.8	293	208	111	30
						181	15
274	Triadimenol	17.16	295.8	295.1	128	65	20
					168	70	20
275	Triazophos	20.237	313.3	313	161	106	15
						92	15
276	Tribufos	18.486	314.5	314	202	147	5
						113	15
277	Triflumizole	16.939	345.7	345	206	179	15
						186	10
278	Triflumuron	9.4	358.7	358	139	111	15
						75	15
279	Trifluralin	10.73	335.3	335.1	264	160	10
					306	264	25
280	Uniconazole	18.44	291.8	291	234	165	10
						137	20
						102	25
281	Vernolate	9.308	203.3	203	128	128	5
						86	5
						43	10
282	Vinclozolin	14.094	286.1	285	285	213	10
						186	10
283	Zoxamide	16.997	336.6	335	187	123	25
						159	25

※ 각 토막이온(fragment ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 토막 이온도 적용이 가능함.

※ 위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precursor ion) 및 토막이온(fragment ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 토막이온(fragment ion)간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율이 ± 20∼30% 이내에서 일치하여야 한다.

1	Acetamiprid(UVD)*	2	Aldicarb(FLD)	3	Amisulbrom(UVD)
4	Azafenidin(UVD)**	5	Azoxystrobin(UVD)	6	Bendiocarb(FLD)
7	Benzoximate(UVD)*	8	Boscalid(UVD)	9	Bromoxynil(UVD)
10	Butocarboxim(FLD)	11	Carbaryl(FLD)	12	Carbofuran(FLD)
13	Chlorantraniliprole(UVD)	14	Chlorimuron-ethyl(UVD)	15	Chlorobenzuron(UVD)
16	Chlorotoluron(UVD)	17	Chromafenozide(UVD)	18	Cinosulfuron(UVD)
19	Clothianidin(UVD)*	20	Cyazofamid(UVD)	21	Cymoxanil(UVD)
22	Dimethomorph(UVD)	23	Ethaboxam(UVD)	24	Ethametsulfuron-methyl(UVD)
25	Ethiofencarb(FLD)	26	Fenhexamid(UVD)	27	Fenpyroximate(UVD)*
28	Ferimzone(UVD)	29	Fluacrypyrim(UVD)	30	Flubendiamide(UVD)
31	Flufenacet(UVD)	32	Flufenoxuron(UVD)	33	Fluquinconazole(UVD)
34	Flusulfamide(UVD)	35	Forchlorfenuron(UVD)	36	Hexaflumuron(UVD)
37	Imazamox(UVD)	38	Imazapic(UVD)	39	Imazaquin(UVD)
40	Imazethapyr(UVD)	41	Imibenconazole(UVD)	42	Iprovalicarb(UVD)
43	Isoprocarb(FLD)	44	Isoproturon(UVD)	45	Lufenuron(UVD)
46	Mepanipyrim(NPD, UVD)	47	Metamifop(UVD)	48	Methabenzthiazuron(UVD)
49	Methiocarb(FLD)	50	Methomyl(FLD)*	51	Methoxyfenozide(UVD)
52	Metolcarb(FLD)	53	Nitenpyram(UVD)	54	Novaluron(UVD)
55	Oxamyl(FLD)*	56	Oxaziclomefon(UVD)	57	Phenmedipham(UVD)
58	Pirimicarb(FLD)	59	Promecarb(FLD)	60	Propoxur(FLD)
61	Pyraclostrobin(UVD)	62	Pyrazolate(UVD)	63	Pyribenzoxim(UVD)
64	Pyributicarb(UVD)	65	Pyridate(UVD)	66	Pyrimethanil(UVD)
67	Pyriproxyfen(UVD)	68	Pyroquilon(UVD)	69	Quinoclamine(UVD)
70	Rimsulfuron(UVD)	71	Spirodiclofen(UVD)	72	Tebufenozide(UVD)
73	Teflubenzuron(UVD)	74	Thenychlor(UVD)	75	Thiacloprid(UVD)*
76	Thiamethoxam(UVD)*	77	Thiodicarb(FLD)	78	Tiadinil(UVD)
79	Tribenuron-methyl(UVD)	80	Tricyclazole(NPD, UVD)	81	Trifloxystrobin(ECD, UVD)
82	2,3,5-Trimethacarb(FLD)	83	3,4,5-Trimethacarb(FLD)

나) 액체크로마토그래프 분석 대상(83종)

주8) LC-MS/MS 분석 대상(117종) 및 상세 조건은 아래와 같다.

순번	물질명 (compound)	이온화 (Ionization mode)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	토막이온 (Fragment ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision energy, eV)
1	Acetamiprid*	positive	4.99	222.7	222	223	90	33
							99	36
							126	20
2	Aldicarb	positive	5.57	190.3	190	157	109	29
							110	15
							116	9
3	Amisulbrom	negative	6.76	466.3	465	359	66	36
							131	19
							277	15
4	Asulam	positive	1.8	230.2	230	231	92	15
							108	15
							156	10
							199	5
5	Azamethiphos	positive	5.79	324.7	324	325	76	51
							112	33
							139	25
6	Azoxystrobin	positive	7.86	403.4	403	404	172	52
							183	39
							372	14
7	Bendiocarb	positive	6.24	223.2	223	224	81	33
							109	19
							167	18
8	Bensulide	positive	9.84	397.5	397	398	141	33
							314	11
							356	5
9	Benzoximate*	positive	11.11	363.8	363	364	105	31
							184	33
							199	11
10	Bixafen	positive	11.5	414.2	413	414	266	26
							374	24
							394	15
11	Boscalid	positive	8.24	343.2	342	343	112	39
							140	21
							307	19
12	Bromoxynil*	negative	5.33	276.9	275	276	79	44
							81	43
13	Butocarboxim	positive	5.36	190.3	190	191	47	27
							59	45
							75	9
14	Carbaryl	positive	6.49	201.2	201	202	117	24
							127	31
							145	11
15	Carbetamide	positive	8.06	236.3	236	237	92	30
							120	15
							192	8
16	Carbofuran	positive	6.33	221.3	221	222	123	22
							165	12
17	Chlorantraniliprole	positive	7.2	483.2	481	484	194	32
							286	15
							453	16
18	Chlorimuron-ethyl	positive	7.79	414.8	414	415	121	32
							185	27
							186	17
19	Chlorobenzuron	negative	6.97	309.2	308	307	126	31
							264	18
							271	13
20	Chlorotoluron	positive	6.38	212.7	212	213	72	27
							140	26
							77	26
21	Chromafenozide*	positive	8.76	394.5	394	395	147	41
							175	20
							339	5
22	Cinosulfuron	positive	5.86	413.4	413	414	83	37
							183	16
23	Clothianidin*	positive	6.37	249.7	249	250	66	46
							93	34
							131	19
24	Cyazofamid	positive	9.49	324.8	324	325	108	16
							217	20
							261	8
25	Cycloprothrin	positive	14.46	482.4	481	462	147	34
							341	26
							445	13
26	Cymoxanil	positive	11.1	198.2	198	199	113	35
							141	27
							184	19
27	Demeton-S- methyl sulfon	positive	6.57	262.3	262	263	109	28
							169	16
							231	13
28	Dicrotophos	positive	4.22	237.2	237	238	72	32
							127	18
							193	9
29	Dimethomorph	positive	7.18	387.9	387	388	139	33
							165	32
							301	20
30	Ethaboxam	positive	6.31	320.4	320	321	183	23
							200	26
							237	18
31	Ethametsulfuron-methyl	positive	6.17	410.4	410	411	83	45
							168	28
							196	15
32	Ethiofencarb	positive	6.69	225.3	225	226	51	65
							77	43
							107	16
33	Fenhexamid	positive	8.26	302.2	301	302	55	35
							97	21
							143	39
34	Fenpyroximate*	positive	13.16	421.5	421	422	138	32
							214	29
							366	15
35	Ferimzone	positive	5.61	254.3	254	255	117	29
							124	21
							132	20
36	Fluacrypyrim	positive	11.1	426.4	426	427	115	53
							117	42
							145	29
37	Fluazinam	negative	8.28	465.1	464	463	387	19
							398	19
							416	22
38	Flubendiamide	positive	9.26	682.4	682	683	256	61
							274	29
							408	13
39	Flufenacet	positive	9.04	363.3	363	364	109	34
							124	32
							152	20
40	Flufenoxuron	negative	8.63	488.8	488	487	304	22
							411	23
							467	19
41	Fluometuron	positive	8.92	232.2	232	233	145	36
							160	28
							168	22
42	Fluquinconazole	positive	8.36	376.2	375	376	272	34
							307	26
							349	21
43	Fluridone	positive	7.41	329.3	329	330	91	49
							115	54
							310	29
44	Flusulfamide	negative	7.27	415.2	414	413	171	45
							179	40
							283	29
45	Forchlorfenuron	positive	6.37	247.7	247	248	93	34
							129	17
							155	16
46	Hexaflumuron	negative	7.64	461.1	460	459	175	39
							276	22
							439	15
47	Imazamox	positive	4.73	305.3	305	306	163	35
							193	26
							217	21
48	Imazapic	positive	4.79	275.3	275	276	145	35
							163	26
							231	20
49	Imazaquin	positive	5.79	311.3	311	312	198	28
							199	28
50	Imazethapyr	positive	5.35	289.3	289	290	177	27
							245	20
51	Imibenconazole	positive	11.28	411.7	410	411	125	33
							342	16
52	Ipconazole	positive	12.97	333.9	333	334	89	60
							125	39
							19	21
53	Isoprocarb	positive	6.92	193.2	193	194	77	55
							95	16
							152	12
54	Isoproturon	positive	6.59	206.3	206	207	72	17
							165	14
55	Isoxaben	positive	10.25	332.4	332	333	107	59
							150	40
							165	18
56	Lenacil	positive	9.39	234.3	234	235	135	35
							136	34
							153	15
57	Lufenuron	negative	8.3	511.2	510	509	175	43
							326	20
							339	16
58	Malaoxon	positive	8.29	314.3	314	315	99	23
							125	33
							269	8
59	Mepanipyrim	positive	8.81	223.3	223	224	104	27
							106	28
							131	23
60	Mesosulfuron-methyl	positive	8.8	503.5	503	504	139	55
							182	26
							306	25
61	Metamifop*	positive	11.01	440.9	440	441	103	41
							288	18
62	Metamitron	positive	7.3	202.2	202	203	104	22
							174	16
							175	17
63	Methabenzthiazuron	positive	6.31	221.3	221	222	124	30
							150	34
							165	17
64	Methiocarb	positive	6.69	225.3	225	226	78	42
							91	33
							122	19
65	Methomyl*	positive	4.38	162.2	162	163	73	29
							88	11
							106	11
66	Methoxyfenozide	positive	8.5	368.5	368	369	105	43
							149	18
							313	5
67	Metolcarb	positive	5.94	165.2	165	166	91	26
							94	31
							109	11
68	Metominostrobin	positive	9.43	284.3	284	285	194	21
							196	15
							238	11
69	Metosulam	positive	8.29	418.3	417	418	140	56
							174	34
							175	27
70	Nitenpyram	positive	3.92	270.7	270	271	196	18
							225	11
71	Novaluron	negative	12.92	492.7	492	491.2	305	17
							333	22
							470	14
72	Oxamyl*	positive	4.14	219.3	219	237	72	16
							90	10
							220	5
73	Oxaziclomefon	positive	12.18	376.3	375	376	133	32
							161	27
							190	15
74	Oxydemeton-methyl	positive	6.49	246.3	246	247	109	28
							125	24
							169	14
75	Phenmedipham	positive	7.41	300.3	300	301	93	36
							136	34
							108	19
76	Pinoxaden	positive	12.19	400.5	400	401	101	44
							159	52
							317	23
77	Promecarb	positive	7.97	207.3	207	208	91	34
							109	17
							151	7
78	Propaquizafop	positive	13.61	443.9	443	444	299	25
							327	25
							371	17
79	Propoxur	positive	6.17	209.2	209	210	93	25
							111	14
							168	5
80	Propyrisulfuron	positive	10.38	455.9	455	456	196	16
							218	29
							260	18
81	Prosulfocarb	positive	13.24	251.4	251	252	65	48
							91	20
							128	13
82	Prothioconazole	negative	9.07	344.3	343	342	100	24
							264	21
							306	17
83	Pyraclonil	positive	8.76	314.8	314	315	169	30
							241	24
							276	18
84	Pyraclostrobin	positive	10.38	387.3	387	388	149	30
							163	25
							296	13
85	Pyraflufen-ethyl	positive	11.88	413.2	412	413	253	38
							261	36
							339	21
86	Pyrazolate	positive	10.69	439.3	438	439	145	53
							173	21
							249	30
87	Pyrazolynate	positive	12.48	439.3	438	439	91	35
							145	54
							173	22
88	Pyribenzoxim	positive	12.12	609.3	609	610	180	32
							413	15
89	Pyributicarb	positive	12.8	330.4	330	331	91	25
							105	37
							108	31
90	Pyridate	positive	15.68	378.9	378	379	104	37
							207	17
							351	8
91	Pyrimethanil	positive	7.44	199.3	199	200	77	41
							82	26
							107	25
92	Pyriproxyfen	positive	12.55	321.4	321	322	96	16
							129	31
							185	23
93	Pyroquilon	positive	5.42	173.2	173	174	105	33
							117	31
							132	23
							174	5
94	Quinoclamine	positive	6.58	207.6	207	208	77	35
							105	27
							208	5
95	Rimsulfuron	positive	6.04	431.4	431	432	139	40
							182	24
							325	15
96	Spirodiclofen	positive	14.36	411.3	410	411	213	35
							215	22
							313	8
97	Sulfentrazone_NH4	positive	8.44	387.2	386	404	178	36
							307	27
							387	13
98	Tebufenozide	positive	9.26	352.5	352	353	105	38
							133	19
							297	5
99	Tebuthiuron	positive	8.59	228.3	228	229	116	28
							157	29
							172	18
100	Teflubenzuron	negative	7.98	381.1	380	379	196	25
							339	15
							359	11
101	Tepraloxydim	positive	10.92 8.62	341.8	341	342	166	21
							222	16
							250	13
102	Thenylchlor	positive	9.02	323.8	323	324	59	38
							97	42
							127	17
103	Thiacloprid*	positive	5.34	252.7	252	253	99	39
							126	21
							186	14
104	Thiamethoxam*	positive	4.47	291.7	291	292	108	40
							181	23
							211	13
105	Thiodicarb	positive	5.84	354.5	354	355	73	56
							79	31
							88	16
106	Tiadinil	negative	6.5	267.7	267	266	71	17
							178	19
							238	15
107	Tralkoxydim	positive	14.26	329.4	329	330	138	21
							284	13
							285	14
108	Triasulfuron	positive	8	401.8	401	402	137	34
							141	22
							167	19
109	Tribenuron-methyl	positive	7.01	395.4	395	396	83	35
							155	15
							181	20
110	Tricyclazole	positive	4.96	189.2	189	190	92	35
							109	34
							136	28
111	Tridemorph	positive	11.35	297.5	297	298	98	29
							116	25
							130	26
112	Trifloxystrobin	positive	11.14	408.4	408	409	116	32
							145	41
							186	17
113	Trifloxysulfuron	positive	8.91	459.3	437	438	139	46
							182	21
							256	21
114	2,3,5-Trimethacarb	positive	6.92	193.2	193	194	107	38
							122	27
							137	13
115	3,4,5-Trimethacarb	positive	6.96	193.2	193	194	107	34
							122	25
							137	11
116	Triticonazole	positive	7.59	317.8	317	318	70	35
							125	35
117	XMC	positive	6.53	179.2	179	180	77	47
							108	29
							123	12

※ 각 토막이온(fragment ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 토막 이온도 적용이 가능함.

※ 위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름시간(retention time)과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precusor ion) 및 토막이온(fragment ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 토막이온(fragment ion)간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율이 ± 20∼30% 이내에서 일치하여야 한다.

※ 토막이온간 반응세기의 비율 허용 범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위(%)
〉50	±20
〉20, ≤50	±25
〉10, ≤20	±30

주9) 이 시험법을 이용하여 위의 분석대상 성분중 * 표시된 농약이  식품에서 검출될 경우 정량분석은 식품공전 내 계열별 분석법 혹은 단성분 분석법으로 한다.

주10) 위의 분석대상 성분 중 ** 표시된 농약은 장기 미생산 품목이다.

제9. 4.1.4.46을 다음과 같이 개정한다.

4.1.4.46 에테폰(Ethephon)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류 및 서류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 에틸아세테이트로 추출한 후 메틸화 반응을 거쳐 기체크로마토그래프로 측정한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프 - 질소ㆍ인 검출기(GC-NPD)

나) 기체크로마토그래프 - 질량분석기(GC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 아세톤에 녹여 100 mg/kg이 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액 1 mL를 취하여 플라스크에 넣고 실온에서 질소를 통과하면서 증발건고 시킨 후 5)시험용액의 조제 나) 메틸화에 따라 실험하고 아세톤으로 적절한 농도로 희석하여 사용한다.

마) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 20 g(콩류 및 곡류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 그 20 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 잘게 갈아 혼합한 20 g)을 정밀히 달아 1 N 염산 10 mL를 가하여 산성화 시킨 후 무수황산나트륨 70 g을 첨가하여 탈수하고 에틸아세테이트 100 mL를 가하여 15분간 진탕하여 추출한다. 추출액을 부흐너 깔때기로 흡인 여과한 후, 에틸아세테이트 20 mL로 용기 및 잔사를 씻어 앞의 여액과 합하여 40℃ 이하의 수욕상에서 감압 농축한다. 농축 건고물을 아세토니트릴 50 mL에 용해시킨 후 250 mL 분액깔때기에 옮기고, 헥산 30 mL를 가하여 2분간 격렬히 진탕한 후 층이 완전히 분리될 때까지 정치하여 분리된 아세토니트릴층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받은 후 40℃ 이하의 수욕 상에서 감압 농축 한다.

나) 메틸화

농축에 의해 얻어진 건고물은 메탄올 4 mL를 가하여 재용해한 후, 이중 2 mL를 시험관에 취한다. 여기에 2 N-트리메틸실릴다이아조메탄 용액 1 mL를 넣고 실온에서 30분간 메틸화한다. 메틸화에 의해 얻어진 용액을 100 mL 분액깔때기에 옮기고, 5% 염화나트륨 수용액 30 mL 및 헥산 25 mL를 가하여 2분간 격렬히 진탕한 후 층이 완전히 분리될 때까지 정치하여 분리된 수용액층을 취한다. 수용액에 디클로로메탄 25 mL를 가하여 2분간 격렬히 진탕한 후 층이 완전히 분리될 때까지 정치하여 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 과정을 1회 반복하여 앞서 받은 디클로로메탄층과 합한 후 40℃ 이하의 수욕 상에서 감압 농축한다. 최종적으로 농축에 의해 얻어진 잔류물은 아세톤 2 mL로 재용해하여 시험용액으로 사용한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5 (30 m × 0.25 mm i.d., 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상가스 및 유량 : 질소, 1 mL/min.

(3) 오븐 온도 : 80℃에서 검체를 주입하고 3분간 유지한 후 5℃/분의 비율로 90℃까지 온도를 상승시켜 5분간 유지하고 10℃/분의 비율로 150℃까지 온도를 상승시켜 10분간 유지한다.

(4) 주입부 온도 : 250℃

(5) 검출기 온도 : 300℃

(6) 주입량 : 1 μL, splitless mode

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

에테폰(12.1분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 에테폰을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5MS (30 m × 0.25 mm i.d., 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상가스 및 유량 : 헬륨, 1 mL/min.

(3) 오븐온도 : 60℃에서 검체를 주입하고 10℃/분의 비율로 온도를 180℃로 상승시켜 1분간 유지하고 30℃/분의 비율로 250℃까지 온도를 상승시켜 2분간 유지한다.

(4) 주입부 : 250℃

(5) 인터페이스 온도 : 250℃

(6) 분자량 범위 : 50～650 m/z

(7) 주입량 : 1 μL, splitless mode

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	관측질량 (Exact mass)	관측이온(m/z)
8.4	144.5	145	109, 113

제9. 4.1.4.76을 다음과 같이 개정한다.

4.1.4.76 이나벤파이드(Inabenfide)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류 및 서류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 아세톤으로 추출한 후 디클로로메탄으로 액-액 분배하고 플로리실 카트리지로 1차 정제한 후 아미노프로필 카트리지로 2차 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프 - 자외부흡광광도검출기(HPLC/UVD)

나) 액체크로마토그래프 - 질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 아세톤에 녹여 100 mg/kg이 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세톤에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

마) 플로리실 카트리지 : 플로리실(1g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 아미노프로필 카트리지 : 아미노프로필(1g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

사) 기타시약：잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 20 g(콩류 및 곡류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 그 20 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 잘게 갈아 혼합한 20 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세톤 100 mL을 가하여 진탕기에서 10분간 진탕한 후 추출물을 여과지와 여과보조제가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과하고, 아세톤 20 mL로 용기 및 잔사를 씻어 앞의 여액과 합하여 40℃ 이하의 수욕상에서 약 20 mL로 감압농축하였다. 여과액을 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 증류수 100 mL 및 포화식염수 30 mL를 가한 후 디클로로메탄 70 mL를 가하여 2분간 격렬히 진탕한 후 층이 완전히 분리될 때까지 정치하여 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 과정을 1회 반복하여 앞서 받은 디클로로메탄층과 합하여 40℃ 이하의 수욕 상에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려버린다. 플라스크를 상온으로 냉각한 후, 건고물을 헥산/아세톤 혼합액(90/10, v/v) 2 mL에 용해시킨다.

나) 정제

헥산/아세톤 혼합액(90/10, v/v) 5 mL를 통과시켜 활성화시킨 플로리실 카트리지(Florisil cartridge)에 상기 재용액 1 mL를 첨가하고, 헥산/아세톤 혼합액(90/10, v/v) 10 mL로 용출시켜 버리고, 헥산/아세톤 혼합액(80/20, v/v) 8 mL로 용출시킨다. 이어서 용리액 전량을 헥산/아세톤 혼합액(80/20, v/v) 5 mL를 통과시켜 활성화시킨 아미노프로필 카트리지(NH2 cartridge)에 첨가하고, 헥산/아세톤 혼합액(80/20, v/v) 10 mL로 용출시켜 버리고, 헥산/아세톤 혼합액(70/30, v/v) 10 mL로 용출시켜 받은 후 40℃ 이하의 수욕 상에서 감압 농축하여, 건고물을 50% 아세토니트릴 2 mL로 재용해하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (4.6 mm i.d. × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 검출기 및 파장: 자외부흡광검출기(272nm)

(3) 이동상 : 아세토니트릴/물 (48/52, v/v)

(4) 유속 : 1 mL/min

(5) 칼럼 온도 : 40℃

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

이나벤파이드 (10.2분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 이나벤파이드를 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(2.1 mm i.d × 50 mm, 1.7 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.05% 아세트산 포함 아세토니트릴

(3) 이동상유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	관측질량 (Exact mass)	이온(m/z)
7.2	338.96	339	321, 80

제9. 4.1.4.132을 다음과 같이 개정한다.

4.1.4.132 퀸메락(Quinmerac)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류 및 서류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 아세톤으로 추출한 후 디클로르메탄과 헥산을 이용하여 액-액 분배하고 벤젠, 디메틸설폭사이드, 요오드화메틸, 수소화나트륨으로 메틸화하여 실리카 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프 - 자외부흡광검출기(HPLC/UVD)

나) 액체크로마토그래프 - 질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 아세톤에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액 1 mL를 취하여 플라스크에 넣고 실온에서 질소를 통과하면서 증발건고 시킨 후 메틸화에 따라 실험하고 아세토니트릴로 적절한 농도로 희석해 사용한다.

마) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 20 g(콩류 및 곡류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 그 20 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 잘게 갈아 혼합한 20 g)을 정밀히 달아 1 N 염산 수용액 1 mL를 가한 후 5분간 방치하여 산성화 시킨 후 아세톤 100 mL를 가하여 10분간 진탕하여 추출한다. 추출액을 부흐너 깔때기로 흡인 여과한 후, 아세톤 20 mL로 용기 및 잔사를 씻어 앞의 여액과 합하여 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축 한다. 농축 추출액을 250 mL 분액깔때기에 옮기고, 5% 염화나트륨 수용액 80 mL 및 디클로르메탄 70 mL를 가하여 2분간 격렬히 진탕한 후 층이 완전히 분리될 때까지 정치하여 분리된 디클로르메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 과정을 1회 반복하여 앞서 받은 디클로르메탄층을 합한 후 40℃ 이하의 수욕 상에서 감압농축한다.

나) 메틸화

농축 건고물을 벤젠 4 mL를 가하여 재용해하여, 이중 2 mL를 감압플라스크에 취한 후 디메틸설폭사이드(DMSO) 2 mL, 요오드화메틸 2 mL 및 수소화나트륨 0.2 g을 가하여 테프론 테이프로 실링하여 막은 후 40℃ 수욕 상에서 30분간 메틸화시킨 후 증류수 10 mL를 서서히 가하면서 반응을 종료시킨다. 메틸화에 의해 얻어진 용액을 분액깔때기에 옮기고, 5% 염화나트륨 수용액 30 mL 및 헥산 25 mL를 가하여 2분간 격렬히 진탕한 후 층이 완전히 분리될 때까지 정치하여 분리된 헥산층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 과정을 1회 반복하여 앞서 받은 헥산층과 합한 후 40℃ 이하의 수욕 상에서 감압 농축 한 후 건고물을 헥산 2 mL에 용해시킨다.

다) 정제

헥산 5 mL를 통과시켜 활성화시킨 Silica SPE 카트리지에 상기 재용액 전량을 첨가하고, 헥산 8 mL 및 헥산/아세톤 혼합액(90/10, v/v) 5 mL를 차례로 용출시켜 버리고, 헥산/아세톤 혼합액(90/10, v/v) 5 mL로 용출시켜 받은 후 40℃ 이하의 수욕 상에서 감압 농축하여, 건고물을 50% 아세토니트릴 2 mL로 재용해하여 시험용액으로 사용한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1)   칼럼 : C18  (4.6 mm i.d.×250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물(50/50, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출기 파장 : 240 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

퀸메락(7.9분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 퀸메락을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (2.1 mm i.d. × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 포함 아세토니트릴/0.1% 포름산 수용액(20/80, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
4.6	235	221.9	141, 149

제9. 4.1.4.181〜4.1.4.183을 다음과 같이 신설한다.

4.1.4.181 옥사티아피프롤린(Oxathiapiprolin)

1) 시험법 적용범위

과일류, 서류, 채소류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 옥사티아피프롤린을 아세토니트릴로 추출하고 디클로로메탄으로 액-액 분배한 후, 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프 - 자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

나) 액체크로마토그래프 - 질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1000 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴/물(50/50, v/v)에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

마) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 20 g(콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 20 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 잘게 갈아 혼합한 20 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(콩류 등 건조 검체의 경우 증류수 40 mL를 가한 후 30분간 방치) 아세토니트릴 100 mL을 가하여 진탕기에서 10분간 진탕한다. 추출물을 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 아세토니트릴 40 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한다. 합친 여액을 40℃ 이하의 수욕상에서 감압하여 용매를 모두 날려버린 후 증류수 100 mL를 가하고 1 N NaOH를 천천히 가하여 pH를 9〜10으로 조절한다. 이를 500 mL 용량의 분액여두에 옮기고 포화식염수 10 mL와 디클로로메탄 50 mL를 차례로 가한 후 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치시킨 후 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 남아있는 수용액 층에 디클로로메탄 50 mL를 추가로 가하여 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하의 수욕 상에서 감압하여 용매를 모두 날려버린 후, 잔류물에 디클로로메탄을 가하여 최종 부피가 16 mL가 되게 한다. [지방성 검체의 경우 잔류물에 헥산 30 mL를 건고물에 가하여 녹인 후 250 mL 분량의 분액 여두에 옮기고 아세토니트릴 30 mL로 2회 분배 추출한다. 합친 아세토니트릴 층을 40℃에서 감압 농축한 후 잔류물에 디클로로메탄을 가하여 최종부피 16 mL가 되게 한다.]

나) 정제

실리카 카트리지에 디클로로메탄 5 mL를 2〜3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 추출액 중 4 mL를 카트리지 상단에 넣고 1〜2 방울/초의 속도로 용출시켜 버리고 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸 아세테이트/디클로로메탄(15/85, v/v) 8 mL를 유출시켜 씻어 버리고 에틸 아세테이트/디클로로메탄(20/80, v/v) 10 mL를 가하고 유출시켜 받은 시험액을 감압농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압하여 용매를 모두 날려버리고 플라스크를 상온으로 냉각한 후, 잔류물에 아세토니트릴/물(50/50, v/v)을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한 뒤 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (4.6 mm i.d. × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 (65/35, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 50℃

(5) 검출기 파장 : 260 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

옥사티아피프롤린 (5.6분)

라) 정량한계

0.01 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻은 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 옥사티아피프롤린을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (2.1 mm i.d. × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼 온도 : 40℃

(3) 이동상

시간(분)	아세토니트릴(%)	물(%)
0	10	90
3	10	90
10	95	5
13	10	90
15	10	90

(4) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름시간(분)	분자량(MW)	관측질량 (Exact mass)	이온(m/z)
9.4	539.5	539	540

4.1.4.182 인다지플람(Indaziflam)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 서류, 채소류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 인다지플람을 아세토니트릴로 추출한 후 실리카 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프 - 질소·인 검출기(GC-NPD)

나) 기체크로마토그래프 - 질량분석기(GC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 각각 아세톤에 녹여 1000 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세톤에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

마) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) C18 카트리지 : C18(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

사) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 20 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 그 20 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 잘게 갈아 혼합한 20 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 및 콩류 등 건조 검체의 경우 증류수 40 mL를 가한 후 30분간 방치) 아세토니트릴 50mL를 가하여 진탕기에서 5분간 진탕한다. 추출물을 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과하고 아세토니트릴 20 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한다. 합친 여액을 40℃ 이하의 수욕상에서 감압하여 용매를 모두 날려버린 후 증류수 100 mL을 가한다. 이를 500 mL 용량의 분액여두에 옮기고 포화식염수 30 mL와 디클로로메탄 50 mL를 가한 후 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치시킨 후 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 남아있는 수용액 층에 50 mL를 추가로 가하여 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하의 수욕 상에서 감압하여 용매를 모두 날려버린 후, 잔류물에 헥산을 가하여 최종부피가 10 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다. [지방성 검체의 경우 잔류물에 헥산 30 mL를 건고물에 가하여 녹인 후 250 mL 분량의 분액 여두에 옮기고 아세토니트릴 30 mL로 2회 분배 추출한다. 합친 아세토니트릴 층을 40℃에서 감압 농축한 후 잔류물에 헥산을 가하여 최종부피 10 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터를 이용해 여과한 후 시험용액으로 한다.]

나) 정제

실리카 카트리지에 헥산 5 mL를 2〜3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 추출액을 카트리지 상단에 넣고 1〜2 방울/초의 속도로 용출시켜 버리고 차례로 에틸 아세테이트/헥산(30/70, v/v) 5 mL를 용출시켜 씻어버린 후 에틸 아세테이트/헥산(40/60, v/v) 5 mL를 용출시켜 받는다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압하여 용매를 모두 날려버리고 플라스크를 상온으로 냉각한 후, 잔류물에 아세톤을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

( * 채소류의 경우 실리카 카트리지 정제 후 다음 과정을 추가한다. C18 카트리지에 디클로로메탄 5 mL를 2〜3 방울/초의 속도로 유출하여 버린 후 고정상 상단이 노출되기 전에 건고물을 용해한 5 mL의 디클로로메탄 용액을 가한다. 이어 디클로로메탄 5 mL를 가하여 버린 후 메탄올/디클로로메탄(2/98, v/v) 10 mL를 가하여 용출시켜 받는다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압하여 용매를 모두 날려버리고 플라스크를 상온으로 냉각한 후, 잔류물에 아세톤을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.)

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5 (0.25 mm i.d. × 30 m, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상가스 및 유량 : 질소, 1 mL/min

(3) 오븐온도 : 220℃에서 검체를 주입하고 5분간 유지 후 20℃/min의 비율로 온도를 280℃까지 상승시켜 5분간 유지 후 5℃/min의 비율로 온도를 300℃까지 상승시켜 3분간 유지

(4) 주입부 온도 : 260℃

(5) 검출기 온도 : 280℃

(6) 주입량 : 1 μL, splitless

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

인다지플람 (8.9 분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 인다지플람을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5MS (0.25 mm i.d. × 30 m, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상가스 및 유량 : 헬륨, 1 mL/min

(3) 칼럼오븐온도 : 220℃에서 검체를 주입하고 5분간 유지 후 20℃/min의 비율로 온도를 280℃까지 상승시켜 5분간 유지 후 5℃/min의 비율로 온도를 300℃까지 상승시켜 3분간 유지

(4) 주입부 : 260℃

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 분자량 범위 : 50〜450 m/z

(7) 주입량 : 1 μL, splitless

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	관측질량 (Exact mass)	이온(m/z)
7.8	301.4	301	144, 286

4.1.4.183 아이속사플루톨(Isoxaflutole)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 서류, 채소류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 아이속사플루톨 및 아이속사플루톨 디케토니트릴을 0.1% 아세트산 수용액/아세토니트릴(20/80, v/v)로 추출하고 디클로로메탄으로 액-액 분배한 후, 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 아이속사플루톨 및 아이속사플루톨 디케토니트릴 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 10 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 10 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg를 잘게 갈아 혼합한 10 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 및 콩류 등 건조 검체의 경우 0.1% 아세트산 수용액 20 mL를 가한 후 30분간 방치) 0.1% 아세트산 수용액/아세토니트릴 (20/80, v/v) 50 mL를 가하여 진탕기에서 10분간 진탕한다. 추출물을 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 아세토니트릴 20 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한다. 합친 여액에 증류수 100 mL를 가하고 pH 미터기를 이용해 1 N HCl를 천천히 가해 pH 2가 되도록 한다. 이를 500 mL 용량의 분액여두에 옮기고 염화나트륨 15 g 및 디클로로메탄 50 mL를 차례로 가한 후 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치시킨 후 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 남아있는 수용액 층에 디클로로메탄 50 mL를 추가로 가하여 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하의 수욕 상에서 감압하여 용매를 모두 날려버린 후, 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종부피 5 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다. [지방성 검체의 경우 잔류물에 헥산 30 mL를 건고물에 가하여 녹인 후 250 mL 분량의 분액 여두에 옮기고 아세토니트릴 30 mL로 2회 분배 추출한다. 합친 아세토니트릴 층을 40℃에서 감압 농축한 후 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종부피 5 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터를 이용해 여과한 후 시험용액으로 한다.]

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (2.1 mm i.d. × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼 온도 : 40℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 포름산을 함유한 메탄올

(나) 이동상 B : 0.1% 포름산 수용액

시간(분)	A(%)	B(%)
0	10	90
4	10	90
9	90	10
10	90	10
12	10	90
16	10	90

(4) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) 이온화 : ESI positive-ion mode

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Spray voltage : 4.5 kV

(4) Collision gas : 아르곤

(5) 충돌에너지

분석성분	선구이온 (Precursor ion, m/z)	토막이온 (Fragment ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
아이속사플루톨	360.2	220	30
		251	20
아이속사플루톨 디케토니트릴	360.2	69	10
		251	20

※ 각 토막이온에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 토막이온도 적용이 가능함

다) 검량선 작성

표준용액을 아세토니트릴에 일정 농도로 희석한 다음 검체에 주입하고 시험용액의 조제과정에 따라 시험한 후, 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 이온의 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선(matrix matched calibration curve)을 작성한다.

라) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

아이속사플루톨 (A, 9.4 분), 아이속사플루톨 디케토니트릴 (B, 8.8 분)

마) 정량한계

0.01 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻은 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

제9. 5.2.2.1을 다음과 같이 개정한다.

5.2.2.1 축산물 중 동물용의약품 동시 다성분 시험법

5.2.2.1.1 축산물 중 항균제 동시 다성분 시험법

1) 시험법 적용범위

축산물(유, 알, 벌꿀은 제외) 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 80% 아세토니트릴로 추출한 후 C18 분말로 분산하고 아세토니트릴 포화 헥산으로 정제하여 지방을 제거한 다음 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물：3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 및 표준용액：각 동물용의약품의 표준품을 아래의 표1과 같이 조제하여 표준원액 및 표준용액으로 사용하고 모두 냉동실에 보관하여 사용한다.

표 1. 표준원액 및 표준용액의 조제방법

물질명	용매	표준원액 (μg/mL)	희석 용매	표준용액 (μg/mL)
나프실린(Nafcillin)	DMSO	5,000	물	1,500
날리딕스산(Nalidixic acid)	0.1% 암모니아수	5,000	아세토니트릴	150
노르플록사신(Norfloxacin)	0.5% 개미산	5,000	아세토니트릴	500
노보비오신(Novobiocin)	DMSO	5,000	-	-
다노플록사신(Danofloxacin)	0.5% 개미산	5,000	아세토니트릴	1,000
답손(Dapsone)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
독시싸이클린(Doxycycline)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
디클록사실린(Dicloxacillin)	DMSO	5,000	물	1,500
디플록사신(Difloxacin)	50% 메탄올	2,000	50% 메탄올	2,000
린코마이신(Lincomycin)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
마보플록사신(Marbofloxacin)	0.5% 개미산	5,000	아세토니트릴	750
발네물린(Valnemulin)	DMSO	5,000	아세토니트릴	250
버지니아마이신(Virginiamycin M1)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
벤질페니실린(Benzylpenicillin)	DMSO	5,000	물	250
사라플록사신(Sarafloxacin)	메탄올	1,000	아세토니트릴	50
세파졸린(Cefazolin)	DMSO	5,000	물	250
세파피린(Cephapirin)	DMSO	5,000	물	250
세팔렉신(Cephalexin)	50% DMSO	2,500	물	1,000
세팔로니움(Cefalonium)	DMSO	5,000	물	50
세포페라존(Cefoperazone)	DMSO	5,000	물	150
세푸록심(Cefuroxime)	DMSO	5,000	물	100
세프퀴놈(Cefquinome)	DMSO	5,000	물	250
세프티오퍼(Ceftiofur)	DMSO	5,000	-	-
스피라마이신(Spiramycin)	DMSO	5,000	아세토니트릴	1,000
시프로플록사신(Ciprofloxacin)	0.5% 개미산	5,000	아세토니트릴	500
암피실린(Ampicillin)	DMSO	5,000	물	250
에리스로마이신(Erythromycin)	DMSO	5,000	아세토니트릴	250
엔로플록사신(Enrofloxacin)	0.5% 개미산	5,000	아세토니트릴	500
오르메토프림(Ormetoprim)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
오비플록사신(Orbifloxacin)	0.5% 개미산	5,000	아세토니트릴	100
오플록사신(Ofloxacin)	0.5% 개미산	5,000	아세토니트릴	500
옥사실린(Oxacillin)	DMSO	5,000	물	500
옥소린산(Oxolinic acid)	0.1% 암모니아수	5,000	아세토니트릴	250
옥시테트라싸이클린(Oxytetracycline)	DMSO	5,000	아세토니트릴	1,000
조사마이신(Josamycin)	DMSO	5,000	아세토니트릴	200
클로람페니콜(Chloramphenicol)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
클로르테트라싸이클린(Chlortetracycline)	Methanol	5,000	아세토니트릴	1,000
클록사실린(Cloxacillin)	DMSO	5,000	물	1,500
클린다마이신(Clindamycin)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
타일로신(Tylosin)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
테트라싸이클린(Tetracycline)	DMSO	5,000	아세토니트릴	1,000
트리메토프림(Trimethoprim)	DMSO	5,000	아세토니트릴	250
티아물린(Tiamulin)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
티암페니콜(Thiamphenicol)	DMSO	5,000	아세토니트릴	250
틸미코신(Tilmicosin)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
페플록사신(Pefloxacin)	0.5% 개미산	5,000	아세토니트릴	500
플로르페니콜(Florfenicol)	DMSO	5,000	아세토니트릴	1,000
플로르페니콜아민(Florfenicol amine, 플로르페니콜 대사체)	DMSO	10,000	아세토니트릴	1,000
플루메퀸(Flumequine)	0.1% 암모니아수	5,000	아세토니트릴	500
MQCA1 (올라퀸독스 대사체)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
QCA2 (카바독스 대사체)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500

1 MQCA : 3-methyl quinoxaline-2-carboxylic acid

2 QCA : quinoxaline-2-carboxylic acid

라) 혼합 표준용액의 조제 : 100 mL 용량플라스크에 50종의 표준용액을 각각 1 mL 씩 넣고 50% 아세토니트릴로 표시선까지 채워 조제하고, 각 성분의 농도가 잔류허용기준의 50배(성분별 최저 0.5에서 최대 50 μg/mL)가 되도록 하여 냉동실에 보관한다. 혼합한 표준용액은 0.1% 개미산과 메탄올의 1:1 비율로 혼합한 용액으로 희석하여 사용한다.

마) 0.5% 개미산 : 50 mL 용량플라스크에 증류수를 적당히 넣고 개미산 250 μL를 가한 뒤 증류수로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 암모니아수 : 10 mL 용량플라스크에 증류수를 적당히 넣고 10% 수산화암모늄 용액 0.1 mL를 가한 뒤 증류수로 표시선까지 채운다.

사) 이동상 A의 조제 : 1 L 용량플라스크에 증류수를 적당히 넣고 개미산 1 mL를 가한 뒤 증류수로 표시선까지 채워 0.1% 개미산을 조제하고, 0.1% 개미산 650 mL와 메탄올 50 mL를 혼합하여 사용한다.

아) C18 분말 : 잔여실란올기가 제거된 C18 분말(55-105 μm, 125 Å) 또는 이와 동등한 것

자) 기타시약：특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 80% 아세토니트릴 10 mL를 가한 뒤, 1분간 균질화하고 15분간 진탕한다. 5,000 g에서 10분간 원심분리한 후, 상층액을 C18 분말 1 g을 미리 넣어 둔 원심분리관과 합한다. 남은 침전물에 다시 80% 아세토니트릴 10 mL를 가하고 1분간 균질화한 후 15분간 진탕한다. 5,000 g에서 10분간 원심분리하고 상층액을 이전의 상층액과 합한 후 아세토니트릴 포화 헥산 10 mL을 가한다. 1분간 진탕하고 5,000 g에서 5분간 원심분리 한 후 상층(헥산 층)을 제거하고 하층(80% 아세토니트릴 층)을 새로운 원심분리관으로 옮긴다. 이를 50°C 이하에서 질소 건고한 후 메탄올 0.25 mL와 0.1% 개미산 0.25 mL로 재분산하고 5분간 초음파 추출한다. 이 용액을 0.2 μm PVDF 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : C18(2.1 ｘ 100 mm, 1.7 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산 : 메탄올(95 : 5, v/v)

(나) 이동상 B : 메탄올

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
0.25	95	5
8.25	0	100
10.25	0	100

(4) 유속 : 0.2 mL/min

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(positive, negative)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Capillary voltage : 3.0 kV

(4) Collision gas : Ar(아르곤)

(5) 분석 대상 및 개별조건(MRM 조건)

연번	물질명 (Compound)	이온화 (Ionization mode)	머무름시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precusor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy, eV)
1	나프실린 (Nafcillin)	positive	7.43	414.47	414.1249	415.22	199.12 171.05 115.09	14 40 60
1‘	나프실린-Na (Nafcillin-Na2)	positive	7.43	436.45	436.1068	437.20	278.17 261.18 319.18	18 16 16
2	날리딕스산 (Nalidixic acid)	positive	6.36	232.24	232.0849	233.12	215.12 187.11 159.09	14 26 30
3	노르플록사신 (Norfloxacin)	positive	3.92	319.33	319.1333	320.23	302.23 233.15 276.25	22 24 18
4	노보비오신 (Novobiocin)	positive	8.92	612.62	612.2319	613.33	189.15 133.07 218.13	34 60 12
4‘	노보비오신-Na (Novobiocin-Na)	positive	8.91	634.60	634.2138	635.25	418.25 240.14 211.16	22 20 38
5	다노플록사신 (Danofloxacin)	positive	4.06	357.37	357.1490	358.25	340.22 96.07 314.25	24 24 18
6	답손 (Dapsone)	positive	3.78	248.30	248.0619	249.03	155.96 92.03 108.00	14 26 22
7	독시싸이클린 (Doxycycline)	positive	5.79	444.43	444.1532	445.25	428.22 98.02 154.05	20 42 30
8	디클록사실린 (Dicloxacillin)	positive	7.42	470.32	469.0265	470.12	160.05 311.12 114.05	16 14 36
8‘	디클록사실린-Na (Dicloxacillin-Na)	positive	7.42	492.30	491.0085	492.10	333.06 182.07	14 14
9	디플로삭신 (Difloxacin)	positive	4.26	399.39	399.1396	400.24	356.29 299.21 382.25	20 28 20
10	린코마이신 (Lincomycin)	positive	3.72	406.53	406.2237	407.31	126.17 359.34 389.33	30 20 18
11	마보플록사신 (Marbofloxacin)	positive	3.57	362.36	362.1392	363.24	72.08 345.22 320.23	22 22 16
12	발네물린 (Valnemulin)	positive	7.22	564.81	564.3596	565.46	263.20 147.08 164.02	14 40 34
13	버지니아마이신 (Virginiamycin M1)	positive	7.20	525.59	525.2474	526.28	508.38 355.24 109.10	14 20 36
14	벤질페니실린-Na (Benzylpenicillin-Na)	positive	6.56	356.37	356.0806	357.11	198.11 181.24 239.79	14 16 18
15	사라플록사신 (Sarafloxacin)	positive	4.40	385.36	385.1239	386.22	368.22 299.17 342.26	20 28 20
16	세파졸린 (Cefazolin)	positive	4.26	454.50	454.0299	455.13	323.13 156.01 124.02	12 16 38
17	세파피린 (Cephapirin)	positive	3.09	423.46	423.0558	424.15	292.17 152.04 181.09	14 22 24
18	세팔렉신 (Cephalexin)	positive	4.12	347.38	347.0939	348.19	158.05 174.07 106.11	8 14 26
19	세팔로니움 (Cefalonium)	positive	3.67	458.51	458.0718	459.17	152.03 337.13 123.11	20 10 12
20	세포페라존 (Cefoperazone)	positive	4.47	645.66	645.1423	646.24	143.11 530.26 290.20	34 12 20
21	세푸록심-Na (Cefuroxime-Na)	positive	4.28	446.36	446.0508	447.15	386.13 174.96 342.15	12 20 14
22	세프퀴놈 (Cefquinome)	positive	3.33	528.60	528.1249	529.22	134.12 167.03 396.12	16 24 12
23	세프티오퍼 (Ceftiofur)	positive	5.65	523.56	523.0289	524.13	241.13 125.19 210.07	18 56 22
24	스피라마이신 (Spiramycin)	positive	4.99	843.05	842.5139	843.55	174.11 101.02 142.13	36 46 32
25	시프로플록사신 (Ciprofloxacin)	positive	4.02	331.35	331.1333	332.23	314.241 231.11 288.27	22 34 18
26	암피실린 (Ampicillin)	positive	4.39	349.40	349.1096	350.14	106.04 174.07 160.07	18 14 12
27	에리스로마이신 (Erythromycin)	positive	6.61	733.93	733.4612	734.49	158.09 116.06 576.41	30 40 20
28	엔로플록사신 (Enrofloxacin)	positive	4.05	359.40	359.1647	360.26	316.27 342.24 245.18	18 20 26
29	오르메토프림 (Ormetoprim)	positive	4.03	274.31	274.1429	275.18	123.12 259.20 81.01	26 26 42
30	오비플록사신 (Orbifloxacin)	positive	4.22	395.37	395.1258	396.24	352.30 226.15 295.22	18 46 26
31	오플록사신 (Ofloxacin)	positive	3.80	361.37	361.1439	362.24	318.26 261.17 221.65	20 28 38
32	옥사실린 (Oxacillin)	positive	6.98	401.43	401.1045	402.20	160.06 243.16 114.06	12 14 38
32‘	옥사실린-Na (Oxacillin-Na)	positive	6.98	423.41	423.0864	424.18	182.08 265.11 248.12	18 18 16
33	옥소린산 (Oxolinic acid)	positive	5.54	261.33	261.0637	262.16	244.14 216.08 157.59	20 28 34
34	옥시테트라싸이클린 (Oxytetracycline)	positive	4.19	460.43	460.1481	461.18	426.20 201.01 443.31	20 40 14
35	조사마이신 (Josamycin)	positive	6.97	827.99	827.4667	828.56	109.09 174.11 229.20	42 34 32
36	클로람페니콜 (Chloramphenicol)	negative	5.49	323.13	322.0123	321.11	151.98 257.15 194.12	20 12 14
37	클로르테트라싸이클린 (Chlortetracycline)	positive	5.10	478.88	478.1142	479.27	444.24 154.06 462.20	22 28 18
38	클록사실린 (Cloxacillin)	positive	7.14	435.88	435.0655	436.16	277.13 114.05 160.05	16 48 12
38‘	클록사실린-Na (Cloxacillin-Na)	positive	7.14	475.87	475.0580	458.14	299.13 182.06	14 14
39	클린다마이신 (Clindamycin)	positive	5.94	424.98	424.1798	425.28	126.14 377.25 389.35	28 20 20
40	타일로신 (Tylosin)	positive	6.50	916.10	915.5191	916.55	174.11 83.09 101.01	40 52 40
41	테트라싸이클린 (Tetracycline)	positive	4.10	444.43	444.1532	445.25	410.26 154.05 427.37	18 28 12
42	트리메토프림 (Trimethoprim)	positive	3.68	290.31	290.1378	291.23	230.15 123.05 261.15	24 24 24
43	티아물린 (Tiamulin)	positive	6.43	493.74	493.3225	494.42	192.16 73.06 119.07	22 60 38
44	티암페니콜 (Thiamphenicol)	negative	3.79	356.22	355.0047	354.10	185.08 290.11 78.99	18 12 32
45	틸미코신 (Tilmicosin)	positive	5.63	869.13	868.5660	869.66	174.11 88.05 696.64	44 64 42
46	페플록사신 (Pefloxacin)	positive	3.80	333.36	333.1490	334.25	290.29 316.26 233.19	18 20 26
47	플로르페니콜 (Florfenicol)	negative	4.55	358.21	357.0004	356.03	185.07 336.12 119.07	18 10 38
47‘	플로르페니콜아민 (Florfenicol amine, 플로르페니콜 대사체)	positive	1.58	247.28	247.0678	248.10	230.13 130.21 91.05	12 22 42
48	플루메퀸 (Flumequine)	positive	6.56	261.25	261.0802	262.18	244.16 202.09 174.01	20 32 38
49	MQCA (올라퀸독스 대사체)	positive	4.99	188.18	188.0585	189.09	145.08 143.00 102.07	14 15 32
50	QCA (카바독스 대사체)	positive	4.82	174.15	174.0429	175.07	129.00 131.02 102.02	18 15 30

1 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

2 Compound-Na : sodium adduct를 의미

※ 각 생성이온(product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준물질 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하였을 때 선구이온 및 생성이온이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 상대비율이 20～50% 이내에서 일치하여야 한다. ※ 주1) 참조

8) 정량시험

정성시험에서 검출된 잔류동물용의약품은 식품공전 5.3의 정량시험법을 따른다.

주1) 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

상대이온강도(% of base peak)	LC-MS/MS (relative)
> 50%	≤ 20%
20% to 50%	≤ 25%
10% to 20%	≤ 30%
≤ 10%	≤ 50%

그림 1. 퀴놀론계 크로마토그램

그림 2. 페니실린계 크로마토그램

그림 3. 세팔로스포린계 크로마토그램

그림 4. 테트라싸이클린계 크로마토그램

그림 5. 마크로라이드계 크로마토그램

그림 6. 린코사마이드계 크로마토그램

그림 7. 플레로무티린계 크로마토그램

그림 8. 암페니콜계 크로마토그램

그림 9. 기타 항균제 크로마토그램

5.2.2.1.2 축산물 중 구충제 동시 다성분 시험법

1) 시험법 적용범위

축산물에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출하고 황산마그네슘(MgSO4) 및 일차 이차 아민(Primary Secondary Amine, PSA)로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올 또는 DMSO(Dimethylsulfoxide)에 녹여 100 mg/L가 되게 하고 이를 영하 20℃에 보관한다. 사용 시 표준품을 실온에 두어 용액의 온도가 실온과 동일해지면 사용한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 DMSO로 희석하여 적당한 농도가 되게 하고, 냉장고에 보관한다.

마) 내부표준원액 : 셀라멕틴(Selamectin) 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 DMSO(Dimethylsulfoxide)에 녹여 100 mg/L가 되게 하고 이를 영하 20℃에 보관한다. 사용 시 표준품을 실온에 두어 용액의 온도가 실온과 동일해지면 사용한다.

바) 내부표준용액 : 내부표준원액을 DMSO로 희석하여 적당한 농도가 되게 하고, 냉장고에 보관한다.

사) 맥바인(Macllvaine) 완충용액 (pH 2) : 0.1 M 구연산(Citric acid, anhydrous) 500 mL에 0.2 M 인산나트륨(Disodium hrdrogen phosphate) 45 mL 첨가하여 pH 2를 맞춘다.

아) 20 mM 개미산 수용액 : 100 mL 용량플라스크에 개미산 0.125 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

자) 0.1% 개미산(Formic acid) 수용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

차) 0.2% 개미산을 함유한 메탄올 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 1 mL을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

카) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 조직(간, 신장), 유

균질화된 검체 2 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 내부표준용액 20 μL를 첨가한다. 15초간 혼합한 후 염화나트륨 1 g을 넣은 후 균질화하고 물 2 mL를 넣고 1분간 균질화한다. 1% 초산을 포함한 아세토니트릴 10 mL를 넣고 15분간 강하게 균질화한 후 4,500 G에서 10분간 원심분리한다. 상층액을 취하여 MgSO4 900 mg, PSA 150 mg을 포함한 15 mL 원심분리관에 옮긴 후 30초간 강하게 균질화하고, 4,500 G에서 10분간 원심분리한 후 상층액을 유리튜브에 옮긴다. 50℃, 질소가스 감압농축한 후 DMSO 500 μL로 녹이고 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 조직(근육), 알

균질화된 검체 2 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 내부표준용액 20 μL를 첨가한다. 15초간 혼합한 후 염화나트륨 1 g을 넣어 균질화하고 맥바인 완충용액 2 mL를 넣고 1분간 균질화한다. 아세토니트릴:메탄올(9:1) 혼합용액 10 mL를 넣고 15분간 강하게 균질한 후 4,500 G에서 10분간 원심분리한다. 상층액을 취하여 MgSO4 900 mg, PSA 150 mg을 포함한 15 mL 원심분리관에 옮긴 후 30초간 강하게 균질화하고, 4,500 G에서 10분간 원심분리한 후 상층액을 유리튜브에 옮긴다. 50℃, 질소가스 감압농축한 후 DMSO 500 μL로 녹이고 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18 (2.1 × 100 mm, 1.8 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산과 20 mM 개미산암모늄을 함유한 물

(나) 이동상 B : 0.2% 개미산을 함유한 메탄올

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0.0	90	10
0.1	90	10
2.0	5	95
9.0	5	95
10.0	90	10
15.0	90	10

(3) 유속 : 0.25 mL/분

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive, negative)

(2) Capillary Temperature : 350℃

(3) Collision gas : Ar(아르곤)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

연번	물질명 (Compound)	이온화 (Ionization mode)	머무름 시간 (분)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy, eV)
1	니클로사미드 (Niclosamide)	negative	5.94	325	289	15
					171	26
2	니트록시닐 (Nitroxynil)	negative	4.27	289	127	25
					162	10
3	도라멕틴 (Doramectin)	positive	7.62	922	778	45
					449	45
4	라폭사니드 (Rafoxanide)	negative	8.60	624	127	35
					345	35
5	레바미졸 (Levamisole)	positive	1.70	205	178	20
					123	30
6	모란텔 (Morantel)	positive	3.92	221	164	25
					111	25
7	목시덱틴 (Moxidectin)	positive	7.68	662	467	40
					549	40
8	비치오놀 (Bithionol)	negative	6.13	355	163	20
					194	25
9	아바멕틴 (Abamectin)	positive	6.97	895.4	751	45
					449	45
10	에마멕틴 (Emamectin)	positive	5.53	886.4	158	35
					82	35
11	에프리노멕틴 (Eprinomectin)	positive	6.65	937	490	55
					368	55
12	이버멕틴 (Ivermectin)	positive	8.30	898	753	45
					609	45
13	옥시클로자니드 (Oxyclozanide)	negative	5.31	400	202	20
					364	15
14	클로르설론 (Clorsulon)	negative	3.94	378 380	342	3
					344	6
15	클로르플루아주론 (Chlorfluazuron)	negative	6.24	540	357	20
					177	40
16	클로산텔 (Closantel)	negative	6.90	661	127	50
					345	35
17	피란텔 (Pyrantel)	positive	3.68	207	150	30
					109	45
18	프라지콴텔 (Praziquantel)	positive	4.90	313	203	15
					174	35
19	플루아주론 (Fluazuron)	positive	5.86	506	158	20
					349	20
20	셀라멕틴* (Selamectin)	negative	8.35	770	333	15
					608	15

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

※ 셀라멕틴(Selamectin)은 아버멕틴계 구충제의 내부표준물질임

7) 정성시험

가) 위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다.

※ 주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

8) 정량시험

가) 정성시험에서 검출된 잔류동물용의약품은 식품공전 5.3의 정량시험법을 따른다.

나) 5.3 정량시험법에 해당물질의 시험법이 없을 경우, 정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

5.2.2.1.3 축산물 중 비스테로이드성 항염증제(NSAIDs) 동시 다성분 시험법

1) 시험법 적용범위

축산물에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 개미산 암모늄이 포함된 아세토니트릴과 물 혼합용액(4:1, v/v)으로 추출하고 C18을 이용한 분산고체상추출법으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 하고 이를 영하 20℃에 보관한다. 사용 시 표준품을 실온에 두어 용액의 온도가 실온과 동일해지면 사용한다.

라) 표준용액 : 각 표준원액을 물로 희석하여 적당한 농도가 되게 하고, 냉장고에 보관한다.

마) 200 mM 개미산 : 100 mL 용량플라스크에 개미산 1.25 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 개미산(Formic acid) 수용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 1 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

아) C18 충전제 : 입자크기 37∼55 μm, 공극크기 125 Å 또는 이와 동등한 것

자) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 2 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 200 mM 개미산암모늄 0.1 mL과 물 2 mL을 가하여 균질화한다. 아세토니트릴 8 mL을 가하고 15분간 강하게 진탕 혼합한 후 10,000 G에서 10분간 원심분리한다. 상층액을 취하여 C18 분말 500 mg을 분산시킨 후, 헥산 10 mL을 첨가하여 1분간 진탕 혼합한다. 10,000 G에서 5분간 원심분리 하고, 눈금이 표시된 시험관에 하층액 5 mL 취해 옮긴 후, 40℃에서 1 mL이 되도록 질소 농축한다. 농축액 1 mL 중 0.5 mL을 취하여 0.2 μm 필터(Polyvinylidenedifluoride, PVDF)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18 (2.1 × 50 mm, 1.7 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산 수용액

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0.00	90	10
0.20	90	10
2.50	5	95
3.50	5	95
3.51	90	10

(3) 유속 : 0.5 mL/분

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(positive, negative)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : Ar(아르곤)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

연번	물질명 (Compound)	이온화 (Ionization mode)	머무름 시간 (분)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
1	디클로페낙 (Diclofenac)	negative	2.20	294.1	250.1	10
					214.2	20
2	멜록시캄 (Meloxicam)	negative	2.02	350.0	146.1	20
					286.1	15
3	아세틸 살리실산 (Acetyl salicylic acid)	negative	1.53	137.0	93.1	15
					65.2	30
4	카프로펜 (Carprofen)	negative	2.15	272.0	228.0	15
					226.0	30
5	케토프로펜 (Ketoprofen)	positive	2.00	255.0	209.1	15
					105.1	25
6	톨페남산 (Tolfenamic acid)	negative	2.36	260.0	216.1	15
					35.1	25
7	파라세타몰 (Paracetamol)	positive	0.56	152.0	110.1	20
					65.1	30
8	페닐부타존 (Phenylbutazone)	negative	2.27	307.1	131.1	25
					279.2	20
9	플루닉신 (Flunixin)	negative	2.05	295.0	251.1	15
					209.1	30

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30 % 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

Paracetamol 152.00>110.05 (+)

Acetylsalicylic acid 137.00>93.10 (-)

Ketoprofen 255.00>209.05 (+)

Oxyphenyl butazone 322.20>295.10 (-)

Meloxicam 350.00>146.10 (-)

Flunixin 295.00>251.10 (-)

Carprofen 272.00>228.00 (-)

Diclofenac 294.10>250.05 (-)

Phenylbutazone 307.10>131.05 (-)

Tolfenamic acid 260.00>216.10 (-)

그림 1. 비스테로이드성 항염증제의 크로마토그램(0.1 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정성시험에서 검출된 잔류동물용의약품은 식품공전 5.3의 정량시험법을 따른다.

나) 5.3 정량시험법에 해당물질의 시험법이 없을 경우, 음성검체를 정성시험과 똑같은 조건에서 조제한 시험용액에 혼합표준용액을 일정농도로 첨가하여 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

제9. 5.3.1의 제목 중 “하이그로마이신B(Hygromycin B)”을 “하이그로마이신B(Hygromycin B), 파로모마이신(Paromomycin, aminosidine, monomycin)”으로 한다.

제9. 5.3.36을 다음과 같이 한다.

5.3.36 메벤다졸(Mebendazole), 알벤다졸(Albendazole), 옥스펜다졸(Oxfendazole), 옥시벤다졸(Oxibendazole), 트리클라벤다졸(Triclabendazole), 티아벤다졸(Thiabendazole), 페반텔(Febantel), 펜벤다졸(Fenbendazole), 플루벤다졸(Flubendazole)

1) 시험법 적용범위

축·수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 분산고체상 추출법(Dispersive solid phase extraction)으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 각 표준품(주1) 참조)을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 디메틸설폭사이드(DMSO)로 표시선까지 채워 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 혼합표준용액 : 각 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 내부 표준물질 표준원액 : 옥시벤다졸-D7 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 DMSO로 표시선까지 채워 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 내부 표준물질 표준원액은 냉동 보관한다.

바) 내부 표준물질 용액 : 내부 표준물질 표준원액을 메탄올로 희석하여 1 mg/L가 되게 한다.

사) 맥바인(Macllvaine) 완충용액 (pH 2) : 0.1 M 구연산(Citric acid, anhydrous) 500 mL에 0.2 M 인산나트륨(Disodium hydrogen phosphate) 45 mL를 첨가하여 pH 2로 맞춘다.

아) 산화방지용액 : 250 mL 용량플라스크에 EDTA․4Na(Tetra sodium-ethylene diamine tetraacetate) 0.07 g, 아스코르빈산 9 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

자) 20 mM 개미산암모늄 용액 : 1 L 용량플라스크에 개미산암모늄(Ammonium formate) 1.26 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

차) 0.1% 개미산 용액 : 100 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 0.1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

카) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

주1. 벤지미다졸계 구충제 및 대사산물

검사항목	분석대상물질
메벤다졸(Mebendazole)	메벤다졸(Mebendazole), 메벤다졸아민(Mebendazole-amine), 5-하이드록시 메벤다졸(5-Hydroxy mebendazole)
알벤다졸(Albendazole)	알벤다졸(Albendazole), 알벤다졸 설폭사이드(Albendazole sulfoxide), 알벤다졸 설폰(Albendazole sulfone), 2-아미노알벤다졸설폰(2-Amino albendazole sulfone)
옥시벤다졸(Oxibendazole)	옥시벤다졸(Oxibendazole)
옥스펜다졸(Oxfendazole)/ 페반텔(Febantel)/ 펜벤다졸(Fenbendazole)	옥스펜다졸(Oxfendazole), 페반텔(Febantel), 펜벤다졸(Fenbendazole),옥스펜다졸 설폰(Oxfendazole sulfone)
트리클라벤다졸 (Triclabendazole)	트리클라벤다졸(Triclabendazole), 케토트리클라벤다졸(Keto-triclabendazole)
티아벤다졸(Thiabendazole)	티아벤다졸(Thiabendazole), 5-하이드록시 티아벤다졸(5-Hydroxy thiabendazole)
플루벤다졸(Flubendazole)	플루벤다졸(Flubendazole), 2-아미노 플루벤다졸(2-Amino flubendazole)

5) 시험용액의 조제

가) 식육(근육), 연어 및 장어 이외 어류

균질화한 검체 4 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 산화방지용액 1 mL와 황산암모늄 2 g을 첨가하여 10분간 교반한다. 균질화한 검체에 1 mg/L 옥시벤다졸-D7(내부표준물질) 400 μL를 첨가한 후 60분간 평형화(Equilbration) 시킨다. 염화나트륨 0.3 g과 맥바인 완충용액 2 mL를 넣고 5분간 교반한다. ⓐ아세토니트릴 5 mL를 넣어 15분간 강하게 교반하고 -4℃에서 5,600 G 로 20분간 원심분리한 후 상층액을 취하여 산화방지용액 50 μL를 첨가한다. ⓑ잔사에 아세토니트릴 5 mL를 넣어 15분간 강하게 교반하고 -4℃에서 5,600 G 로 20분간 원심분리한 후 상층액을 취하여 산화방지용액 50 μL를 첨가한다. ⓐ와 ⓑ의 상층액을 합한 후 이산화망간 900 mg과 일차 이차 아민(Primary secondary amine, PSA) 150 mg을 포함한 15 mL 원심분리관에 옮겨 10분간 균질화한 후 상온에서 5,600 G로 15분간 원심분리한다. 상층액을 10 mL 둥근바닥플라스크에 옮겨 감압 농축한 후 메탄올 500 μL를 넣어 녹인다. 마이크로 원심분리기 튜브에 옮겨 상온에서 3,500 G로 5분간 원심분리한 후 상층액을 시험용액으로 한다.

나) 지방, 간, 신장, 유, 알, 연어, 장어

균질화한 검체 4 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 산화방지용액 1 mL와 황산암모늄 2 g을 첨가하여 10분간 교반한다. 균질화한 검체에 1 mg/L 옥시벤다졸-D7(내부표준물질) 400 μL를 첨가한 후 60분간 평형화(Equilibration) 시킨다. 유는 염화나트륨 1 g과 황산마그네슘 4 g을 첨가하고, 그 외는 염화나트륨 0.3 g을 첨가하여 5분간 교반한다. ⓐ0.1% 암모니아 함유 아세토니트릴 5 mL를 넣고 15분간 강하게 교반시킨 후 -4℃에서 5,600 G로 20분간 원심분리 후 상층액을 취하여 산화방지용액 50 μL를 첨가한다. ⓑ잔사에 0.1% 암모니아 함유 아세토니트릴 5 mL를 넣고 15분간 강하게 교반시킨 후 -4℃에서 5,600 G로 20분간 원심분리 후 상층액을 취하여 산화방지용액 50 μL를 첨가한다. ⓐ와 ⓑ의 상층액을 합한 후 모아진 상층액을 이산화망간 900 mg, 일차 이차 아민(Primary secondary amine, PSA) 150 mg과  C18 150 mg이 포함된 15 mL 원심분리관에 옮겨 10분간 균질화한 후 상온에서 5,600 G로 15분간 원심분리한다. 상층액을 둥근바닥플라스크에 옮겨 감압 농축한 후 메탄올 500 μL을 넣고 녹인 후, 마이크로 원심분리기 튜브에 옮겨 상온에서 3,500 G로 5분간 원심분리한 후 상층액을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : C18 컬럼 (Atlantis Ⓡ T3 , 2.1 mm × 100 mm, 3 μm)  또는 이와 동등한 것 (중간의 일차리간드 밀도(1.6 μmoles/m2)와 End-cap을 갖고 있어 넓은 pH 범위에서 우수한 성능을 제공하고 매우 극성인 화합물에 머무름을 주어 분리하는 실리카 기반의 역상 C18 칼럼, Trifunctional C18 bonded at an intermediate primary-ligand density, 1.6 μmoles/m2,  and having end-cap)

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 20 mM 개미산암모늄이 포함된 물

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산이 포함된 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0.0	83.0	17.0
0.1	83.0	17.0
7.0	55.0	45.0
12.0	55.0	45.0
14.0	5.0	95.0
18.5	5.0	95.0
21.0	83.0	17.0
23.0	83.0	17.0

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(케토트리클라벤다졸 : Negative, 그 외 물질 : Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)1	충돌에너지 (Collision Energy, eV)
1	메벤다졸 (Mebendazole)	11.68	295.3	296	264	22
					105	38
					77	44
2	메벤다졸아민 (Mebendazole-amine)	8.02	237.3	238	133	42
					105	28
					77	42
3	5-하이드록시 메벤다졸 (5-Hydroxy Mebendazole)	9.46	297.3	298	266	22
					160	38
					79	46
4	알벤다졸 (Albendazole)	13.39	265.3	266	234	20
					191	38
					159	46
5	알벤다졸 설폭사이드 (Albendazole sulfoxide)	7.17	281.3	282	240	10
					208	24
					159	44
6	알벤다졸 설폰 (Albendazole sulfone)	8.69	297.3	298	266	20
					224	30
					159	42
7	2-아미노알벤다졸설폰 (2-Amino albendazole sulfone)	3.61	239.3	240	198	18
					133	34
					106	52
8	옥시벤다졸 (Oxibendazole)	11.10	249.3	250	218	18
					176	32
					148	42
9	옥스펜다졸 (Oxfendazole)	9.17	315.4	316	284	18
					191	22
					159	36
10	옥스펜다졸 설폰 (Oxfendazole sulfone)	10.77	331.4	332	300	24
					159	44
					77	42
11	페반텔 (Febantel)	17.30	446.4	447	415	10
					383	18
					280	36
12	펜벤다졸 (Fenbendazole)	15.70	299.4	300	268	22
					159	40
					131	54
13	트리클라벤다졸 (Triclabendazole)	17.72	359.7	361	346	30
					274	44
					199	50
14	케토트리클라벤다졸 (Keto-triclabendazole)	16.57	327.9	327	181	24
					146	35
					118	45
15	티아벤다졸 (Thiabendazole)	7.67	201.3	202	175	26
					131	38
					65	52
16	5-하이드록시 티아벤다졸 (5-Hydroxy thiabendazole)	3.55	217.2	218	191	28
					147	38
					108	38
17	플루벤다졸 (Flubendazole)	12.29	313.3	314	282	22
					123	40
					95	64
18	2-아미노 플루벤다졸 (2-Amino flubendazole)	8.71	255.3	256	133	46
					123	30
					95	48
19	옥시벤다졸-d7 (내부표준물질) (Oxibendazole d7)	11.00	256.3	257	225	16
					177	30
					149	42

(4) 분석대상물질의 개별 조건

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30 % 이내에서 일치하여야 한다(주2) 참조)

주2. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위(CAC/GL 71-2009)

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
> 20% ∼ ≤ 50%	≤ 25%
> 10% ∼ ≤ 20%	≤ 30%

메벤다졸	메벤다졸 아민
5-하이드록시 메벤다졸	알벤다졸
알벤다졸 설폭사이드	알벤다졸 설폰
2-아미노알벤다졸 설폰	옥시벤다졸
옥스펜다졸	옥스펜다졸 설폰
페반텔	펜벤다졸
트리클라벤다졸	케토트리클라벤다졸
티아벤다졸	5-하이드록시 티아벤다졸
플루벤다졸	2-아미노 플루벤다졸
옥시벤다졸-d7(내부표준물질)

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 메벤다졸(11.68분), 메벤다졸아민(8.02분), 5-하이드록시 메벤다졸(9.46), 알벤다졸(13.39), 알벤다졸 설폭사이드(7.17), 2-아미노알벤다졸설폰(3.61), 옥시벤다졸(11.10), 옥스펜다졸(9.17), 옥스펜다졸 설폰(10.77), 페반텔(17.30), 펜벤다졸(15.70), 트리클라벤다졸(16.57), 티아벤다졸 (7.67), 5-하이드록시 티아벤다졸(3.55), 플루벤다졸(12.29), 2-아미노 플루벤다졸(8.71), 옥시벤다졸-d7(11.00)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 매트릭스시료(Sample blank)에 혼합표준용액을 일정농도로 첨가하여 표준물질과 내부표준물질과의 피이크 면적(또는 높이)의 비로부터 표준물질 각각의 검량선을 작성하고 검량선에 의하여 시료를 정량한다. 시험용액의 크로마토그램으로부터 대상성분의 정량이온(Quantitative ion)과 내부표준물질의 정량이온과의 피이크 면적(또는 높이) 비에 따라 각각 정량한다.

✳ 페반텔(FB), 펜벤다졸(FBZ), 옥스펜다졸(OXF)은 옥스펜다졸 설폰(OXF-SO2)등가치로 환산하여 그 합을 구한다.

[eqn: C _{OFZ-SO _{2}} `=` LEFT ( C _{FBZ} TIMES {M _{OXF-SO _{2}}} over {M _{FBZ}} `+`C _{OXF} TIMES {M _{OXF-SO _{2}}} over {M _{OXF}} +`C _{OXF-SO _{2}} TIMES {M _{OXF-SO _{2}}} over {M _{OXF-SO _{2}}} ` RIGHT )]

[eqn: =C _{FBZ} TIMES {331} over {299} +C _{OXF} TIMES {331} over {315} +C _{OXF-SO2} TIMES {331} over {331}# =C _{FBZ} TIMES 1.107+C _{OXF} TIMES 1.051+C _{OXF-SO2} TIMES 1`]

* C : 농도(mg/kg), M : 분자량

✳ 메벤다졸(MBZ)은 메벤다졸(MBZ), 메벤다졸 아민(MBZ-NH2,), 5-하이드록시 메벤다졸(5OH-MBZ)을 메벤다졸(MBZ) 등가치로 환산하여 그 합을 구한다.

[eqn: C _{MBZ} `=` LEFT ( C _{MBZ} TIMES {M _{MBZ}} over {M _{MBZ}} `+`C _{MBZ-NH _{2}} TIMES {M _{MBZ}} over {M _{MBZ-NH _{2}}} `+`C _{5OH-MBZ} TIMES {M _{MBZ}} over {M _{5OH-MBZ}} RIGHT )]

[eqn: =C _{MBZ} TIMES {295} over {295} +C _{MBZ-NH _{2}} TIMES {295} over {237} +C _{5OH-MBZ} TIMES {295} over {297}# =C _{MBZ} TIMES 1+C _{MBZ-NH _{2}} TIMES 1.245+C _{5OH-MBZ} TIMES 0.993`]

* C : 농도(mg/kg), M : 분자량

나) 정량한계

물질	정량한계(mg/kg 또는 mg/L)
	축산물						수산물
	근육	지방	간	신장	유	알	넙치	연어
메벤다졸 (Mebendazole)	0.003	0.003	0.01	0.001	0.002	0.003	0.005	0.003
메벤다졸아민 (Mebendazole-amine)	0.003	0.001	0.003	0.0007	0.002	0.002	0.004	0.003
5-하이드록시 메벤다졸 (5-Hydroxy mebendazole)	0.003	0.001	0.001	0.001	0.002	0.002	0.004	0.002
알벤다졸 (Albendazole)	0.03	0.004	0.3	0.4	0.003	0.004	0.01	0.009
알벤다졸 설폭사이드 (Albendazole sulfoxide)	0.004	0.004	0.2	0.1	0.003	0.001	0.004	0.002
알벤다졸 설폰 (Albendazole sulfone)	0.001	0.002	0.05	0.07	0.001	0.0008	0.004	0.002
2-아미노알벤다졸설폰 (2-Amino albendazole sulfone)	0.0009	0.0007	0.05	0.09	0.002	0.002	0.002	0.004
옥시벤다졸 (Oxibendazole)	0.01	0.05	0.03	0.008	0.003	0.002	0.02	0.1
옥스펜다졸 (Oxfendazole)	0.003	0.004	0.03	0.003	0.002	0.003	0.01	0.006
옥스펜다졸 설폰 (Oxfendazole sulfone)	0.004	0.002	0.001	0.002	0.003	0.003	0.004	0.002
페반텔 (Febantel)	0.004	0.002	0.01	0.004	0.003	0.002	0.005	0.005
펜벤다졸 (Fenbendazole)	0.004	0.006	0.03	0.006	0.001	0.001	0.008	0.007
트리클라벤다졸 (Triclabendazole)	0.03	0.02	0.08	0.08	0.0007	0.004	0.07	0.04
케토트리클라벤다졸 (Keto-triclabendazole)	0.03	0.01	0.04	0.03	0.002	0.004	0.09	0.03
티아벤다졸 (Thiabendazole)	0.01	0.01	0.01	0.03	0.02	0.001	0.008	0.03
5-하이드록시 티아벤다졸 (5-Hydroxy thiabendazole)	0.003	0.002	0.003	0.004	0.003	0.002	0.0007	0.002
플루벤다졸 (Flubendazole)	0.004	0.002	0.0009	0.003	0.004	0.05	0.004	0.003
2-아미노 플루벤다졸 (2-Amino flubendazole)	0.001	0.002	0.002	0.002	0.003	0.002	0.003	0.003

5.3.37 및 5.3.38을 삭제하고 5.3.39 ∼ 5.3.47을 각각 5.3.37 ∼ 5.3.45로 한다.

제9. 5.3.46을 다음과 같이 한다.

5.3.46 독시싸이클린(Doxycycline), 미노싸이클린(Minocycline), 옥시테트라싸이클린(Oxytetracycline), 클로르테트라싸이클린(Chlortetracycline),  테트라싸이클린(Tetracycline)

5.3.46.1 제1법

1) 시험법 적용범위

축‧수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 분석대상물질을 EDTA와 옥살산을 첨가한 아세토니트릴과 아세트산에틸 혼합액으로 추출한 후 헥산으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 각 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 혼합표준용액 : 각 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 0.1% 개미산(Formic acid) : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 개미산(Formic acid)을 함유한 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 1 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 옥살산과 EDTA를 각각 0.2 g을 가하여 10분간 진탕한다. 여기에 아세토니트릴과 아세트산에틸 (2:1, v/v) 혼합액을 20 mL을 넣어 15분간 진탕 혼합하고, 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심 분리한 후 상층액을 50 mL 원심분리관에 취한다. 상층액에 헥산 20 mL을 넣어 5분간 진탕하고 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심 분리한 후 하층액만 15 mL 원심분리관에 취하여 40℃에서 질소농축 한다. 0.1% 포름산을 함유한 아세토니트릴 1 mL을 가한 뒤 재분산하여 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심분리 하여 상층액을 0.45 μm 필터( Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：Xbridge C18 (2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 포름산을 함유한 물

(나) 이동상 B : 0.1% 포름산을 함유한 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
6	70	30
10	70	30
11	95	5
17	95	5

(3) 유속 : 0.3 mL/분

(4) 칼럼온도 : 30℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Fragment ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy, eV)
1	독시싸이클린 (Doxycycline)	9.72	444.43	445	428	23
					153	41
					201	51
2	미노싸이클린 (Minocycline)	6.33	457.47	458	441	27
					283	55
					131	103
3	옥시테트라싸이클린 (Oxytetracycline)	7.11	460.43	461	426	23
					443	19
					201	43
4	클로르테트라싸이클린 (Chlortetracycline)	9.23	478.88	479	444	25
					154	35
					462	23
5	테트라싸이클린 (Tetracycline)	7.58	444.43	445	410	23
					427	19
					226	73

(4) 분석대상물질의 개별 조건

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

독시싸이클린(doxycycline)

미노싸이클린(minocycline)

옥시테트라싸이클린(oxytetracycline)

클로르테트라사이클린(chlortetracycline)

테트라사이클린(tetracycline)

그림 1. 독시싸이클린(9.72분, 0.02 mg/kg), 미노싸이클린(6.33분, 0.02 mg/kg), 옥시테트라싸이클린(7.11분, 0.01 mg/kg), 클로르테트라싸이클린(9.23분, 0.01 mg/kg), 테트라싸이클린(7.58분, 0.01 mg/kg) 표준품의 크로마토그램

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

독시싸이클린(Doxycycline) : 0.01 mg/kg

미노싸이클린(Minocycline) : 0.01 mg/kg

옥시테트라싸이클린(Oxytetracycline) : 0.005 mg/kg

클로르테트라싸이클린(Chlortetracycline) : 0.005 mg/kg

테트라싸이클린(Tetracycline): 0.005 mg/kg

5.3.46.2 제2법

1) 시험법 적용범위를 다음과 같이 한다.

벌꿀 등에 적용한다.(단, 미노싸이클린은 제외한다.)

5.3.49 ∼ 5.3.74를 각각 5.3.47 ∼ 5.3.72로 한다.

5.3.75를 삭제하고, 5.3.76 ∼ 5.3.94를 각각 5.3.73 ∼ 5.3.91로 한다.

5.3.95를 삭제하고 5.3.96 ∼ 5.3.112를 각각 5.3.92 ∼ 5.3.108로 한다.

5.3.109 ∼ 122를 다음과 같이 신설한다.

5.3.109 날록손(Nnaloxone), 알트레노제스트(Altrenogest), 요힘빈(Yohimbine), 치오펜네이트(Thiophanate)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 삼불화초산이 함유된 아세토니트릴과 황산마그네슘, 염화나트륨, 시트르산나트륨, 시트르산수소나트륨으로 추출하고 C18과 황산마그네슘을 이용한 분산고체상추출법(Dispersive solid phase extraction)으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 각 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 혼합표준용액 : 각 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 0.1% 삼불화초산(Trifluoroacetic acid, TFA)이 함유된 아세토니트릴 : 1000 mL 용량플라스크에 삼불화초산(TFA) 1 mL를 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

바) 0.2% 개미산(Formic acid) : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 2 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 물 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

아) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 메탄올 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

자) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 0.1% 삼불화초산이 함유된 아세토니트릴 20 mL를 가한 후 5분간 진탕한다. 염화나트륨 1 g, 황산마그네슘 4 g, 시트르산나트륨 1 g, 시트르산수소나트륨 0.5 g을 넣어 5분간 진탕한 후, 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심 분리하고 상층액을 취하여 50℃에서 10 mL가 되도록 질소 농축한다. 여기에 C18 150 mg과 황산마그네슘 900 mg을 넣어 5분간 진탕한 후 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심 분리한다. 상층액을 취하여 50℃에서 질소농축한 후 이동상A 0.5 mL와 이동상B 0.5 mL에 녹여 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심 분리한 후, 0.45 μm 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE) 로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：Xbridge C18 (2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.2% 개미산 : 10 mM 개미산암모늄을 함유한 물(1:1, v/v)

(나) 이동상 B : 0.2% 개미산 : 10 mM 개미산암모늄을 함유한 메탄올(1:1, v/v)

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	100	0
5	100	0
10	0	100
25	0	100
26	100	0
35	100	0

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 30℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy, eV)
1	날록손 (Naloxone)	12.92	327.37	328	310	23
					212	57
					128	101
2	알트레노제스트 (Altrenogest)	15.74	310.42	311	227	37
					115	105
					165	75
3	요힘빈 (Yohimbine)	14.11	354.44	355	144	45
					115	105
					212	35
4	치오펜네이트 (Thiophanate)	15.04	370.48	371	151	33
					93	97
					118	97

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다 ※주1 참조

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

날록손(Naloxone)

알트레노제스트(Altrenogest)

요힘빈(Yohimbine)

치오펜네이트(Thiophanate)

그림 1. 날록손(12.92분, 0.1 mg/kg), 알트레노제스트(15.74분, 0.1 mg/kg), 요힘빈(14.11분, 0.1 mg/kg), 치오펜네이트(15.04분, 0.1 mg/kg) 표준품의 크로마토그램.

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 면적(또는 높이)의 비로부터 표준물질의 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 정량이온과의 피크 면적(또는 높이) 비에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

날록손(Naloxone) : 0.005 mg/kg

알트레노제스트(Altrenogest) : 0.0002 mg/kg

요힘빈(Yohimbine) : 0.0005 mg/kg

치오펜네이트(Thiophanate) : 0.002 mg/kg

5.3.110 비치오놀(Bithionol)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 분석대상물질을 개미산이 함유된 아세토니트릴과 황산마그네슘, 염화나트륨, 시트르산나트륨, 시트르산수소나트륨으로 추출하고 C18과 황산마그네슘으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 아세토니트릴에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 0.1% 개미산 (Formic acid) : 1000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 0.1% 개미산이 함유된 아세토니트릴 20 mL을 가한 후 5분간 진탕한다. 여기에 염화나트륨 1 g, 황산마그네슘 4 g, 시트르산나트륨 1 g, 시트르산수소나트륨 0.5 g을 넣어 5분간 진탕한 후, 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심 분리하고 상층액을 취하여 50℃에서 10 mL가 되도록 질소 농축한다. 여기에 C18 150 mg과 황산마그네슘 900 mg을 넣어 5분간 진탕한 후 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심 분리한다. 상층액을 취하여 50℃에서 질소농축한 후 이동상A 0.5 mL와 이동상B 0.5 mL에 녹여 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심 분리한 후, 0.45 μm 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：Xbridge C18 (2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산을 함유한 물

(나) 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	90	10
3	90	10
5	5	95
18	5	95
18.1	90	10
25	90	10

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 25℃

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Negative)

(2) Gas temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질의 충돌 에너지

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy, eV)
1	비치오놀 (Bithionol)	11.93	353.88	355	161	-34
					163	-36
					194	-38

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

그림. 비치오놀(11.9분) 표준품의 크로마토그램 (0.001 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

비치오놀(Bithionol) : 0.00025 mg/kg

5.3.111 폴리믹신 비(Polymyxin B)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 삼염화초산이 함유된 아세토니트릴과 삼불화초산으로 추출하여 Plexa 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 0.1% 개미산 수용액으로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) Plexa 카트리지 : N-Vinylpyrrolidine과 Divinylbenzene이 Copolymer의 형태로 결합된 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(6 cc, 200 mg) 또는 이와 동등한 것

바) 0.1% 개미산(Formic acid) : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 0.1% 개미산(Formic acid)을 함유한 메탄올 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 1 mL을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

아) 10% 삼염화초산(Trichloroacetic acid)이 함유된 아세토니트릴 : 100 mL 용량플라스크에 삼염화초산 10 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

자) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 10% 삼염화초산이 함유된 아세토니트릴 3 mL을 가한 후 5분간 진탕한다. 0.5% 삼불화초산 용액 12 mL을 가하고 5분간 진탕한다. 4℃, 2,600 G에서 20분간 원심분리하고 상층액을 50 mL 원심 분리관에 옮긴 후, 40℃에서 질소 농축하여 12 mL 이하가 되도록 한다. 이를 1분간 진탕한 후, 4℃, 15,000 G에서 20분간 원심분리 한다. 미리 메탄올 5 mL과 물 5 mL로 Plexa 카트리지를 활성화시킨 후 추출액을 흡착시키고 2% 메탄올 수용액 5 mL로 2회 세척한다. 새로운 원심 분리관에 2% 개미산 함유 아세토니트릴 : 메탄올(1:1, v/v) 혼합용액 10 mL로 용출한 후, 40℃ 이하의 수욕 중에서 질소농축 한다. 잔류물은 0.1% 개미산 용액 1 mL로 재분산하여 1분간 진탕한 후 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심분리하고 0.2 μm 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：XBridge C18 (2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산을 함유한 물

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
4	95	5
8	30	70
16	30	70
20	95	5
25	95	5

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 20℃

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량	선구이온 (Precusor ion, m/z)	생성이온 (product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy, eV)
폴리믹신 비 (Polymyxin B)	11.48	1301.56	402	396	19
				241	21
				202	23

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 ± 20～30% 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	± 20%
> 20%, ≤ 50%	± 25%
> 10%, ≤ 20%	± 30%

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 폴리믹신 비(11.48분) 표준품의 크로마토그램(0.02 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

폴리믹신 비(Polymyxin B) : 0.01 mg/kg

5.3.112 페노뷰카브(Fenobucarb)

1) 시험법 적용범위

축‧수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 분석대상물질을 삼불화초산이 함유된 아세토니트릴과 황산마그네슘, 염화나트륨, 시트르산나트륨, 시트르산수소나트륨으로 추출하고 C18과 황산마그네슘을 이용하여 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 0.1% 삼불화초산(Trifluroacetic acid, TFA)이 함유된 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 삼불화초산 1 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

바) 0.2% 개미산(Formic acid) : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 2 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 물 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

아) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 메탄올 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

자) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 0.1% 삼불화초산이 함유된 아세토니트릴 20 mL을 가한 후 5분간 진탕한다. 염화나트륨 1 g, 황산마그네슘 4 g, 시트르산나트륨 1 g, 시트르산수소나트륨 0.5 g을 넣어 5분간 진탕한 후, 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심 분리하고 상층액을 취하여 50℃에서 10 mL이 되도록 질소 농축한다. 여기에 C18 150 mg과 황산마그네슘 900 mg을 넣어 5분간 진탕한 후 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심 분리한다. 상층액을 취하여 50℃에서 질소농축한 후 이동상A 0.5 mL와 이동상B 0.5 mL에 녹여 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심 분리한 후, 0.45 μm 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18 (2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.2% 개미산 : 10 mM 개미산암모늄을 함유한 물(1:1, v/v)

(나) 이동상 B : 0.2% 개미산 : 10 mM 개미산암모늄을 함유한 메탄올(1:1, v/v)

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
1	95	5
2	5	95
10	5	95
11	95	5
15	95	5

(3) 유속 : 0.3 mL/분

(4) 칼럼온도 : 30℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량	선구이온 (Precusor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy, eV)
페노뷰카브 (Fenobucarb)	6.73	207.27	208	95	17
				152	11
				77	51

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 페노뷰카브(6.73분) 표준품의 크로마토그램 (0.01 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

페노뷰카브(Fenobucarb) : 0.002 mg/kg

5.3.113 페노티아진(Phenothiazine)

1) 시험법 적용범위

축산물(식육) 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 분석대상물질을 개미산과 개미산암모늄이 함유된 아세토니트릴로 추출하여 헥산으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 0.2% 개미산이 함유된 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 2 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

바) 개미산암모늄과 0.2% 개미산이 함유된 아세토니트릴 혼합용액 :  1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 20 mL 증류수에 녹인 후 0.2% 개미산이 함유된 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

사) 0.2% 개미산(Formic acid) : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 2 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

아) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 물 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

자) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 개미산암모늄과 0.2% 개미산이 함유된 아세토니트릴 혼합용액(바) 20 mL 가한 뒤 5분간 진탕한다. 이를 2,600 G에서 15분간 원심 분리한 후 상층액을 취한 뒤 헥산 20 mL을 첨가하여 5분간 진탕한다. 2,600 G에서 15분간 원심 분리한다. 상층액을 취하여 50℃에서 질소농축한 후 아세토니트릴 3 mL로 재분산하여 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심 분리하여 0.45 μm 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18 (2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.2% 개미산 : 10 mM 개미산암모늄을 함유한 물(1:1, v/v)

(나) 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
5	70	30
15	70	30
20	95	5
25	95	5

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 35℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy, eV)
페노티아진 (Phenothiazine)	13.00	199.27	199	167	33
				166	39
				139	53

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 페노티아진(13.0분) 표준품의 크로마토그램(0.04 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

페노티아진(Phenothiazine) : 0.001 mg/kg

5.3.114 푸마길린(Fumagillin)

1) 시험법 적용범위

꿀, 어류 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 물 또는 개미산이 함유된 아세토니트릴로 추출하고 Strata-X 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) Strata-X 카트리지 : 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(6 cc, 200 mg) 또는 이와 동등한 것

바) 0.1% 개미산(Formic acid) : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 0.1% 개미산(Formic acid)을 함유한 메탄올 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 1 mL을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

아) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 물 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

자) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 메탄올 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

차) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 꿀

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 증류수를 10 mL 가하여 10분간 진탕한 후 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심분리한다. 미리 메탄올 5 mL과 물 5 mL로 Strata-X 카트리지를 활성화시킨 후 추출액을 흡착시키고 40% 메탄올 수용액 5 mL로 2회 세척한다. 새로운 원심 분리관에 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴 6 mL로 용출한 후, 40℃ 이하의 수욕 중에서 질소농축 한다. 잔류물을 0.1% 개미산과 10 mM 개미산암모늄을 함유한 메탄올로 재분산하여 1분간 진탕한 후 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심분리하고 0.2 μm 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

나) 어류

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴을 20 mL 가한 후 5분간 진탕한다. 여기에 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심분리한 후 상층액을 취하여 40℃ 이하의 수욕 중에서 질소농축 하여 0.5 mL이 되게 하고 증류수 5 mL로 재분산한다. 미리 메탄올 5 mL과 물 5 mL로 Strata-X 카트리지를 활성화시킨 후 추출액을 흡착시키고 40% 메탄올 수용액 5 mL로 세척한다. 새로운 원심 분리관에 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴 10 mL로 용출한 후, 40℃ 이하의 수욕 중에서 질소농축 한다. 잔류물을 0.1% 개미산과 10 mM 개미산암모늄을 함유한 메탄올로 재분산하여 1분간 진탕한 후 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심분리하고 0.2 μm 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：Phenomenex Luna C18 (2.0 × 100 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산 : 10mM 개미산암모늄을 함유한 물(1:1, v/v)

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산 : 10mM 개미산암모늄을 함유한 메탄올(1:1, v/v)

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
5	95	5
10	5	95
20	5	95
25	95	5
30	95	5

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 35℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy, eV)
푸마길린 (Fumagillin)	16.62	458.54	459	131	41
				177	21
				103	83

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 푸마길린(16.62분)표준품의 크로마토그램(0.02 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

푸마길린(Fumagillin) : 0.01 mg/kg

5.3.115 니스타틴(Nystatin), 메토미데이트(Metomidate), 부파바쿠온(Buparvaquone), 아르사닐산(p-Arsanilic acid)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 분석대상물질을 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기 (LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 :

(1) 니스타틴 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 DMSO (Dimethylsulfoxide)에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

(2) 부파바쿠온, 메토미데이트, 아르사닐린산 각 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 혼합표준용액 : 각 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 0.63 g의 개미산암모늄을 넣고 20 mL의 물로 잘 녹인 뒤 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 개미산(Formic acid)을 함유한 물 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

아) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 10 mM 개미산암모늄이 함유된 아세토니트릴 20 mL을 가하여 15분간 진탕 혼합한 후 4℃, 2,600  G에서 15분간 원심분리한다. 상층액을 50 mL 원심분리관에 취하고 20 mL 헥산을 넣어 10분간 진탕한 후 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심분리한다. 상층액을 15 mL 원심분리관에 취하고 40℃에서 0.5 mL이 될 때까지 질소농축한다. 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴 0.5 mL을 가한 뒤 재분산하고 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심분리하여 상층액을 0.45 μm 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : Phenomenex Luna(2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산을 함유한 물

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	100	0
5	100	0
7	5	95
17	5	95
20	100	0
25	100	0

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
1	니스타틴 (Nystatin)	11.28	926.09	926.580	297.0	39
					691.3	33
					673.3	33
2	메토미데이트 (Metomidate)	11.72	230.26	231.151	127.1	13
					95.1	29
					105.1	27
3	부파바쿠온 (Buparvaquone)	16.87	326.43	327.225	189.0	29
					115.1	67
					57.1	53
4	아르사닐산 (p-Arsanilic acid)	11.74	217.05	217.236	155.1	19
					111.0	21
					173.0	15

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

니스타틴 (Nystatin)

메토미데이트 (Metomidate)

부파바쿠온 (Buparvaquone)

아르사닐산(p-Arsanilic acid)

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 니스타틴(11.28분), 메토미데이트(11.72분), 부파바쿠온(16.87분), 아르사닐산(11.74분) 표준품의 크로마토그램 (0.01 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 면적(또는 높이)의 비로부터 표준물질의 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 정량이온과의 피크 면적(또는 높이) 비에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

니스타틴(Nystatin) : 0.005 mg/kg

메토미데이트(Metomidate) : 0.005 mg/kg

부파바쿠온(Buparvaquone) : 0.005 mg/kg

아르사닐산(p-Arsanilic acid) : 0.005 mg/kg

5.3.116 나이트록소린(Nitroxoline)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 분석대상물질을 10 mM 개미산암모늄이 함유된 아세토니트릴과 황산마그네슘, 염화나트륨, 시트르산나트륨, 시트르산수소나트륨으로 추출하고 C18과 황산마그네슘으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 0.1% 삼불화초산을 함유한 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다..

라) 표준용액 : 표준원액을 0.1% 삼불화초산을 함유한 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 0.1% 삼불화초산(Trifluroacetic acid, TFA)이 함유된 메탄올 : 1,000 mL 용량플라스크에 삼불화초산 1 mL을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 삼불화초산이 함유된 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 삼불화초산 1 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

사) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)이 함유된 아세토니트릴 :

1,000 mL 용량플라스크에 0.63 g의 개미산암모늄을 넣고 20 mL의 물로 잘 녹인 뒤 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

아) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 10 mM 개미산암모늄이 함유된 아세토니트릴 20 mL을 가하여 5분간 진탕 혼합한다. 여기에 염화나트륨 1 g, 황산마그네슘 4 g, 시트르산나트륨 1 g, 시트르산수소나트륨 0.5 g을 넣어 15분간 진탕한 후, 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심 분리한다.  새로운 원심분리관에 상층액을 취하고, C18 150 mg과 황산마그네슘 900 mg을 넣어 10분간 진탕한 후 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심 분리한다. 상층액을 15 mL 원심분리관에 취하여 40℃에서 0.5 mL이 될 때까지 질소농축한다. 0.1% 삼불화초산이 함유된 아세토니트릴 1.5 mL을 가한 뒤 재분산하고 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심 분리하여 0.45 μm 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : Phenomenex Luna C18 (2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 삼불화초산을 함유한 물

(나) 이동상 B : 0.1% 삼불화초산을 함유한 아세토니트릴(ACN)

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
3	95	5
6	5	95
13	5	95
15	95	5
20	95	5

(3) 유속 : 0.25 mL/분

(4) 칼럼온도 : 30℃

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
나이트록소린 (Nitroxoline)	9.10	190.156	191.154	145.1	27
				127.0	43
				117.1	41

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다 ※주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 나이트록소린 (9.10분) 표준품의 크로마토그램 (0.01 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

나이트록소린(Nitroxoline) : 0.005 mg/kg

5.3.117 데하이드로콜산(Dehydrocholic acid), 안트라닐산(Anthranilic acid)

1) 시험법 적용범위

축‧수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 분석대상물질을 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 각 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 혼합표준용액 : 각 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 0.63 g의 개미산암모늄을 넣고 20 mL의 물로 잘 녹인 뒤 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 개미산(Formic acid)을 함유한 물 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

아) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 10 mM 개미산암모늄이 함유된 아세토니트릴 20 mL을 가하여 15분간 진탕 혼합한 후, 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심 분리한다. 상층액을 50 mL 원심분리관에 취하고  20 mL 헥산을 넣어 10분간 진탕 혼합한 후 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심분리한다. 상층액을 15 mL 원심분리관에 취하고 40℃에서 0.5 mL이 될 때까지 질소농축한다. 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴 1.5 mL을 가한 뒤 재분산하고 4℃, 15,000G에서 10분간 원심분리 하여 상층액을 0.45 μm 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：Phenomenex Luna (2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산을 함유한 물

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	100	0
3	100	0
5	5	95
15	5	95
17	100	0
20	100	0

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 30℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Negative)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
1	데하이드로콜산 (Dehydrocholic acid)	10.19	402.52	401.155	249.3	-44
					331.3	-24
					215.3	-46
2	안트라닐산 (Anthranilic acid)	9.70	137.14	135.887	92.1	-20
					65.1	-44
					90.0	-50

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

데하이드로콜산(Dehydrocholic acid)

안트라닐산(Anthranilic acid)

그림 1. 데하이드로콜산(10.19분), 안트라닐산(9.70분) 표준품의 크로마토그램(0.01 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

데하이드로콜산(Dehydrocholic acid) : 0.005 mg/kg

안트라닐산(Anthranilic acid) : 0.005 mg/kg

5.3.118 메텐아민(Methenamine)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 분석대상물질을 10 mM 개미산암모늄이 함유된 아세토니트릴로 추출한 뒤 헥산과 황산마그네슘, 일차 이차 아민(Primary secondary amine, PSA)으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다..

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 물 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 0.63 g의 개미산암모늄을 넣고 20 mL의 물로 잘 녹인 뒤 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 10 mM 개미산암모늄을 함유한 아세토니트릴 20 mL을 가하여 15분간 진탕 혼합한 후 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심 분리한다. 상층액을 50 mL 원심분리관에 취하여 20 mL 헥산을 넣어 10분간 진탕 혼합하고 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심분리한다. 상층액을 15 mL 원심분리관에 취하고 황산마그네슘 900 mg과 PSA 50 mg을 넣고 5분간 진탕 혼합한 뒤 2,600 G에서 15분간 원심 분리한다. 상층액을 취하여 40℃에서 0.5 mL가 될 때까지 질소농축한 후 아세토니트릴 1.5 mL을 가한 뒤 재분산한다. 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심분리 한 후 상층액을 0.45 μm 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：XBridge HILIC (2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 10 mM 개미산암모늄을 함유한 물

(나) 이동상 B : 아세토니트릴(ACN)

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	25	75
10	25	75

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 35℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
메텐아민 (Methenamine)	3.74	140.19	141.176	112.0	17
				42.1	37
				85.1	21

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 메텐아민(3.74분) 표준품의 크로마토그램 (0.01 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

메텐아민(Methenamine) : 0.002 mg/kg

5.3.119 토노포스판(Tonophosphan)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 분석대상물질을 10 mM 개미산암모늄을 함유한 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 물 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 0.63 g의 개미산암모늄을 넣고 20 mL의 물로 잘 녹인 뒤 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 10 mM 개미산암모늄을 함유한 아세토니트릴 20 mL을 가하여 15분간 진탕 혼합한 후 2,600 G에서 15분간 원심분리한다. 상층액을 취하여 헥산 20 mL을 가하고 10분간 진탕한 후 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심분리한다. 상층액을 취하여 40℃에서 0.5 mL이 될 때까지 질소농축한 후 아세토니트릴 1.5 mL을 가하여 재분산하고 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심 분리한 후, 0.45 μm 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：Phenomenex Luna C18 (2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 10 mM 개미산암모늄을 함유한 물

(나) 이동상 B : 아세토니트릴(ACN)

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
3	5	95
7	5	95
8	95	5
20	95	5

(3) 유속 : 0.3 mL/분

(4) 칼럼온도 : 35℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
토노포스판 (Tonophosphan)	4.76	220.16	200.190	136.2	19
				134.0	39
				121.2	29

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 토노포스판(4.76분) 표준품의 크로마토그램 (0.01 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

토노포스판(Tonophosphan) : 0.005 mg/kg

5.3.120 세파드록실(Cefadroxil)

1) 시험법 적용범위

수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 물과 아세토니트릴을 가하여 초음파로 추출하고 헥산으로 지방을 제거하여 MCX 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 물에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 0.1% 개미산으로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) MCX 카트리지(3cc, 60 mg) 또는 이와 동등한 것

바) 2% 개미산(Formic acid) : 100 mL 용량플라스크에 개미산 2 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 5% 수산화암모늄을 함유한 메탄올 : 100 mL 용량플라스크에 수산화암모늄 5 mL을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

아) 0.1% 개미산을 함유한 물 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

자) 기타시약 : 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취한다. 여기에 ⓐ(증류수 1 mL과 아세토니트릴 4 mL을 가하고 흔들어 섞은 후 10분간 초음파 추출한 뒤 9,000 G에서 10분간 원심분리하여 상층액을 취한다). 다시한번 ⓑ(잔류물에 증류수 1 mL과 아세토니트릴 4 mL을 가하고 흔들어 섞은 후 10분간 초음파 추출한 뒤 9,000 G에서 10분간 원심분리 한다). ⓐ와 ⓑ의 상층액을 합한 후 헥산 10 mL을 10분간 진탕 혼합 한다. 하층액을 40℃에서 농축한 후 0.1% 개미산을 함유한 물 2 mL로 재용해한 것을 추출액으로 한다. 미리 메탄올 2 mL과 증류수 1 mL로 활성화시킨 MCX 카트리지에 추출액을 흡착시키고 2% 개미산 2 mL과 메탄올 2 mL로 세척한 후, 5% 수산화암모늄을 함유한 메탄올 2 mL로 용출시킨다. 용출액은 40℃에서 질소농축한 후 0.1% 개미산을 함유한 물 2 mL에 녹인 후 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : C18(2.1 ｘ 150 mm, 3 µm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 :

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산을 함유한 물

(나) 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	100	0
7	85	15
15	80	20
20	100	0
25	100	0

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 35℃

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
세파드록실 (Cefadroxil)	9.21	363.39	364	114	22
				208	15

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 세파드록실(9.21분)표준품의 크로마토그램(1 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

세파드록실(Cefadroxil) : 0.005 mg/kg

5.3.121 수산화브롬글루타민 마그네슘염(L-Glutamic acid magnesium salt hydrobromide), 아미노메탄설폰산(Aminomethanesulfonic acid)

1) 시험법 적용범위

축‧수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 분석대상물질을 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)이 함유한 아세토니트릴로 추출하고 원심분리 하여 얻어진 상층액을 헥산으로 정제하여 농축한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 각 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 증류수에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 혼합표준용액 : 각 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 0.63 g의 개미산암모늄을 넣고 20 mL의 물로 잘 녹인 뒤 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 개미산(Formic acid)을 함유한 물 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

아) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 10 mM 개미산암모늄이 함유된 아세토니트릴 20 mL을 가하여 15분간 진탕 혼합한 후, 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심 분리한다. 상층액을 50 mL 원심분리관에 취하고 20 mL 헥산을 넣어 10분간 진탕한 후 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심분리한다. 상층액을 15 mL 원심분리관에 취하고 40℃에서 0.5 mL이 될 때까지 질소농축한다. 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴 1.5 mL을 가한 뒤 재분산하고 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심분리하여  상층액을 0.45 μm 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：Xbridge HILIC C18 (2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산을 함유한 물

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	35	65
10	35	65

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 30℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Negative)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
1	수산화브롬글루타민 마그네슘염 (L-Glutamic acid magnesium salt hydrobromide)	1.61	250.33	145.914	102.1	-16
					128.2	-16
					74.1	-24
2	아미노메탄설폰산 (Aminomethane- sulfonic acid)	1.64	111.12	109.843	81.0	-16
					80.0	-28
					64.0	-56

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

수산화브롬글루타민 마그네슘염

(L-Glutamic acid magnesium salt hydrobromide)

아미노메탄설폰산 (Aminomethanesulfonic acid)

그림 1. 수산화브롬글루타민 마그네슘염(1.61분), 아미노메탄설폰산(1.64분) 표준품의 크로마토그램(0.01 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

수산화브롬글루타민 마그네슘염(L-Glutamic acid magnesium salt hydrobromide) : 0.005 mg/kg

아미노메탄설폰산(Aminomethanesulfonic acid) : 0.002 mg/kg

5.3.122 염산메틸에페드린(DL-Methylephedrine HCl), 플루메타손(Flumethasone), 하이드록시디메틸피리미딘(2-Hydroxy-4,6-dimethylpyrimidine)

1) 시험법 적용범위

축‧수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 분석대상물질을 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 각 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 혼합표준용액 : 각 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 10 mM 개미산암모늄을 함유한 물 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 10 mM 개미산암모늄을 함유한 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 20 mL의 물과 0.63 g의 개미산암모늄을 넣고 잘 녹인 뒤 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 10 mM 개미산암모늄을 함유한 아세토니트릴 20 mL을 가하여 15분간 진탕 혼합한 후, 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심 분리한다. 상징액을 50 mL 원심분리관에 취하고 여기에 20 mL 헥산을 넣어 10분간 진탕 혼합한 후 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심분리한다. 상징액을 15 mL 원심분리관에 담아 40℃에서 0.5 mL이 될 때까지 질소농축한 후 아세토니트릴 1.5 mL을 가한 뒤 재분산하고 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심분리 하여 상징액을 0.45 μm 멤브레인 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：Xbridge HILIC(2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 10 mM 개미산암모늄을 함유한 물

(나) 이동상 B : 아세토니트릴(ACN)

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	25	75
10	25	75

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 30℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량	선구이온 (Precusor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy, eV)
1	염산메틸에페드린 (DL-Methylephedrine HCl)	1.98	215.72	179.881	162.1	15
					117.1	27
					91.1	43
2	플루메타손 (Flumethasone)	1.59	410.45	411.296	253.2	21
					121.2	37
					115.2	101
3	하이드록시 디메틸피리미딘 (2-Hydroxy-4,6-dimethylpyrimidine)	1.89	124.14	125.147	82.2	23
					42.2	43
					107.1	21

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 ± 20～30 % 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	± 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	± 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	± 30 %

나) 표준품 크로마토그램

염산메틸에페드린(DL-Methylephedrine HCl)

플루메타손(Flumethasone)

하이드록시디메틸피리미딘(2-Hydroxy-4,6-dimethylpyrimidine)

그림 1. 염산메틸에페드린(1.98분), 플루메타손(1.59분), 하이드록시디메틸피리미딘(1.89분) 표준품의 크로마토그램(0.01 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

염산메틸에페드린(DL-Methylephedrine HCl) : 0.005 mg/kg

플루메타손(Flumethasone) : 0.002 mg/kg

하이드록시디메틸피리미딘(2-Hydroxy-4,6-dimethylpyrimidine) : 0.002 mg/kg

제9. 8.2.2 1)의 나)를 다음과 같이 한다.

나) 후추, 육두구, 정향, 밤, 버섯(건조포함), 감자, 건조채소류(분말포함), 향신료조제품, 곡류(분말포함), 두류(분말포함), 어류분말, 패류분말, 갑각류분말, 된장분말, 고추장분말, 간장분말, 전분, 효모식품, 효소식품, 알로에분말, 인삼(홍삼 포함) 제품류, 복합조미식품, 클로렐라제품, 스피루리나제품, 조미건어포류, 특수의료용도등식품, 분말차, 침출차, 소스류,  2종 이상이 혼합된 식품과 광물질(silicate minerals)이 분리가 가능한 식품에 적용한다.

[별표 4], (2) 글루포시네이트[Glufosinate(ammonium)] 중 다음 항목을 각각 신설한다.

옥수수	0.05

마	0.05

양상추	0.05

생강	0.05

[별표 4], (9) 델타메트린(Deltamethrin) 중 잔류물의 정의를 다음과 같이 개정한다.

◎ 잔류물의 정의 : Deltamethrin(이성질체의 합)

[별표 4], (31) 마이클로뷰타닐(Myclobutanil) 중 “바나나 2.0”을 “바나나 4.0†”으로 한다.

[별표 4], (45) 메티다티온(Methidathion) 중 “가지 0.1”, “감자 0.02”, “기타감귤류 2.0”, “망고 0.05”, “면실 0.2”, “무(잎) 0.2”, “감귤 5.0”, “배 0.3”, “버섯류 0.2”, “복숭아 0.2”, “사과 0.3”, “살구 0.2”, “셀러리 0.2”, “수수 0.1”, “시금치 0.2”, “아몬드 0.05”, “아스파라거스 0.2”, “양배추 0.2”, “양상추 0.2”, “오이 0.05”, “옥수수 0.1”, “완두콩 0.1”, “자두 0.2”, “차 0.2”, “체리 0.2”, “토마토 0.1”, “포도 0.2”, “호박 0.2” 및 “호프 3.0”을 삭제하고, 다음 항목을 신설한다.

농산물	0.01

[별표 4], (111) 카바릴(Carbaryl) 중 “가지 0.5”, “고추 0.5”, “기타곡류 1.0”, “기타콩류 1.0”, “당근 0.5”, “딸기 0.5”, “밀 3.0”, “복숭아 1.0”, “쌀 1.0”, “살구 1.0”, “수수 1.0”, “아보카도 1.0”, “아스파라거스 1.0”, “자두 1.0”, “체리 1.0”, “토마토 0.5”, “파인애플 0.5”, “포도 0.5” 및 “피망 1.0”을 삭제하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

마늘	0.05

풋마늘	0.05

양파	0.05

[별표 4], (131) 클로르피리포스(Chlorpyrifos) 중 다음 항목을 신설한다.

커피	0.05†

[별표 4], (133) 테부코나졸(Tebuconazole) 중 다음 항목을 신설한다.

체리	2.0

[별표 4], (140) 트랄로메트린(Tralomethrin) 중 잔류물의 정의를 다음과 같이 개정한다.

◎ 잔류물의 정의 : Deltamethrin(이성질체의 합)

[별표 4], (162) 페니트로티온(Fenitrothion : MEP) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

무(뿌리)	0.05

무(잎)	0.05

[별표 4], (178) 폭심(Phoxim) 중 “배추 0.1”을 “배추 0.05”로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

무(잎)	0.05

무(뿌리)	0.05

엇갈이배추	0.05

[별표 4], (206) 클로르페나피르(Chlorfenapyr) 중 “엇갈이배추 0.5”를 “엇갈이배추 3.0”으로 한다.

[별표 4], (218) 디메토모르프(Dimethomorph) 중 다음 항목을 신설한다.

양배추	0.05

[별표 4], (228) 아족시스트로빈(Azoxystorobin) 중 다음 항목을 신설한다.

파슬리(향미나리)	20

[별표 4], (233) 펜사이큐론(Pencycuron) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

양파	0.05

파	0.05

[별표 4], (234) 펜피록시메이트(Fenpyroximate) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

포도	2.0

감	0.05

복숭아	0.3

[별표 4], (239) 플루아지남(Fluazinam) 중 “고추 1.0”을 “고추 3.0”으로 하고, “배 0.3”을 “배 1.0”으로 하며, “피망 0.3”를 “피망 3.0”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

양배추	0.05

[별표 4], (242) 루페뉴론(Lufenuron) 중 “엇갈이배추 0.2”를 “엇갈이배추 1.0”으로 한다.

[별표 4], (286) 에트리디아졸(Etridiazole) 중 다음 항목을 신설한다.

딸기	0.05

[별표 4], (309) 플루톨라닐(Flutolanil) 중 다음 항목을 신설한다.

오디	5.0

[별표 4], (353) 메트코나졸(Metconazole) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

옥수수	0.02†

면실	0.25†

블루베리	0.4†

감자	0.02†

[별표 4], (391) 만디프로파미드(Mandipropamid) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

딸기	0.1

상추	30

양상추	30

[별표 4], (399) 사이플루메토펜(Cyflumetofen) 중 다음 항목을 신설한다.

감	0.2

[별표 4], (408) 스피네토람(Spinetoram) 중 다음 항목을 신설한다.

생강	0.05

[별표 4], (422) 펜티오피라드(Penthiopyrad) 중 다음 항목을 신설한다.

오디	2.0

[별표 4], (423) 피콕시스트로빈(Picoxystrobin) 중 “고추 0.5”를 “고추 1.0”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

피망	1.0

[별표 4], (424) 피리플루퀴나존(Pyrifluquinazon) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

무(뿌리)	0.05

무(잎)	2.0

배추	0.3

엇갈이배추	1.0

상추	1.0

양상추	1.0

가지	0.1

[별표 4], (426) 아메톡트라딘(Ametoctradin) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

감귤	2.0

시금치	30

양배추	0.05

[별표 4], (435) 펜피라자민(Fenpyrazamine) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

부추	1.0

상추	15

양상추	15

파	5.0

[별표 4], (437) 플룩사피록사드(Fluxapyroxad) 중 “고추 0.3”을 “고추 1.0”으로 하고, “피망 0.3”을 “피망 1.0”으로 한다.

[별표 4], (439) 스피로테트라맷(Spirotetramat) 중 다음 항목을 신설한다.

딸기	3.0

[별표 4], (441) 피리벤카브(Pyribencarb) 중 다음 항목을 신설한다.

쌀	0.05

[별표 4], (442) 플루피라디퓨론(Flupyradifurone) 중 다음 항목을 신설한다.

배	0.3

[별표 4], (450) 옥사티아피프롤린(Oxathiapiprolin)을 다음과 같이 신설한다.

(450) 옥사티아피프롤린(Oxathiapiprolin)

◎ 잔류물의 정의 : Oxathiapiprolin

고추	0.7

피망	0.7

양파	0.05

오이	0.1

토마토	0.7

포도	1.0

[별표 4], (451) 인다지플람(Indaziflam)을 다음과 같이 신설한다.

(451) 인다지플람(Indaziflam)

◎ 잔류물의 정의 : Indaziflam

감귤	0.05

사과	0.05

[별표 4], (452) 아이속사플루톨(Isoxaflutole)을 다음과 같이 신설한다.

(452) 아이속사플루톨(Isoxaflutole)

◎ 잔류물의 정의 : Isoxaflutole과 isoxaflutole diketonitrile의 합을 isoxaflutole로 함

대두	0.02†

[별표 5], (80) 델타메트린(Deltamethrin)을 다음과 같이 신설한다.

(80) 델타메트린(Deltamethrin)

◎ 잔류물의 정의 : Deltamethrin(이성질체의 합)

수삼	0.05

건삼	0.05

[별표 5], (81) 펜피라자민(Fenpyrazamine)을 다음과 같이 신설한다.

(81) 펜피라자민(Fenpyrazamine)

◎ 잔류물의 정의 : Fenpyrazamine

수삼	0.5

건삼	1.0

[별표 7], (5) 다노플록사신(Danofloxacin) 식품명 중 “유(乳)”를 “유”로 한다.

[별표 7], (16) 벤질페니실린/프로케인벤질페니실린(Benzylpenicillin/Procaine benzylpenicillin)을 벤질페니실린(Benzylpenicillin, Penicillin G, Procaine benzilpenicillin)으로 한다.

[별표 7], (22) 아목시실린(Amoxicillin) 식품명 중 “유(乳)”를 “유”로 하고 “알(卵)”을 “알”로 한다.

[별표 7], (23) 알벤다졸(Albendazole) 잔류물의 정의를 다음과 같이 개정한다.

◎ 잔류물의 정의 : Albendazole, albendazole sulphoxide, albendazole sulfone, 2-amino albendazole sulphone의 합을 albendazole로 함

[별표 7], (25) 암피실린(Ampicillin) 식품명 중 “알(卵)”을 “알”로 한다.

[별표 7], (37) 티아벤다졸(Thiabendazole) 잔류물의 정의를 다음과 같이 개정한다.

◎ 잔류물의 정의 : Thiabendazole, 5-hydroxy thiabendazole의 합을 thiabendazole로 함

[별표 7], (41) 트리클라벤다졸(Triclabendazole) 잔류물의 정의를 다음과 같이 개정한다.

◎ 잔류물의 정의 : Triclabendazole, ketotriclabendazole의 합을 triclabedazole로 함

[별표 7], (44) 페반텔/펜벤다졸/옥스펜다졸(Febantel/Fenbendazole/Oxfendazole) 잔류물의 정의를 다음과 같이 개정한다.

◎ 잔류물의 정의 : Febantel, fenbendazole, oxfendazole, oxfendazole sulfone을 oxfendazole sulfone으로 환산한 값의 합

[별표 7], (45) 플루벤다졸(Flubendazole) 잔류물의 정의를 다음과 같이 개정한다.

◎ 잔류물의 정의 : Flubendazole, 2-aminoflubendazole 의 합을 flubendazole로 함

[별표 7], (80) 나프실린(Nafcillin), (82) 디클록사실린(Dicloxacillin),  (84) 마보플록사신(Marbofloxacin), (85) 세파세트릴(Cefacetrile), (86) 세파졸린(Cefazolin), (87) 세파피린(Cephapirin), (88) 세팔렉신(Cefalexin), (89) 세팔로니움(Cefalonium), (90) 세포페라존(Cefoperazone), (91) 세푸록심(Cefuroxime), (92) 세프퀴놈(Cefquinome), (93) 오비플록사신(Orbifloxacin) 식품명 중 “유(乳)”를 “유”로 한다.

[별표 7], (94) 옥시벤다졸(Oxibendazole), (96) 카나마이신(Kanamycin) 식품명 중 “유(乳)”를 “유”로 하고 “알(卵)”을 “알”로 한다.

[별표 7], (97) 클라불라닌산(Clavulanic acid) 및 (98) 클록사실린(Cloxacillin) 식품명 중 “유(乳)”를 “유”로 한다.

[별표 7], (99) 키타사마이신(Kitasamycin) 식품명 중 “알(卵)”을 “알”로 한다.

[별표 7], (114) 메벤다졸(Mebendazole) 잔류물의 정의를 다음과 같이 개정한다.

◎ 잔류물의 정의 : Mebendazole, mebendazole amine,  5-hydroxy mebendazole을 mebendazole로 환산한 값의 합을 mebendazole로 함

[별표 7], (120) 설피린/디피론/메타미졸(Sulpyrine/Dipyrone/Metamizole)을 설피린(Sulpyrine, Dipyrone, Metamizole)으로 한다.

[별표 7], (148) 알트레노제스트(Altrenogest)를 다음과 같이 신설한다.

(148) 알트레노제스트(Altrenogest) : 기타

◎ 잔류물의 정의 : Altrenogest

돼지근육	0.0005

돼지간	0.003

돼지지방	0.002

[별표 7], (149) 날록손(Naloxone)을 다음과 같이 신설한다.

(149) 날록손(Naloxone) : 기타

◎ 잔류물의 정의 : Naloxone

사슴근육	0.01

[별표 7], (150) 요힘빈(Yohimbine)을 다음과 같이 신설한다.

(150) 요힘빈(Yohimbine) : 기타

◎ 잔류물의 정의 : Yohimbine

사슴근육	0.01

[별표 7],   (151) 치오펜네이트(Thiophanate)를 다음과 같이 신설한다.

(151) 치오펜네이트(Thiophanate) : 구충제

◎ 잔류물의 정의 : Thiophanate

돼지근육	0.01

[별표 7], (152) 비치오놀(Bithionol)을 다음과 같이 신설한다.

(152) 비치오놀(Bithionol) : 구충제

◎ 잔류물의 정의 : Bithionol

소근육	0.01

말근육	0.01

양근육	0.01

염소근육	0.01

어류	0.01

[별표 7], (153) 폴리믹신 비(Polymyxin B)를 다음과 같이 신설한다.

(153) 폴리믹신 비(Polymyxin B) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Polymyxin B

소근육	0.01

돼지근육	0.01

말근육	0.01

[별표 7], (154) 페노뷰카브(Fenobucarb)를 다음과 같이 신설한다.

(154) 페노뷰카브(Fenobucarb) : 살충제

◎ 잔류물의 정의 : Fenobucarb

소근육	0.01

말근육	0.01

양근육	0.01

돼지근육	0.01

닭근육	0.01

유	0.01

알	0.01

어류	0.01

[별표 7], (155) 페노티아진(Phenothiazine)을 다음과 같이 신설한다.

(155) 페노티아진(Phenothiazine) : 진정제

◎ 잔류물의 정의 : Phenothiazine

소근육	0.01

말근육	0.01

양근육	0.01

돼지근육	0.01

[별표 7], (156) 푸마길린(Fumagillin)을 다음과 같이 신설한다.

(156) 푸마길린(Fumagillin) : 항원충제

◎ 잔류물의 정의 : Fumagillin

어류	0.01

[별표 7], (157) 미노싸이클린(Minocycline)을 다음과 같이 신설한다.

(157) 미노싸이클린(Minocycline) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Minocycline

소근육	0.01

돼지근육	0.01

[별표 7], (158) 파로모마이신(Paromomycin, Aminosidine, Monomycin)을 다음과 같이 신설한다.

(158) 파로모마이신(Paromomycin, Aminosidine, Monomycin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Paromomycin

소근육	0.01

말근육	0.01

양근육	0.01

돼지근육	0.01

닭근육	0.01

유	0.01

[별표 7], (159) 니스타틴(Nystatin)을 다음과 같이 신설한다.

(159) 니스타틴(Nystatin) : 항원충제

◎ 잔류물의 정의 : Nystatin

소근육	0.01

[별표 7], (160) 메토미데이트(Metomidate)를 다음과 같이 신설한다.

(160) 메토미데이트(Metomidate) : 진정제

◎ 잔류물의 정의 : Metomidate

돼지근육	0.01

[별표 7], (161) 부파바쿠온(Buparvaquone)을 다음과 같이 신설한다.

(161) 부파바쿠온(Buparvaquone) : 항원충제

◎ 잔류물의 정의 : Buparvaquone

소근육	0.01

[별표 7], (162) 아르사닐산(Arsanilic acid)을 다음과 같이 신설한다.

(162) 아르사닐산(Arsanilic acid) : 기타

◎ 잔류물의 정의 : Arsanilic acid

돼지근육	0.01

닭근육	0.01

오리근육	0.01

[별표 7], (163) 나이트록소린(Niroxoline)을 다음과 같이 신설한다.

(163) 나이트록소린(Niroxoline) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Niroxoline

소근육	0.01

돼지근육	0.01

닭근육	0.01

양근육	0.01

[별표 7], 데하이드로콜산(Dehydrocholic acid)을 다음과 같이 신설한다.

(164) 데하이드로콜산(Dehydrocholic acid) : 기타

◎ 잔류물의 정의 : Dehydrocholic acid

어류	0.01

[별표 7], (165) 안트라닐산(Anthranilic acid)을 다음과 같이 신설한다.

(165) 안트라닐산(Anthranilic acid) : 항염증제

◎ 잔류물의 정의 : Anthranilic acid

돼지근육	0.01

[별표 7],  (166) 메텐아민(Methenamine)을 다음과 같이 신설한다.

(166) 메텐아민(Methenamine) : 기타

◎ 잔류물의 정의 : Methenamine

소근육	0.01

돼지근육	0.01

닭근육	0.01

[별표 7], (167) 토노포스판(Tonophosphan)을 다음과 같이 신설한다.

(167) 토노포스판(Tonophosphan) : 기타

◎ 잔류물의 정의 : Tonophosphan

소근육	0.01

돼지근육	0.01

말근육	0.01

[별표 7], (168) 세파드록실(Cefadroxil)을 다음과 같이 신설한다.

(168) 세파드록실(Cefadroxil) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Cefadroxil

어류	0.01

[별표 7], (169) 수산화브롬글루타민 마그네슘염(L-Glutamic acid magnesium salt hydrobromide)을 다음과 같이 신설한다.

(169) 수산화브롬글루타민 마그네슘염(L-Glutamic acid magnesium salt hydrobromide) : 진정제

◎ 잔류물의 정의 : L-Glutamic acid magnesium salt hydrobromide

닭근육	0.01

[별표 7], (170) 아미노메탄설폰산(Amino methane sulphonic acid)을 다음과 같이 신설한다.

(170) 아미노메탄설폰산(Amino methane sulphonic acid) : 기타

◎ 잔류물의 정의 : Amino methae sulphonic acid

소근육	0.01

말근육	0.01

돼지근육	0.01

[별표 7], (171) 염산메틸에페드린(DL-Methylephedrine HCl)을 다음과 같이 신설한다.

(171) 염산메틸에페드린(DL-Methylephedrine HCl) : 기타

◎ 잔류물의 정의 : DL-Methylephedrine HCl

소근육	0.01

돼지근육	0.01

[별표 7], (172) 플루메타손(Flumethasone)을 다음과 같이 신설한다.

(172) 플루메타손(Flumethasone) : 항염증제

◎ 잔류물의 정의 : Flumethasone

소근육	0.01

돼지근육	0.01

말근육	0.01

[별표 7], (173) 하이드록시디메틸피리미딘(2-Hydroxy-4,6-dimethylpyrimidine)을 다음과 같이 신설한다.

(173) 하이드록시디메틸피리미딘(2-Hydroxy-4,6-dimethylpyrimidine) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : 2-Hydroxy-4,6-dimethylpyrimidine

닭근육	0.01

부칙

제1조(시행일) 이 고시는 고시한 날부터 시행한다. 다만, [별표 4], [별표 5] 및 제9. 4.1.4.181〜183의 개정 규정은 고시 후 60일이 경과한 날부터 시행하고, 제5. 15. 5) (3) 및 (4), 제5. 20. 5). (3), 제5. 21-2. 5) (1) 및 (2), 제5. 21-3. 5) (2) 및 6) (2), 제5. 21-4. 5) (2), (3) 및 (4), 6) (2), (3) 및 (4), 제5. 21-7. 5) (3), 제5. 22. 5) (2), 제5. 24. 5) (2) 및 (5), 제5. 27-1. 5) (4), (5) 및 (6), 6) (4), (5) 및 (6), 제5. 27-2. 5) (4), (5) 및 (6), 6) (4), (5) 및 (6), [별표 7]의 (148)〜(173) 및 제9. 5.3.109〜122의 개정 규정은 고시 후 1년이 경과한 날부터 시행한다.

제2조(적용례) 이 고시는 이 고시 시행 이후 최초로 제조·가공 또는 수입한 식품(수입하기 위해 선적한 식품을 포함한다)부터 적용한다.

제3조(경과조치) 이 고시는 이 고시 시행 당시 제조․가공․판매 또는 수입되어 검사가 진행 중인 사항에 대하여는 종전의 규정에 따른다.

현  행

개  정(안)

제1. 총칙 (생   략)

제2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1. ∼ 4. (생   략)

5. 식품일반의 기준 및 규격

1) ∼ 5) (생   략)

6) 식품조사처리 기준

(1) 〜 (5) (생   략)

(6) 식품별 조사처리기준은 다음과 같다.

① 허용대상 식품별 흡수선량

품 목	조사목적	선량(kGy)
감자,양파,마늘	(생 략)	(생 략)
(현행과 같음)	(생 략)	(생 략)
생버섯 및 건조버섯	(생 략)	(생 략)
(생 략) 곡류, 두류 및 그 분말 (생 략)	(생 략) (생 략) (생 략)	(생 략) (생 략) (생 략)
(생 략) 어류, 패류, 갑각류 분말 된장, 고추장, 간장분말 건조채소류 효모·효소식품 조류식품 (생 략) (생 략) <신 설>	(생 략) (생 략) (생 략) (생 략) (생 략) (생 략) (생 략) (생 략) <신 설>	(생 략) (생 략) (생 략) (생 략) (생 략) (생 략) (생 략) (생 략) <신 설>
(생 략) (생 략) (생 략) (생 략) (생 략) 환자식	(생 략) (생 략) (생 략) (생 략) (생 략) (생 략)	(생 략) (생 략) (생 략) (생 략) (생 략) (생 략)

7) ∼ 23) (생   략)

6. (생   략)

제3. ∼ 제4. (생   략)

제5. 식품별 기준 및 규격

1. ∼ 14. (생   략)

15. 면류

1) ∼ 4) (생   략)

5) 규격

(1) ∼ (2) (생   략)

(3) 세균수 : 1 g당 1,000,000 이하(주정처리제품에 한한다)

1 g당 100,000 이하(살균제품에 한한다)

(4) 대장균 : 음성(주정처리제품에 한한다)

(5) 대장균군 : 음성(살균제품에 한한다)

16. ∼ 19. (생   략)

20. 장류

1) ∼ 4) (생   략)

5) 규격

(1) ∼ (2) (생   략)

(3) 대장균군 : 음성[혼합장(살균제품)에 한한다.]

(4) (생   략)

6) (생   략)

21. 조미식품

21-1 (생   략)

21-2 소스류

1) ∼ 4) (생   략)

5) 규격

(1) 대장균군 : 음성이어야 한다.

(2) 세균수 : 음성이어야 한다(다만, 멸균제품에 한한다).

(3) ∼ (4) (생   략)

6) (생   략)

21-3 토마토케첩

1) ∼ 4) (생   략)

5) 규격

(1) (생   략)

(2) 대장균군 : 음성이어야 한다.

(3) (생   략)

6) 시험방법

(1) (생   략)

(2) 대장균군

검체 50 g을 멸균희석액에 넣고 멸균인산완충희석액 또는 멸균생리식염수를 가하여 500 mL로 하여 믹서에 넣어 15분간 균질화시킨 것을 검액으로 한다. 검액 10 mL, 1 mL 및 10배 희석액 1 mL를 취하여 제9. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.7 대장균군에 따라 시험한다.

(3) (생   략)

21-4 카레

1) ∼ 4) (생   략)

5) 규격

(1) (생   략)

(2) 세균수 : 음성이어야 한다.(액상제품에 한한다).

(3) 대장균군 : 음성이어야 한다.(액상제품에 한한다).

<신    설>

6) 시험방법

(1) (생   략)

(2) 세균수

용기․포장의 표면을 70% 알코올 탈지면으로 닦고 멸균한 기구를 써서 개봉하여 그 내용 중 10 g을 무균적으로 멸균병에 취하고 멸균인산완충희석액 또는 멸균생리식염수를 가하여 100 mL로 하고 마개를 꼭막아 잘 흔들어 섞어 이를 검액으로 하여 제9. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.5.1 일반세균수에 따라 시험한다.

(3) 대장균군

위의 (2) 세균수에서 만든 검액을 취하여 제9. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.7 대장균군에 따라 시험한다.

<신    설>

21-5 ∼ 21-6 (생   략)

21-7 복합조미식품

1) ∼ 4) (생   략)

5) 규격

(1) ∼ (2) (생   략)

(3) 대장균 : 음성이어야 한다.

6) (생   략)

22. 드레싱류

1) ∼ 4) (생   략)

5) 규격

유 형 규 격	드레싱	마요네즈
(1) 조지방(%)	(생 략)	(생 략)
(2) 대장균군	음성이어야 한다.

6) (생   략)

23. (생   략)

24. 젓갈류

1) ∼ 4) (생   략)

5) 규격

(1) (생   략)

(2) 대장균군 : 음성이어야 한다(다만, 액젓, 조미액젓에 한한다.)

(3) ∼ (4) (생   략)

(5) 대장균 : 음성이어야 한다(다만, 액젓, 조미액젓은 제외한다.)

(6) (생   략)

27. 주류

27-1 탁주

1) ∼ 4) (생   략)

5) 규격

(1) ∼ (3) (생   략)

(4) 진균수 : 음성이어야 한다.(다만, 살균제품에 한한다.)

(5) 보존료 : 검출되어서는 아니된다.

<신    설>

<신    설>

6) 시험방법

(1) ∼ (3) (생   략)

(4) 진균수

제9. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.10 진균수(효모 및 사상균수)에 따라 시험한다.

(5) 보존료

제9. 일반시험법 2.1 보존료에 따라 시험한다.

<신    설>

<신    설>

27-2 약주

1) ∼ 4) (생   략)

5) 규격

(1) ∼ (3) (생   략)

(4) 진균수 : 음성이어야 한다.(다만, 살균제품에 한한다.)

(5) 보존료 : 검출되어서는 아니된다.

<신    설>

<신    설>

6) 시험방법

(1) ∼ (3) (생   략)

(4) 진균수

제9. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.10 진균수(효모 및 사상균수)에 따라 시험한다.

(5) 보존료

제9. 일반시험법 2.1 보존료에 따라 시험한다.

<신    설>

<신    설>

27-3 ∼ 27-11 (생   략)

28. ∼ 29. (생   략)

제7. ∼ 제8. (생   략)

제9. 일반시험법

1. ∼ 3. (생   략)

4. 식품 중 잔류농약 분석법

4.1 ∼ 4.1.2.1 (생   략)

4.1.2.2 다종농약다성분 분석법(Multi class pesticide multiresidue methods)-제2법

1) (생   략)

2) 분석원리

검체를 아세토니트릴 또는 아세톤으로 추출한 다음, 기체크로마토그래프 측정농약은 플로리실 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 측정하고 액체크로마토그래프 측정농약은 아미노-프로필 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 측정한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프：전자포획검출기(ECD), 질소·인 검출기(NPD) 또는 불꽃광도검출기(FPD), 질량분석기(MS)

나) 액체크로마토그래프：Post-column derivatization system, 형광검출기(FLD), 자외부흡광검출기(UVD), 질량분석기(MS)

4) 시약

가) (생   략)

나) 일회용 카트리지：플로리실(500 mg) 및 아미노-프로필(1 g) 등의 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지

다) ∼ 마) (생   략)

5) 시험용액의 조제

가) 추출

(1) ∼(2) (생   략)

주1) 당근과 같이 크고 단단한 것들은 먼저 칼로 대강 썬 후 분쇄함

주2) (생   략)

주3) (생   략)

나) 정제

(1) 기체크로마토그래프 측정 농약

미리 플로리실 카트리지에 헥산 5 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이 카트리지에 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 위와 같은 방법으로 유출하여 버린다. 이어서 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 초당 1～2방울 정도의 속도로 용출시켜 시험관에 받는다. 다시 카트리지가 용매에 젖어 있는 상태에서 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 용출하여 동일 시험관에 모은다. 용출액은 40℃ 이하 수욕상에서 질소 또는 공기를 낮은 유속으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 20% 아세톤 함유 헥산에 녹여서 일정량으로 한 후 맴브레인 필터(PTFE 0.45 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

주4) (생   략)

주5) (생   략)

(2) 액체크로마토그래프 측정 농약

미리 아미노-프로필 카트리지에 디클로로메탄 5 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출시켜 시험관에 받는다. 다시 카트리지가 용매에 젖어 있는 상태에서 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 7 mL를 유출하여 동일 시험관에 합친다. 유출액은 40℃ 이하 수욕상에서 질소 또는 공기를 낮은 유속으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 아세토니트릴에 녹여 일정량으로 한 후 맴브레인 필터(PTFE 0.45 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) GC-ECD

(가) (생   략)

(나) 캐리어가스 및 유량：N2, 1.0 mL/min

(다) ∼ (마) (생   략)

(2) GC-NPD

(가) 칼럼：DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 및 DB-17(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 이동상가스 및 유량：N2, 1.0 mL/min

(다) 오븐 온도：80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 7℃/min의 비율로 250℃까지 온도를 상승시키고 5℃/min의 비율로 280℃까지 상승시켜 20분 이상 유지한다.

(라) 주입부：splitless mode

(마) 검출기온도：280℃

(3) GC-FPD

(가) (생   략)

(나) 이동상가스 및 유량：N2, 1.0 mL/min

(다) ∼ (라) (생   략)

(마) 검출기온도：230℃

(4) GC-MS

(가) (생   략)

(나) 이동상가스 및 유량：He, 0.8 mL/min

(다) ∼ (라) (생   략)

(마) 인터페이스 온도：280℃

(바) (생   략)

<신    설>

나) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) (생   략)

(2) HPLC-UVD

(가) (생   략)

(나) 검출기：자외부흡광검출기 (254 nm)

(다) ∼ (라) (생   략)

(3) LC-MS

(가) (생   략)

(나) 이동상：A(물 + 0.1% 포름산, 2 mM 아세트산암모늄), B(99% 아세토니트릴 +  0.1% 포름산, 2 mM 아세트산암모늄)

- A/B(90/10, v/v)에서 (10/90, v/v)의 혼합액으로 20분간 농도균배한 후 10분 이상 흘려보낸다.

(다) ∼ (바) (생   략)

7) (생   략)

주6) GC-MS 및 LC-MS 상의 머무름시간 및 질량분석 스펙트럼으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.

8) (생   략)

주7) 정량시험은 단일 표준품으로 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

9) 이 시험법의 분석 대상농약 및 검출기

가) 기체크로마토그래프 분석 대상(201종)

1	Acrinathrin(ECD)	2	Aldrin(ECD)	3	Allidochlor(MS)
4	Ametryn(NPD)	5	Anilofos(NPD)	6	Asulam(ECD)
7	Atrazine(NPD)	8	Azaconazole(NPD)	9	Azinphos-ethyl(FPD)
10	Azinphos-methyl(ECD, NPD)*	11	BHC(ECD)	12	Bifenthrin(ECD)
13	Binapacryl(ECD)	14	Bromacil(ECD)	15	Bromobutide(NPD)
16	Bromophos-methyl(FPD)	17	Bromopropylate(ECD)	18	Bromoxynil(ECD)
19	Bupirimate(NPD)	20	Butafenacil(ECD)	21	Cadusafos(NPD, FPD)
22	Captafol(ECD)	23	Captan(ECD)	24	Carbophenothion(ECD, NPD)
25	Chinomethionat(ECD)	26	Chlordane(ECD)	27	Chlorfenapyr(NPD, FPD)
28	Chloridazon(ECD)	29	Chlorobenzilate(ECD)	30	Chlorothalonil(ECD)
31	Chlorpyrifos(ECD, NPD)	32	Chlorpyrifos-methyl(ECD, NPD)	33	Chlorthal-dimethyl(ECD)
34	Cinmethylin(MS)	35	Clomeprop(ECD)	36	Cyanazine(ECD)
37	Cyanophos(NPD)	38	Cycloate(MS)	39	Cycloprothrin(ECD, NPD)
40	Cyflufenamid(ECD)	41	Cyfluthrin(ECD)*	42	Cyhalothrin(ECD)*
43	Cypermethrin(ECD)*	44	Cyproconazole(NPD)	45	Cyprodinil(NPD)
46	DDT(ECD)	47	Deltamethrin(ECD)*	48	Diallate(MS)
49	Diazinon(ECD, NPD)	50	Dichlofluanid(ECD, NPD)	51	Dichlorvos(DDVP)(NPD, FPD)
52	Dicloran(ECD)	53	Dicofol(ECD)	54	Dicrotophos(FPD)
55	Dieldrin(ECD)	56	Diethofencarb(NPD)	57	Diflufenican(ECD)
58	Dimepiperate(ECD, NPD, FPD)	59	Dimethachlor(ECD)	60	Dimethenamid(NPD)
61	Dimethoate(ECD, NPD)	62	Dimethylvinphos(NPD, FPD)	63	Diniconazole(ECD)
64	Diphenamid(NPD)	65	Diphenylamine(NPD)	66	Dithiopyr(ECD)
67	Edifenphos(ECD, NPD)	68	Endosulfan(ECD)	69	Endrin(ECD)
70	EPN(ECD, NPD)	71	Esprocarb(ECD, NPD)	72	Ethion(ECD, NPD)
73	Ethoprophos(ECD, NPD)	74	Etoxazole(NPD)	75	Etrimfos(ECD, NPD)
76	Fenamidone(ECD, NPD)	77	Fenarimol(ECD, NPD)*	78	Fenazaquin(NPD, FPD)*
79	Fenbuconazole(ECD)*	80	Fenitrothion(ECD, NPD)	81	Fenobucarb(NPD)
82	Fenothiocarb(NPD)*	83	Fenoxanil(ECD, NPD)	84	Fenoxycarb(NPD, UVD)
85	Fenpropathrin(ECD, NPD)*	86	Fenthion(ECD, NPD)*	87	Fenvalerate(ECD)*
88	Fipronil(NPD, FPD)	89	Flonicamid(ECD)	90	Fluazinam(ECD)
91	Fludioxonil(NPD)	92	Flumiclorac-pentyl(ECD)	93	Flupyrazofos(NPD, FPD)
94	Flusilazole(NPD)	95	Flusulfamide(ECD)	96	Fluthiacet-methyl(ECD)
97	Flutolanil(ECD)	98	Fluvalinate(ECD)*	99	Folpet(ECD)
100	Fonofos(NPD)	101	Fosthiazate(NPD, FPD)	102	Fthalide(ECD)
103	Furathiocarb(NPD)	104	Heptachlor epoxide(ECD)	105	Heptachlor(ECD)
106	Hexachlorobenzene(ECD)	107	Imazalil(ECD)	108	Indanofan(ECD)
109	Indoxacarb(ECD)	110	Iprobenfos(NPD, FPD)	111	Iprodione(ECD)
112	Iprovalicarb(ECD)	113	Isazofos(NPD)	114	Isazophos(FPD)
115	Isofenphos(NPD)	116	Isofenphos-methyl(NPD)	117	Isoprothiolane(NPD, FPD)
118	Isoxathion(NPD)	119	Kresoxim-methyl(NPD)	120	Lactofen(ECD)
121	Malathion(ECD, NPD)	122	Mecarbam(ECD, NPD)	123	Mefenacet(ECD)
124	Mefenpyr-diethyl(ECD)	125	Mepronil(NPD)	126	Metconazole(NPD)
127	Methidathion(ECD)	128	Methoxychlor(ECD)	129	Metrafenone(ECD)
130	Molinate(NPD)	131	Myclobutanil(ECD, NPD)*	132	Nitrapyrin(ECD)
133	Nitrothal-isopropyl(ECD)	134	Nonachlor(ECD)	135	Nuarimol(ECD)*
136	Ofurace(ECD)	137	Oxadixyl(ECD)	138	Oxydemeton-methyl (FPD)
139	Paclobutrazol(ECD, NPD)*	140	Parathion(ECD, NPD)	141	Parathion-methyl(ECD, NPD)
142	Pebulate(MS)	143	Penconazole(ECD, NPD)	144	Pendimethalin(ECD, NPD)
145	Permethrin(ECD)*	146	Phenthoate(ECD)	147	Phosalone(ECD, NPD)
148	Phosmet(ECD)	149	Phosphamidon(ECD, NPD)	150	Picolinafen(ECD)
151	Picoxystrobin(ECD)	152	Piperophos(NPD, FPD)	153	Pirimicarb(NPD)
154	Pirimiphos-ethyl(NPD)	155	Pirimiphos-methyl(NPD)	156	Probenazole(ECD)
157	Prochloraz(ECD)	158	Procymidone(ECD, NPD)	159	Profenofos(ECD, NPD)
160	Propachlor(MS)	161	Propazine(NPD)	162	Propham(MS)
163	Propisochlor(ECD, NPD)	164	Propyzamide(ECD)	165	Prothiofos(NPD)
166	Pyraclofos(NPD)	167	Pyrazophos(ECD, NPD)	168	Pyridaben(NPD)*
169	Pyridalyl(ECD, NPD, FPD)	170	Pyrifenox(MS)	171	Pyrimidifen(ECD)
172	Pyriminobac-methyl(NPD)	173	Quinalphos(NPD)	174	Quintozene(ECD)
175	Simeconazole(NPD)	176	Sulprofos(FPD)	177	TCMTB(ECD)
178	Tebufenpyrad(NPD)*	179	Tebupirimfos(ECD, NPD, FPD)	180	Tefluthrin(ECD)
181	Terbufos(NPD)*	182	Terbutylazine(ECD, NPD)	183	Tetrachlorvinphos(FPD)
184	Tetradifon(ECD)	185	Thiazopyr(ECD, NPD)	186	Thifluzamide(ECD, NPD)
187	Thiometon(ECD, NPD)	188	Tolclofos-methyl(ECD, NPD)	189	Tolfenpyrad(NPD)
190	Tolylfluanid(ECD, NPD)	191	Tralomethrin(ECD)	192	Triadimefon(ECD, NPD)
193	Triazophos(NPD)	194	Tribuphos(FPD)	195	Triflumizole(ECD, NPD)
196	Triflumuron(ECD)	197	Triticonazole(NPD)	198	Uniconazole(ECD)
199	Vernolate(ECD)	200	Vinclozolin(ECD, NPD)	201	Zoxamide(ECD, NPD)

<신    설>

나) 액체크로마토그래프 분석 대상(85종)

1	Acetamiprid(UVD)*	2	Aldicarb(FLD)	3	Amisulbrom(UVD)
4	Azafenidin(UVD)	5	Azamethiphos(MS)	6	Azoxystrobin(UVD)
7	Bendiocarb(FLD)	8	Bensulide(MS)	9	Benzoximate(UVD)*
10	Boscalid(UVD)	11	Butocarboxim(FLD)	12	Carbaryl(FLD)
13	Carbofuran(FLD)	14	Chlorantraniliprole(UVD)	15	Chlorimuron-ethyl(UVD)
16	Chlorobenzuron (UVD)	17	Chlorotoluron(UVD)	18	Chromafenozide(UVD)
19	Cinosulfuron(UVD)	20	Clothianidin(UVD)*	21	Cyazofamid(UVD)
22	Cyhalofop-butyl (UVD)	23	Cymoxanil(UVD)	24	Dimethomorph(UVD)
25	Ethaboxam (UVD)	26	Ethametsulfuron-methyl (UVD)	27	Ethiofencarb(FLD)
28	Fenhexamid(UVD)	29	Fenpyroximate(UVD)*	30	Ferimzone(UVD)
31	Fluacrypyrim(UVD)	32	Flubendiamide(UVD)	33	Flufenacet(UVD)
34	Flufenoxuron(UVD)	35	Flumioxazine(UVD)	36	Fluquinconazole(UVD)
37	Fluridone(MS)	38	Forchlorfenuron(UVD)	39	Hexaflumuron(UVD)
40	Imazamox(UVD)	41	Imazapic(UVD)	42	Imazaquin(UVD)
43	Imazethapyr(UVD)	44	Imibenconazole(UVD)	45	Isoprocarb(FLD)
46	Isoproturon(UVD)	47	Lufenuron(UVD)	48	Mepanipyrim(NPD, UVD)
49	Metamifop(UVD)	50	Methabenzthiazuron(UVD)	51	Methiocarb(FLD)
52	Methomyl(FLD)*	53	Methoxyfenozide(UVD)	54	Metolcarb(FLD)
55	Nitenpyram(UVD)	56	Novaluron(UVD)	57	Oxamyl(FLD)*
58	Oxaziclomefon(UVD)	59	Pentoxazone(UVD)	60	Phenmedipham(UVD)
61	Promecarb(FLD)	62	Propoxur(FLD)	63	Pyraclostrobin(UVD)
64	Pyrazolate(UVD)	65	Pyribenzoxim(UVD)	66	Pyributicarb(UVD)
67	Pyridate(UVD)	68	Pyrimethanil(UVD)	69	Pyriproxyfen(UVD)
70	Pyroquilon(UVD)	71	Quinoclamine(UVD)	72	Rimsulfuron(UVD)
73	Spirodiclofen(UVD)	74	Tebufenozide(UVD)	75	Teflubenzuron(UVD)
76	Thenychlor(UVD)	77	Thiacloprid(UVD)*	78	Thiamethoxam(UVD)*
79	Thiodicarb(FLD)	80	Tiadinil(UVD)	81	Tribenuron-methyl(UVD)
82	Tricyclazole(NPD, UVD)	83	Trifloxystrobin(ECD, UVD)	84	Trimethacarb(FLD)
85	XMC(MS)

주8) 이 시험법을 이용하여 위의 분석대상 성분중 * 표시된 농약이 식품에서 검출될 경우 정량분석은 아래의 분석법에 따른다.

<신    설>

4.1.3 ∼ 4.1.4.45 (생   략)

4.1.4.46 에세폰(Ethephon)

1) 시험법 적용범위

레몬, 면실, 밀, 밀감, 배, 보리, 사과, 오이, 커피원두, 토마토, 파인애플, 포도, 피칸, 호도, 호박 등 식품에 적용한다.

2) (생   략)

3) (생   략)

가) 기체크로마토그래프∶질소․인 검출기(Nitrogen phosphorus detector) 또는 불꽃광도검출기(Flame photometric detector)

<신    설>

4) (생   략)

가) 용매∶잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

나) 물∶증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액∶에세폰을 아세톤에 녹여 100 mg/kg이 되게 한다.

라) (생   략)

마) 기타 시약∶잔류농약 시험용 또는 특급

5) (생   략)

가) 추출

검체를 잘게 썰거나 갈은 후 20 g 달아 용기에 넣고 이에 1M 구연산 1 mL를 넣어 잘 혼합하고 염산 0.5 mL, 무수황산나트륨 50 g 및 에틸아세테이트 200 mL를 넣고 5분간 고속으로 균질화한 후 이를 부흐너깔때기로 감압여과한 후 그 잔사를 에틸아세테이트 200 mL로 씻어 여액에 합하여 40℃이하의 수욕중에서 대부분의 용매를 날려 버리고 잔류물을 헥산 30 mL에 녹여 분액깔때기에 옮긴다. 이에 아세토니트릴 30 mL를 넣고 3분간 심하게 흔들어 섞은 후 아세토니트릴층을 다른 분액깔때기에 옮긴다. 헥산층에 다시 아세토니트릴 30 mL를 넣어 위와 같이 되풀이한 후 아세토니트릴층을 위의 분액깔때기에 합하여 헥산 50 mL로 세척한 후 아세토니트릴층을 40℃이하의 수욕중에서 완전히 농축하고 잔류물을 아세톤 2 mL에 녹인다.

나) 메틸화

위의 아세톤에 trimethylsilyl- diazomethane 1 mL를 넣고 실온에서 30분간 방치한 후 질소가스 또는 공기를 통과시켜 용매를 완전히 날려 버리고 잔류물을 아세톤 일정량에 녹여 시험용액으로 한다.

6) (생   략)

가) (생   략)

(1) 칼럼∶안지름 0.53 mm, 길이 15 m의 모세관 유리 칼럼에 기체크로마토그래프용 메틸실리콘을 1.0 μm의 두께로 코팅한 것 또는 이와 동등한 것

(2) 시험용액 주입구 및 검출기의 온도∶각각 250℃, 280℃

(3) 칼럼온도∶150℃ 항온(필요에 따라 적절히 조절한다)

(4) 캐리어가스 및 유량∶질소를 적절히 조절한다.

<신    설>

<신    설>

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계

0.05 mg/kg

<신    설>

7) 정성시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램 상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액피이크의 머무름시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

<신    설>

4.1.4.47 ∼ 4.1.4.75 (생   략)

4.1.4.76 이나벤화이드(Inabenfide)

1) 시험법 적용범위

쌀 등 식품에 적용한다.

2) (생   략)

검체를 아세톤으로 추출한 후 액액분배하고 후로리실 카트리지로 1차 정제한다. 유도체화 과정을 거쳐 실리카 카트리지로 2차 정제하여 기체크로마토그래프로 측정한다.

3) (생   략)

가) 기체크로마토그래프：전자포획검출기(ECD)를 사용한다.

4) (생   략)

가) 용매∶잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

나) 물∶증류수 또는 이와 동등한 것

다) 후로리실 및 실리카 카트리지：SPE용 또는 이와 동등한 것

라) 표준원액∶이나벤화이드 표준품을 벤젠에 녹여 100 mg/kg으로 조제하여 표준원액으로 한다.

마) 표준용액：표준원액을 일정량 취하여 플라스크에 넣고 실온에서 질소가스로 용매를 완전히 날려버린 후 5) 시험용액의 조제 다) 유도체화에 따라 실험하고 아세톤으로 적절한 농도로 희석하여 사용한다.

바) 유도체시약：무수 모노클로로초산(Monochloroacetic acid anhydride)은 특급 또는 이와 동등한 것

사) (생   략)

5) (생   략)

가) (생   략)

검체(곡류는 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 그 20 g) 20 g을 정밀히 달아 용기에 넣고 물 40 mL를 첨가하여 2시간 방치한 후 아세톤 100 mL를 가하여 5분간 고속으로 균질화한 다음 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압 여과한다. 잔류물은 아세톤 50 mL로 씻고 씻은 액은 위의 여액에 합한 후 40℃이하의 수욕중에서 감압하여 약 70 mL가 남을 때까지 날려버린다. 잔류물을 분액깔때기로 옮기고 2M 염산 150 mL와 헥산 100 mL를 첨가하여 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 헥산층을 버린 다음 물 층에 다시 헥산 100 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 위의 헥산층을 버린다. 물층에 10 m 수산화나트륨용액을 첨가하여 중화시킨 후 디클로로메탄 100 mL를 넣고 심하게 흔들어 섞은 다음 정치하여 디클로로메탄층을 취하고, 물층에 다시 디클로로메탄 100 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 위의 디클로로메탄층에 합한다. 디클로로메탄층은 무수황산나트륨으로 탈수, 여과한 후 40℃이하의 수욕중에서 감압하여 용매를 모두 날려버린 다음 클로로포름 5 mL에 녹인다.

나) 제 1차 정제

미리 클로로포름 10 mL로 활성화한 후로리실 카트리지에 위의 녹인 액을 넣고 클로로포름 10 mL로 유출시켜 버린 후 아세토니트릴：클로로포름(5：95) 혼합액 20 mL로 용출하고 용출액을 40℃이하의 수욕중에서 감압하여 용매를 모두 날려버린다.

다) 유도체화

잔류물을 5% 무수 모노클로로초산 함유 벤젠용액 10 mL로 녹여 분액깔때기에 옮기고 피리딘 0.1 mL를 첨가하여 30분간 흔들어 섞는다. 여기에 다시 벤젠 30 mL, 물 50 mL를 넣고 1분간 심하게 흔들어 섞은 후 벤젠층을 포화탄산수소나트륨 용액 50 mL가 들어 있는 분액깔때기로 옮겨 다시 심하게 흔들어 섞는다. 포화탄산수소나트륨 용액층은 버리고 다시 벤젠층에 물 50 mL를 넣고 위와 같이 되풀이한 후 벤젠층을 취하여 무수황산나트륨으로 탈수한 다음 40℃이하의 수욕중에서 감압하여 용매를 모두 날려버린다. 잔류물은 아세톤：헥산(3：7) 혼합액 5 mL에 녹인다.

라) 제 2차 정제

미리 아세톤：헥산(3：7) 혼합액 10 mL로 활성화한 실리카 카트리지에 위의 녹인 액을 넣고 아세톤：헥산(3：7) 혼합액 10 mL를 유출시켜 버린다. 카트리지에 아세톤：헥산(4：6) 혼합액 20 mL를 넣어 용출시키고 용출액은 40℃이하의 수욕중에서 감압하여 용매를 모두 날려버린다. 잔류물은 아세톤에 녹여서 일정량으로 한 후 시험용액으로 한다.

6) (생   략)

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼∶DB-5 캐필러리 칼럼(30 m×0.25 mm ID) 또는 이와 동등한 것

(2) 캐리어가스 및 유량：질소, 1.0 mL/분

(3) 칼럼오븐온도：220℃

(4) 주입부：280℃

(5) 검출기온도：280℃

<신    설>

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정성시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

<신    설>

4.1.4.77 ∼ 4.1.4.131 (생   략)

4.1.4.132 퀸메락(Quinmerac)

1) 시험법 적용범위

과실류

2) (생   략)

시료에 수산화나트륨 용액을 첨가한 후 아세톤으로 추출하고 흡인여과, 감압농축한다. 농축액을 분액깔때기에 옮겨 디클로로메탄으로 세정한 후 염산으로 pH를 조절하고 디클로로메탄으로 분배한다. 유기용매층을 탈수, 감압농축하고 유도체시약(요오드화메틸)을 이용하여 유도체화 반응(에스터화 반응)한 후 기체크로마토그래프로 측정한다.

3) (생   략)

가) 기체크로마토그래프/질소․인 검출기(NPD)

<신    설>

4) (생   략)

가) 용매∶잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

나) 물∶증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액∶퀸머락을 아세톤에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세톤에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석하고 요오드화메틸을 이용하여 에스터화 반응을 시킨 후 아세톤으로 추출하여 사용한다.

마) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

<신    설>

5) (생   략)

가) (생   략)

검체(과실류 약 1 kg을 잘 썰거나 갈은 후 그 50 g을 단다)를 균질기 용기에 달아 0.1 N 수산화나트륨 용액 50 mL를 넣고 10 분 동안 정치시킨다. 아세톤 100 mL를 첨가하고 5 분간 균질화한 다음 Celite 545가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고 잔류물은 아세톤 50 mL로 씻어 위의 여액과 합한다. 여액을 40℃이하 수욕 중에서 감압농축하고 농축액은 분액깔때기에 옮겨 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 디클로로메탄 50 mL를 가하여 2 분간 심하게 흔들어 정치한다. 디클로로메탄 층을 버리고 수용액층에 2 N 염산용액 20 mL를 넣어 pH 1로 조절한 다음 디클로로메탄 50 mL를 가하여 2 분간 심하게 흔들어 정치한다. 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수한 후 다시 수용액층에 디클로로메탄 50 mL를 가하고 분배과정을 되풀이 하여 추출된 용액을 합친다. 합친 용액을 40℃이하 수욕 중에서 감압농축하고 건고물을 벤젠 1 mL로 녹인다.

나) 유도체화

벤젠에 녹인 용액에 디메칠설폭사이드 1 mL를 넣고 요오드화메칠 1 mL를 첨가한 후 수소화나트륨(NaH) 40 mg을 넣고 단단히 밀봉한 다음 40℃ 수욕 중에서 60 분 동안 에스터화 반응을 시킨다. 반응이 종료된 용액에 증류수 10 mL를 넣고 분액깔때기로 옮긴 후 헥산 10 mL를 가하여 심하게 흔들어 정치한다. 헥산층을 받아 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하고 건고물을 아세톤 10 mL로 정용하여 시험용액으로 한다.

<신    설>

6) (생   략)

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼∶DB-5 캐필러리 칼럼 (0.53 mm I.D. × 30 m, 0.5 μm)  또는 이와 동등한 것

(2) 캐리어가스 및 유량 : 헬륨, 15 mL/분

(3) 오븐온도 : 180℃

(4) 주입부 : 230℃

(5) 검출기 온도 : 260℃

(6) 주입량 : 2 μL (직접주입법)

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) (생   략)

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 : 퀸머락 메칠에스테르 유도체 (5.4분) 10 ng.

라) (생   략)

마) 기체크로마토그래프․질량분석의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5MS 캐필러리 칼럼 (0.25 mm ID × 30 m, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 캐리어가스 및 유량 : 헬륨, 1.0 mL/분

(3) 칼럼온도 : 45℃에서 시료를 주입하고 10℃/분의 비율로 280℃로 상승시킨 후 2 분간 유지한다.

(4) 주입부 : Splitless mode

(5) 주입부 온도 : 250℃

(6) Interface 온도 : 280℃

(7) 분자량 범위 : 100 ～ 250

(8) 주입량 : 1 μL

표 1. 기체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 이온

머무름 시간(분)	분자량*	Fragment monitored (m/z)
20.3	235	177, 204

* Quinmerac methyl ester 유도체

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다. 주. 기체크로마토그래프․질량분석기상의 머무름 시간 및 mass spectrum으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크 높이법 또는 피이크 면적법에 따라 정량한다.

4.1.4.133 ∼ 4.1.4.180 (생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

4.2 ∼ 4.3 (생   략)

5. 식품 중 잔류동물용의약품시험법

5.1 (생   략)

5.2 정성시험법

5.2.1 (생   략)

5.2.2 물리․화학적 시험법

5.2.2.1 축산물 중 동물용의약품 동시다성분 시험법

<신    설>

(생   략)

<신    설>

<신    설>

5.2.2.2 ～ 5.2.2.3 (생   략)

5.3 정량시험법

5.3.1 겐타마이신(Gentamicin), 네오마이신(Neomycin), 디히드로스트렙토마이신(Dihydrostreptomycin), 스트렙토마이신(Streptomycin), 스펙티노마이신(Spectinomycin), 아미카신(Amikacin), 아프라마이신(Apramycin), 카나마이신(Kanamycin), 하이그로마이신B(Hygromycin B)

5.3.2～5.3.35 (생   략)

5.3.36 알벤다졸(Albendazole), 펜벤다졸(Fenbendazole), 플루벤다졸(Flubendazole), 옥스펜다졸(Oxfendazole), 티아벤다졸(Thiabendazole), 옥시벤다졸(Oxibendazole)

1) 시험법 적용범위

축산물에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 알벤다졸, 펜벤다졸, 플루벤다졸, 옥스펜다졸, 티아벤다졸, 옥시벤다졸을 에틸아세테이트, 헥산, 에탄올, 0.2 N 염산으로 추출한 후 양이온교환 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기

4) 시약 및 시액

가) (생   략)

나) 표준원액 : 알벤다졸, 펜벤다졸, 플루벤다졸, 옥스펜다졸, 티아벤다졸, 옥시벤다졸 표준품을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L로 한다. 조제된 표준원액은 냉동보관 한다.

다) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 알벤다졸, 펜벤다졸, 옥스펜다졸, 티아벤다졸은 0.15, 0.3, 0.45, 0.6 및 0.75 mg/L, 플루벤다졸은 0.015, 0.03, 0.045, 0.06 및 0.075 mg/L, 옥시벤다졸은 0.05, 0.1, 0.15, 0.3 및 0.45 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준용액은 냉장보관한다.

라) 양이온교환 카트리지 : MCX (Mixed Mode Cation Exchange) 카트리지(60 mg) 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 제조

균질화 한 검체 3 g을 달아 15 mL 원심관에 넣고 에틸아세테이트 8 mL를 가하여 흔들어 섞는다. 이 용액을 3,000 G에서 5분간 원심분리한다. 상층액을 취하고, 잔류물에 에틸아세테이트 8 mL를 가하여 위와 동일하게 원심분리하여 상층액을 모은다. 상층액을 모은 액은 40℃ 수욕조상에서 감압농축 한다. 잔류물에 헥산 5 mL을 가하여 30초 동안 균질화한 후 에탄올:0.2 N 염산(2:1) 혼합용액 1 mL를 가하여 30초 동안 균질화하고 아래층을 취하여 45℃ 수욕조상에서 감압농축 한다. 잔류물에 5% 개미산 메탄올 용액 3 mL를 가하여 녹인다. 미리 아세토니트릴:초산(95:5) 1 mL와 5% 개미산 메탄올 용액 2 mL로 활성화시킨 양이온교환 카트리지에 위의 5% 개미산 메탄올 용액 3 mL에 녹인 잔류물을 흡착시키고 50% 메탄올 용액 2 mL로 세척한다. 25% 수산화암모늄:아세토니트릴(1:4) 혼합용액 3 mL로 용출시켜 40℃이하의 수욕상에서 질소농축하고 잔류물을 0.1% 개미산 용액:메탄올(1:1) 혼합용액 1 mL로 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 조건

(1) 칼럼 : C18(2.0 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상

- 이동상 A : 0.1% 개미산 용액

- 이동상 B : 0.1% 개미산 메탄올 용액]

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0.0	20	80
1.5	20	80
6.0	95	5
8.0	95	5
9.0	20	80
10.0	20	80

(4) 유속 : 0.3 mL/분

(5) 주입량 : 2 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(positive)

(2) Capillary Temperature : 450℃

(3) Collision gas : 질소(N2)

7) 정량시험

가) 시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름 시간을 비교하고, 알벤다졸은 m/z 234, 펜벤다졸은 m/z 268, 플루벤다졸은 m/z 282, 옥스펜다졸은 m/z 159,  티아벤다졸은 m/z 175, 옥시벤다졸은 m/z 218에 대한 면적으로 각각 검량선을 작성하여 시험용액 중 각각의 함량을 구한다.

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)
알벤다졸	266	234, 191, 159
펜벤다졸	300	268, 159, 131
플루벤다졸	314	282, 159
옥스펜다졸	316	159, 191, 284
티아벤다졸	202	175, 131
옥시벤다졸	250	218, 176, 148

나) 정량한계 : 각각 0.001 mg/kg

5.3.37 ～ 5.3.38

5.3.39 ～ 5.3.47 (생   략)

5.3.48 독시싸이클린(Doxycycline), 옥시테트라싸이클린(Oxytetracycline), 클로르테트라싸이클린(Chlortetracycline), 테트라싸이클린(Tetracycline)

5.3.48.1 제1법

1) (생   략)

2) 분석원리

가) 유(乳)

검체에 트리클로로초산 용액을 넣어 단백질을 제거한 후 여과하여 액체크로마토그래프/자외부흡광검출기로 측정한다.

나) 수산물

검체에 EDTA가 함유된 트리클로로초산을 가하여 균질화한 후 원심분리하고 여기에 헥산을 가해 추출하여 농축한 다음 Sep-pak C18 카트리지에 흘려 흡착 및 용출시켜 액체크로마토그래프/자외부흡광검출기로 측정한다.

다) 유(乳) 및 수산물을 제외한 식품

검체에 C18 분말, 수산(oxalic acid)과 EDTA를 넣고 균질화한 후 혼합물을 주사기에 채우고 헥산, 디클로로메탄으로 세척한 다음, 수산 함유 메탄올로 용출하여 건조시킨다. 여기에 이동상을 가하여 용해시킨 후 액체크로마토그래프/자외부흡광검출기로 측정한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외부흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 표준원액

(1) 유(乳), 알(卵), 수산물

옥시테트라싸이클린, 클로르테트라싸이클린, 테트라싸이클린, 독시싸이클린 표준품을 각각 정밀히 달아 100 mL 메스플라스크에 취하고 메탄올로 표시선까지 채워 100 mg/L 농도가 되게 한다.

(2) 유(乳), 알(卵)을 제외한 식품

옥시테트라싸이클린, 클로르테트라싸이클린, 테트라싸이클린, 독시싸이클린 표준품 10 mg을 정밀히 달아 100 mL 메스플라스크에 취하고 메탄올 10 mL에 잘 녹인 다음 물로 표시선까지 채워 잘 혼합한다(100 ppm).

나) 표준용액

(1) 유(乳)

표준원액을 물로 희석해서 사용한다.

(2) 알(卵), 수산물

표준원액을 메탄올로 10 mg/L 농도가 되게 한 후 희석하여 사용한다.

(3) 유(乳), 알(卵)을 제외한 식품

표준원액 10 mL을 정확히 취하여 100 mL 메스플라스크에 옮기고 이동상으로 표시선까지 채운 다음 잘 혼합하여 사용한다(10 ppm).

다) 이동상：무수수산 1.26 g을 물 1 L에 용해시킨 후 이 액 720 mL와 아세토니트릴 180 mL 그리고 메탄올 100 mL를 잘 혼합한 후 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과하여 이동상으로 사용한다.

라) 기타 시약：특급

5) 시험용액의 조제

가) 유(乳)

검체 1 mL에 1.5 mL 20% 트리클로로초산(TCA) 용액을 넣어 30초간 균질화한 후 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 알(卵)

C18 분말 2 g을 유발에 취하고 검체 0.5 g, 수산과 EDTA 각각 0.05 g을 가하고 막자로 C18 분말과 검체가 완전히 균질화되게 한다. 여과지(Whatman No. 1) 2장을 10 mL 주사기에 넣고 균질화된 혼합물을 주사기에 옮겨 담는다. 혼합물 위에 여과지 1장을 놓고 주사봉을 이용하여 혼합물의 부피가 약 4.5 mL되게 압축한다. 헥산 8 mL를 가하여 흘려 보내고 주사기를 vacuum manifold로 옮겨 혼합물 내에 남아있는 헥산을 음압하에서 제거한다. 다시 디클로로메탄 8 mL로 세척하고 주사기를 vacuum manifold로 옮겨 음압하에서 완전히 건조시킨다. 0.01 M 메탄올함유 수산 8 mL로 용출시킨후 그 용출액을 질소농축하여 건조한다. 건조물에 이동상 1 mL를 가하여 10분간 초음파를 통과시키고 용해시킨 후 4℃ 15,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상층액을 취해 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 사용한다.

다) 수산물

검체를 마쇄한 후 10 g을 취해 0.5% EDTA가 함유된 5% 트리클로로초산 40 mL를 가하여 균질기로 2분간 균질화한다. 이 액을 8,000 rpm에서 20분간 원심분리해 상층액을 취해 분액깔때기로 옮기고 헥산：클로로포름(9：1) 혼합액 40 mL를 가해 혼합한 후 액층이 분리될 때까지 정치한다. 분리된 액층 중 아래층은 다른 분액깔때기에 옮겨 헥산：클로로포름(9：1) 혼합액을 다시 40 mL 가하여 액층을 분리한다. 분리된 아래 액층은 농축플라스크에 받아 3 mL 정도가 되도록 40℃에서 감압 농축한다. 농축액은 활성화시킨 Sep-pak C18 카트리지에 흘린 후, 증류수 40 mL를 흘려 세척한다. 카트리지에 흡착된 성분은 메탄올 40 mL를 흘려 용출시키고, 용출액은 다시 감압 하에서 농축기로 건조시킨다. 시험액이 건조된 플라스크에 이동상 2 mL를 가하여 녹이고 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 사용한다.

* Sep-pak C18 카트리지 활성화

진공음압기에 장착하여 20 mL의 메탄올과 20 mL의 증류수를 순차적으로 흘려 세척하고, 5% EDTA 용액 10 mL를 흘린다.

라) 유(乳), 알(卵)을 제외한 식품

C18 분말 2 g을 유발에 취하고 검체 0.5 g, 수산과 EDTA 각각 0.05 g을 가하고 막자로 C18 분말과 검체가 완전히 균질화되게 한다. 여과지(Whatman No. 1) 2장을 10 mL 주사기에 넣고 균질화된 혼합물을 주사기에 옮겨 담는다. 혼합물 위에 여과지 1장을 놓고 주사봉을 이용하여 혼합물의 부피가 약 4.5 mL되게 압축한다. 헥산 8 mL를 가하여 흘려 보내고 주사기를 vacuum manifold로 옮겨 혼합물 내에 남아있는 헥산을 음압하에서 제거한다. 다시 디클로로메탄 8 mL로 세척하고 주사기를 vacuum manifold로 옮겨 음압하에서 완전히 건조시킨다. 0.01 M 수산 함유 메탄올 8 mL로 용출시킨후 그 용출액을 40℃에서 건조시키고 잔류물에 이동상 0.5 mL을 가하여 초음파장치에서 5분간 방치하여 완전히 용해시킨 다음 원심분리하여 상층액을 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 사용한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 칼럼

(가) 유(乳), 알(卵), 수산물

: C18(4.6×250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 유(乳), 알(卵)을 제외한 식품

: μ-Bondapak C18(3.9×300 mm, 10 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상：0.01 M 수산：아세토니트릴：메탄올(700：200：100)

(3) 유속：1.0 mL/분

(4) 측정파장：UV 360 nm

7) 정량시험

가) 시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름시간을 비교하여 피크의 높이 또는 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 옥시테트라싸이클린, 클로르테트라싸이클린, 테트라싸이클린, 독시싸이클린의 함량을 각각 구한다.

나) 독시싸이클린 정량한계：0.05 mg/kg

8) 확인시험

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

- 칼럼 : C18(2.1 × 100 mm, 1.7 μm) 또는 이와 동등한 것

- 칼럼온도 : 35℃

- 이동상

․이동상 A : 0.1% 개미산 용액

․이동상 B : 0.1% 개미산 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0.0	70	30
3.0	60	40
3.1	70	30
4.0	70	30

- 유속 : 0.3 mL/분

- 주입량 : 5 μL

(2) 질량분석기 조건

- Ionization : ESI(positive)

- Capillary temperature : 350℃

- Collision gas : 아르곤(Ar)

- Collision energy : 15 ～ 30 V

나) 확인

시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 표준용액에서 분리 확인되는 특이이온이 시험용액에서 존재하는지를 비교 확인한다. 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

물질	Precursor ion(m/z)	Fragment ion(m/z)
옥시테트라싸이클린	461	426, 443, 381
테트라싸이클린	445	427, 410, 154
클로르테트라싸이클린	479	462, 444, 154
독시싸이클린	445	428, 321, 154

5.3.48.2 제2법

1) 시험법 적용범위

벌꿀 등에 적용한다.

2) ～ 8) (생   략)

5.3.49 ～ 5.3.74 (생   략)

5.3.75

5.3.76 ～ 5.3.94 (생   략)

5.3.95

5.3.96 ～ 5.3.112 (생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

8. 식품표시 관련 시험법

8.2 방사선 조사식품 확인시험

8.2.2 열발광법 (Thermoluminescence, TL)

1) 시험법 적용범위

가) (생   략)

나) 후추, 육두구, 정향, 밤, 버섯, 감자, 건조채소류, 향신료조제품, 곡류, 두류, 어류분말, 패류분말, 갑각류분말, 된장분말, 고추장분말, 간장분말, 전분, 효모․효소식품, 알로에분말, 인삼(홍삼 포함) 제품류, 복합조미식품, 조류식품, 분말차, 침출차, 소스류, 2종 이상이 혼합된 식품과 광물질(silicate minerals)이 분리가 가능한 식품에 적용한다.

[별표 4] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) (생   략)

(2) 글루포시네이트(Glufosinate(ammonium))

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(3) ∼ (8) (생   략)

(9) 델타메트린(Deltamethrin)

◎ 잔류물의 정의 : Deltamethrin (alpha-R 형태, trans-형태의 합)

(생   략)

(10) ∼ (30) (생   략)

(31) 마이클로뷰타닐(Myclobutanil)

(생   략)

바나나	2.0

(32) ∼ (44) (생   략)

(45) 메티다티온(Methidathion)

가지	0.1

감자	0.02

기타감귤류	2.0

망고	0.05

면실	0.2

무(잎)	0.2

감귤	5.0

배	0.3

버섯류	0.2

복숭아	0.2

사과	0.3

살구	0.2

셀러리	0.2

수수	0.1

시금치	0.2

아몬드	0.05

아스파라거스	0.2

양배추	0.2

양상추	0.2

오이	0.05

옥수수	0.1

완두콩	0.1

자두	0.2

차	0.2

체리	0.2

토마토	0.1

포도	0.2

호박	0.2

호프	3.0

<신    설>

(46) ∼ (110) (생   략)

(111) 카바릴(Carbaryl: NAC)

(생   략)

가지	0.5

고추	0.5

기타곡류	1.0

기타콩류	1.0

당근	0.5

딸기	0.5

밀	3.0

복숭아	1.0

쌀	1.0

살구	1.0

수수	1.0

아보카도	1.0

아스파라거스	1.0

자두	1.0

체리	1.0

토마토	0.5

파인애플	0.5

포도	0.5

피망	1.0

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(112) ∼ (130) (생   략)

(131) 클로르피리포스(Chlorpyrifos)

(생   략)

<신    설>

(132) (생   략)

(133) 테부코나졸(Tebuconazole)

(생   략)

<신    설>

(134) ∼ (139) (생   략)

(140) 트랄로메트린(Tralomethrin)

◎ 잔류물의 정의 : Deltamethrin (alpha-R 형태, trans-형태의 합)

(생   략)

(141) ∼ (161) (생   략)

(162) 페니트로티온(Fenitrothion: MEP)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(163) ∼ (177) (생   략)

(178) 폭심(Phoxim)

(생   략)

배추	0.1

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(179) ∼ (205) (생   략)

(206) 클로르페나피르(Chlorfenapyr)

(생   략)

엇갈이배추	0.5

(207) ∼ (217) (생   략)

(218) 디메토모르프(Dimethomorph)

(생   략)

<신    설>

(219) ∼ (227) (생   략)

(228) 아족시스트로빈(Azoxystrobin)

(생   략)

<신    설>

(229) ∼ (232) (생   략)

(233) 펜사이큐론(Pencycuron)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(234) 펜피록시메이트(Fenpyroximate)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(235) ∼ (238) (생   략)

(239) 플루아지남(Fluazinam)

(생   략)

고추	1.0

배	0.3

피망	0.3

<신    설>

(240) ∼ (241) (생   략)

(242) 루페뉴론(Lufenuron)

(생   략)

엇갈이배추	0.2

(243) ∼ (285) (생   략)

(286) 에트리디아졸(Etridiazole)

(생   략)

<신    설>

(287) ∼ (308) (생   략)

(309) 플루톨라닐(Flutolanil)

(생   략)

<신    설>

(310) ∼ (352) (생   략)

(353) 메트코나졸(Metconazole)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(354) ∼ (390) (생   략)

(391) 만디프로파미드(Mandipropamid)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(392) ∼ (398) (생   략)

(399) 사이플루메토펜(Cyflumetofen)

(생   략)

<신    설>

(400) ∼ (407) (생   략)

(408) 스피네토람(Spinetoram)

(생   략)

<신    설>

(409) ∼ (421) (생   략)

(422) 펜티오피라드(Penthiopyrad)

(생   략)

<신    설>

(423) 피콕시스트로빈(Picoxystrobin)

(생   략)

고추	0.5

<신    설>

(424) 피리플루퀴나존(Pyrifluquinazon)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(425) (생   략)

(426) 아메톡트라딘(Ametoctradin)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(427) ∼ (434) (생   략)

(435) 펜피라자민(Fenpyrazamine)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(436) (생   략)

(437) 플룩사피록사드(Fluxapyroxad)

(생   략)

고추	0.3

피망	0.3

(438) (생   략)

(439) 스피로테트라맷(Spirotetramat)

(생   략)

<신    설>

(440) (생   략)

(441) 피리벤카브(Pyribencarb)

(생   략)

<신    설>

(442) 플루피라디퓨론(Flupyradifurone)

(생   략)

<신    설>

(443) ∼ (449) (생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

[별표 5] 인삼의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (79) (생   략)

<신    설>

<신    설>

[별표 6] (생   략)

[별표 7] 식품 중 동물용의약품의 잔류허용기준

(1) ～ (4) (생   략)

(5) 다노플록사신(Danofloxacin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Danofloxacin

(생   략)

유(乳)	0.3

(16) 벤질페니실린/프로케인벤질페니실린(Benzylpenicillin /Procaine benzylpenicillin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Benzylpenicillin

(생   략)

(22) 아목시실린(Amoxicillin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Amoxicillin

(생   략)

유(乳)	0.004

알(卵)	0.01

(23) 알벤다졸(Albendazol) : 구충제

◎ 잔류물의 정의 : Albendazole

(생   략)

(24) (생   략)

(25) 암피실린(Ampicillin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Ampicillin

(생   략)

알(卵)	0.01

(26) ～ (36) (생   략)

(37) 티아벤다졸(Thiabendazole) : 구충제

◎ 잔류물의 정의 : Thiabendazole

(생   략)

(38) ～ (40) (생   략)

(41) 트리클라벤다졸(Triclabendazole) : 구충제

◎ 잔류물의 정의 : Triclabendazole

(생   략)

(42) ～ (43) (생    략)

(44) 페반텔/펜벤다졸/옥스펜다졸(Febantel/ Fenbendazole/Oxfendazole) : 구충제

◎ 잔류물의 정의 : Febantel, Fenbendazole 및 Oxfendazole의 합

(생   략)

(45) 플루벤다졸(Flubendazole) : 구충제

◎ 잔류물의 정의 : Flubendazole

(생   략)

(46) ～ (79) (생   략)

(80) 나프실린(Nafcillin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Nafcillin

(생   략)

유(乳)	0.03

(81) (생   략)

(82) 디클록사실린(Dicloxacillin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Dicloxacillin

(생   략)

유(乳)	0.03

(83) (생   략)

(84) 마보플록사신(Marbofloxacin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Marbofloxacin

(생   략)

유(乳)	0.075

(85) 세파세트릴(Cefacetrile) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Cefacetrile

(생   략)

유(乳)	0.05

(86) 세파졸린(Cefazolin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Cefazolin

(생   략)

유(乳)	0.05

(87) 세파피린(Cephapirin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Cephapirin과 des- acetylcephapirin의 합을 cephapirin으로 함

(생   략)

유(乳)	0.03

(88) 세팔렉신(Cefalexin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Cefalexin

(생   략)

유(乳)	0.1

(89) 세팔로니움(Cefalonium) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Cefalonium

(생   략)

유(乳)	0.01

(90) 세포페라존(Cefoperazone) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Cefoperazone

(생   략)

유(乳)	0.03

(91) 세푸록심(Cefuroxime) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Cefuroxime

(생   략)

유(乳)	0.02

(92) 세프퀴놈(Cefquinome) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Cefquinome

(생   략)

유(乳)	0.02

(93) 오비플록사신(Orbifloxacin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Orbifloxacin

(생   략)

유(乳)	0.02

(94) 옥시벤다졸(Oxibendazole) : 구충제

◎ 잔류물의 정의 : Oxibendazole

(생   략)

유(乳)	0.03

알(卵)	0.03

(95) (생   략)

(96) 카나마이신(Kanamycin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Kanamycin

(생   략)

유(乳)	0.1

알(卵)	0.5

(97) 클라불라닌산(Clavulanic acid) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Clavulanic acid

(생   략)

유(乳)	0.2

(98) 클록사실린(Cloxacillin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Cloxacillin

(생   략)

유(乳)	0.03

(99) 키타사마이신(Kitasamycin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Kitasamycin

(생   략)

알(卵)	0.2

(100) ～ (113) (생   략)

(114) 메벤다졸(Mebendazole) : 구충제

◎ 잔류물의 정의 : Mebendazole, mebendazole amine 및 5-hydroxy mebendazole의 합을 mebendazole로 함

(생   략)

(115) ～ (119) (생   략)

(120) 설피린/디피론/메타미졸(Sulpyrine/Dipyrone/Metamizole) : 항염증제

◎ 잔류물의 정의 : 4-methylamino antipyrine(MAP)

(생   략)

(121) ～ (147) (생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

[별표 8] (생   략)

제1. 총칙 (현행과 같음)

제2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1. ∼ 4. (현행과 같음)

5. 식품일반의 기준 및 규격

1) ∼ 5) (현행과 같음)

6) 식품조사처리 기준

(1) 〜 (5) (현행과 같음)

(6) 식품별 조사처리기준은 다음과 같다.

① 허용대상 식품별 흡수선량

품 목	조사목적	선량(kGy)
감자 양파 마늘	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
버섯(건조포함)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(현행과 같음) 곡류(분말포함), 두류(분말포함) (현행과 같음)	(현행과 같음) (현행과 같음) (현행과 같음)	(현행과 같음) (현행과 같음) (현행과 같음)
(현행과 같음) 어류분말, 패류분말, 갑각류분말 된장분말, 고추장분말, 간장분말 건조채소류(분말포함) 효모식품, 효소식품 클로렐라제품, 스피루리나제품 (현행과 같음) (현행과 같음) 조미건어포류	(현행과 같음) (현행과 같음) (현행과 같음) (현행과 같음) (현행과 같음) (현행과 같음) (현행과 같음) (현행과 같음) 살균	(현행과 같음) (현행과 같음) (현행과 같음) (현행과 같음) (현행과 같음) (현행과 같음) (현행과 같음) (현행과 같음) 7 이하
(현행과 같음) (현행과 같음) (현행과 같음) (현행과 같음) (현행과 같음) 특수의료용도등식품	(현행과 같음) (현행과 같음) (현행과 같음) (현행과 같음) (현행과 같음) (현행과 같음)	(현행과 같음) (현행과 같음) (현행과 같음) (현행과 같음) (현행과 같음) (현행과 같음)

7) ∼ 23) (현행과 같음)

6. (현행과 같음)

제3. ∼ 제4. (현행과 같음)

제5. 식품별 기준 및 규격

1. ∼ 14. (현행과 같음)

15. 면류

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ∼ (2) (현행과 같음)

<삭  제>

(3) 대장균 : n=5, c=1, m=0, M=10(주정처리제품에 한한다.)

(4) 대장균군 : n=5, c=1, m=0, M=10(살균제품에 한한다.)

16. ∼ 19. (현행과 같음)

20. 장류

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ∼ (2) (현행과 같음)

(3) 대장균군 : n=5, c=1, m=0, M=10[혼합장(살균제품)에 한한다.]

(4) (현행과 같음)

6) (현행과 같음)

21. 조미식품

21-1 (현행과 같음)

21-2 소스류

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) 대장균군 : n=5, c=1, m=0, M=10

(2) 세균수 : n=5, c=0, m=0(멸균제품에 한한다.)

(3) ∼ (4) (현행과 같음)

6) (현행과 같음)

21-3 토마토케첩

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) (현행과 같음)

(2) 대장균군 : n=5, c=1, m=0, M=10

(3) (현행과 같음)

6) 시험방법

(1) (현행과 같음)

(2) 대장균군

제9. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.7 대장균군에 따라 시험한다.

(3) (현행과 같음)

21-4 카레

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) (현행과 같음)

(2) 세균수 : n=5, c=0, m=0(멸균제품에 한한다.)

(3) 대장균군 : n=5, c=1, m=0, M=10(살균제품에 한한다.)

(4) 대장균 : n=5, c=1, m=0, M=10(살균제품은 제외한다.)

6) 시험방법

(1) (현행과 같음)

(2) 세균수

제9. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.5.1 일반세균수에 따라 시험한다.

(3) 대장균군

제9. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.7 대장균군에 따라 시험한다.

(4) 대장균

제9. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.8 대장균에 따라 시험한다.

21-5 ∼ 21-6 (현행과 같음)

21-7 복합조미식품

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ∼ (2) (현행과 같음)

(3) 대장균 : n=5, c=2, m=0, M=10

6) (현행과 같음)

22. 드레싱류

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

유 형 규 격	드레싱	마요네즈
(1) 조지방(%)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(2) 대장균군	n=5, c=1, m=0, M=10

6) (현행과 같음)

23. (현행과 같음)

24. 젓갈류

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) (현행과 같음)

(2) 대장균군 : n=5, c=1, m=0, M=10(액젓, 조미액젓에 한한다.)

(3) ∼ (4) (현행과 같음)

(5) 대장균 : n=5, c=1, m=0, M=10(액젓, 조미액젓은 제외한다.)

(6) (현행과 같음)

27. 주류

27-1 탁주

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ∼ (3) (현행과 같음)

<삭    제>

(4) 보존료 : 검출되어서는 아니된다.

(5) 대장균군 : n=5, c=2, m=0, M=10(살균제품에 한한다.)

(6) 대장균 : n=5, c=2, m=0, M=10(살균제품은 제외한다.)

6) 시험방법

(1) ∼ (3) (현행과 같음)

<삭    제>

(4) 보존료

제9. 일반시험법 2.1 보존료에 따라 시험한다.

(5) 대장균군

제9. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.7 대장균군에 따라 시험한다.

(6) 대장균

제9. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.8 대장균에 따라 시험한다.

27-2 약주

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ∼ (3) (현행과 같음)

<삭    제>

(4) 보존료 : 검출되어서는 아니된다.

(5) 대장균군 : n=5, c=2, m=0, M=10(살균제품에 한한다.)

(6) 대장균 : n=5, c=2, m=0, M=10(살균제품은 제외한다.)

6) 시험방법

(1) ∼ (3) (현행과 같음)

<삭    제>

(4) 보존료

제9. 일반시험법 2.1 보존료에 따라 시험한다.

(5) 대장균군

제9. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.7 대장균군에 따라 시험한다.

(6) 대장균

제9. 일반시험법 3. 미생물시험법 3.8 대장균에 따라 시험한다.

27-3 ∼ 27-11 (현행과 같음)

28. ∼ 29. (현행과 같음)

제7. ∼ 제8. (현행과 같음)

제9. 일반시험법

1. ∼ 3. (현행과 같음)

4. 식품 중 잔류농약 분석법

4.1 ∼ 4.1.2.1 (현행과 같음)

4.1.2.2 다종농약다성분 분석법(Multi class pesticide multiresidue methods)-제2법

1) (현행과 같음)

2) 분석원리

------------------------------------------------  ---------------------플로리실 및 카본 카트리지로 -----------------------------------------------------아미노프로필 카트리지로----------------------

--------------.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프：----  ----------------------  -------------------------------질량분석기(MS 또는 MS/MS)

나) 액체크로마토그래프：----  -----------------------------자외부흡광검출기(UV photometric detector), 질량분석기(MS 또는 MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) (현행과 같음)

나) 일회용 카트리지：플로리실(1 g), 카본(500 mg) 및 아미노프로필(1 g) 등의 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지

다) ∼ 마) (현행과 같음)

5) 시험용액의 조제

가) 추출

(1) ∼(2) (현행과 같음)

<삭    제>

주1) (현행과 같음)

주2) (현행과 같음)

나) 정제

(1) 기체크로마토그래프 측정 농약

미리 플로리실 카트리지(Florisil cartridge)------------------------------------ -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------. 이를 미리 헥산 5 mL와 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL로 활성화시킨 카본 카트리지에 용출액을 넣고 초당 1∼2방울 정도의 속도로 용출시켜 시험관에 받는다. 추가로 20% 아세톤 함유 헥산 15 mL로 용출시켜 동일 시험관에 모은다. 용출액은 40℃ 이하 수욕상에서 질소 또는 공기를 낮은 유속으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 20% 아세톤함유 헥산에 녹여서 일정량으로 한 후 막 여과지(membrane filter) (PTFE 0.45 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.(단, 카본 카트리지는 색소 등 방해물질 제거에 필요시에 사용한다.)

주3) (현행과 같음)

주4) (현행과 같음)

(2) 액체크로마토그래프 측정 농약

미리 아미노프로필 카트리지---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------막 여과지(membrane filter)(PTFE 0.45 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.(단, 카본 카트리지는 색소 등 방해물질 제거에 필요시에 사용한다.).

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프 측정조건

(1) GC-ECD, GC-NPD

(가) (현행과 같음)

(나) 운반기체(carrier gas) 및 유량：N2, 1.0 mL/min

(다) ∼ (마) (현행과 같음)

<삭    제>

(2) GC-FPD

(가) (현행과 같음)

(나) 운반기체(carrier gas) 및 유량：N2, 1.0 mL/min

(다) ∼ (라) (현행과 같음)

(마) 검출기온도：280℃

(3) GC-MS/MS(GC-MS 포함)

(가) (현행과 같음)

(나) 운반기체(carrier gas) 및 유량：He, 0.8 mL/min

(다) ∼ (라) (현행과 같음)

(마) 인터페이스 온도：300℃

(바) (현행과 같음)

(사) Collision gas : Ar

(아) Collision energy 및 MRM : 주7) GC-MS/MS 분석 대상(283종) 및 상세 조건 참조

나) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) (현행과 같음)

(2) HPLC-UVD

(가) (현행과 같음)

(나) 검출기：자외부흡광검출기(UV photometric detector) (254 nm)

(다) ∼ (라) (현행과 같음)

(3) LC-MS/MS(LC-MS 포함)

(가) (현행과 같음)

(나) 이동상 : A(0.1% 포름산과 10 mM 아세트산암모늄 함유한 물 용액), B(0.1% 포름산과 2 mM 아세트산암모늄 함유한 아세토니트릴 용액) 또는 이와 동등한 것

- A/B(95/5, v/v)에서 (5/95, v/v)의 혼합액으로 20분간 농도균배한 후 10분 이상 흘려보낸다.

(다) ∼ (바) (현행과 같음)

7) (현행과 같음)

주5) GC-MS(MS/MS 포함) 및 LC-MS(MS/MS 포함) 상의 머무름시간(retention time) 및 질량분석 스펙트럼으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.

8) (현행과 같음)

주6) 정량시험은 단일 표준품으로 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

9) 이 시험법의 분석 대상농약 및 검출기

가) 기체크로마토그래프 분석 대상(207종)

1	Acrinathrin(ECD)	2	Aldrin(ECD)	3	Ametryn(NPD)
4	Anilofos(NPD,ECD)	5	Atrazine(NPD)	6	Azaconazole(NPD)
7	Azinphos-ethyl(FPD)	8	Azinphos-methyl(ECD,NPD)*	9	α-BHC(ECD)
10	β-BHC(ECD)	11	γ-BHC(ECD)	12	δ-BHC(ECD)
13	Bifenthrin(ECD)	14	Binapacryl(ECD)	15	Bromacil(ECD)
16	Bromobutide(NPD)	17	Bromophos-methyl(FPD)	18	Bromopropylate(ECD)
19	Bromoxynil(ECD)	20	Bupirimate(NPD)	21	Butafenacil(ECD)
22	Cadusafos(NPD,FPD)	23	Captafol(ECD)*	24	Captan(ECD)*
25	Carbophenothion(ECD,NPD)	26	Chinomethionat(ECD,NPD)	27	Chlordane(ECD)
28	Chlorfenapyr(NPD,FPD)	29	Chloridazon(ECD)	30	Chlorobenzilate(ECD)
31	Chlorothalonil(ECD)	32	Chlorpyrifos(ECD,NPD)*	33	Chlorpyrifos-methyl(ECD,NPD)
34	Chlorthal-dimethyl(ECD)	35	Clomeprop(ECD)	36	Cyanazine(ECD)
37	Cyanophos(NPD)	38	Cyflufenamid(ECD)*	39	Cyfluthrin(ECD)*
40	Cyhalothrin(ECD)*	41	Cypermethrin(ECD)*	42	Cyproconazole(NPD)
43	Cyprodinil(NPD)*	44	p,p-DDD(ECD)	45	p,p-DDE(ECD)
46	o,p-DDT(ECD)	47	p,p-DDT(ECD)	48	Deltamethrin(ECD)*
49	Diazinon(ECD,NPD)	50	Dichlofluanid(ECD,NPD)*	51	Dichlorvos(NPD,FPD)*
52	Dicloran(ECD)	53	Dicofol(ECD)	54	Dieldrin(ECD)*
55	Diethofencarb(NPD)	56	Diflufenican(ECD)	57	Dimepiperate(ECD,NPD,FPD)
58	Dimethachlor(ECD)	59	Dimethenamid(NPD,ECD)	60	Dimethoate(ECD,NPD)
61	Dimethylvinphos(NPD,FPD,ECD)	62	Diniconazole(ECD)	63	Diphenamid(NPD)
64	Diphenylamine(NPD)	65	Dithiopyr(ECD)	66	Edifenphos(ECD,NPD)
67	α-Endosulfan(ECD)	68	β-Endosulfan(ECD)	69	Endosulfan-sulfate(ECD)
70	Endrin(ECD)	71	EPN(ECD, NPD)	72	Esprocarb(ECD,NPD)
73	Ethion(ECD,NPD)	74	Ethoprophos(ECD,NPD)	75	Etoxazole(NPD)
76	Etrimfos(ECD,NPD)	77	Fenamidone(ECD,NPD)	78	Fenarimol(ECD,NPD)*
79	Fenazaquin(NPD,FPD)*	80	Fenbuconazole(ECD,NPD)*	81	Fenitrothion(ECD,NPD)
82	Fenobucarb(NPD)	83	Fenothiocarb(NPD)*	84	Fenoxanil(ECD,NPD)
85	Fenoxycarb(NPD)	86	Fenpropathrin(ECD,NPD)*	87	Fenthion(ECD,NPD)*
88	Fenvalerate(ECD)*	89	Fipronil(NPD,FPD,ECD)	90	Flonicamid(ECD)*
91	Fluacrypyrim(ECD)	92	Fludioxonil(NPD)	93	Flufenacet(ECD)
94	Flufenoxuron(NPD)	95	Flumiclorac-pentyl(ECD)	96	Flupyrazofos(NPD,FPD)**
97	Fluquinconazole(ECD)	98	Flusilazole(NPD)	99	Fluthiacet-methyl(ECD)
100	Flutolanil(ECD,NPD)	101	Fluvalinate(ECD)*	102	Folpet(ECD)*
103	Fonofos(NPD)	104	Fosthiazate(NPD,FPD)	105	Fthalide(ECD)
106	Furathiocarb(NPD)	107	Heptachlor(ECD)	108	Heptachlor epoxide(ECD)
109	Hexachlorobenzene(ECD)	110	Hexaflumuron(ECD)	111	Imazalil(ECD)*
112	Imibenconazole(NPD)	113	Indanofan(ECD)	114	Indoxacarb(ECD)
115	Iprobenfos(NPD,FPD)	116	Iprodione(ECD)	117	Iprovalicarb(ECD)
118	Isofenphos(NPD)	119	Isofenphos-methyl(NPD)*	120	Isoprothiolane(ECD)
121	Isoxathion(NPD)	122	Kresoxim-methyl(NPD)	123	Lactofen(ECD)
124	Lufenuron(ECD)	125	Malathion(ECD,NPD)	126	Mecarbam(ECD,NPD)
127	Mefenacet(ECD)	128	Mefenpyr-diethyl(ECD)	129	Mepronil(NPD)
130	Metconazole(NPD)	131	Methabenzthiazuron(NPD)	132	Methidathion(ECD,NPD)
133	Methoxychlor(ECD)	134	Metrafenone(ECD)	135	Molinate(NPD)
136	Myclobutanil(ECD,NPD)*	137	Nitrapyrin(ECD)	138	Nitrothal-isopropyl(ECD)
139	Nonachlor(ECD)	140	Novaluron(ECD)	141	Nuarimol(ECD)*
142	Ofurace(ECD)	143	Oxadixyl(ECD,NPD)	144	Oxydemeton-methyl(FPD)
145	Paclobutrazol(ECD,NPD)*	146	Parathion(ECD,NPD)	147	Parathion-methyl(ECD,NPD)
148	Penconazole(ECD,NPD)	149	Pencycuron(NPD)	150	Pendimethalin(ECD,NPD)
151	Permethrin(ECD)*	152	Phenthoate(ECD,NPD)	153	Phosalone(ECD,NPD)
154	Phosmet(ECD,NPD)	155	Phosphamidone(ECD,NPD)	156	Picolinafen(ECD)
157	Picoxystrobin(ECD)	158	Piperophos(NPD,FPD)	159	Pirimicarb(NPD)
160	Pirimiphos-ethyl(NPD)	161	Pirimiphos-methyl(NPD)	162	Probenazole(ECD)
163	Prochloraz(ECD)	164	Procymidone(ECD,NPD)	165	Profenofos(ECD,NPD)
166	Propazine(NPD)	167	Propisochlor(ECD,NPD)	168	Propoxur(NPD)
169	Propyzamide(ECD)	170	Prothiofos(NPD)	171	Pyraclofos(NPD)
172	Pyrazophos(ECD,NPD)	173	Pyridaben(NPD,ECD)*	174	Pyridalyl(ECD,NPD,FPD)
175	Pyrimethanil(NPD)	176	Pyrimidifen(ECD)	177	Pyriminobac-methyl(NPD)
178	Quinalphos(NPD)	179	Quintozene(ECD)	180	Simeconazole(NPD)
181	Sulprofos(FPD)	182	TCMTB(ECD)	183	Tebuconazole(NPD)*
184	Tebufenpyrad(NPD)*	185	Tebupirimfos(ECD,NPD, FPD)	186	Teflubenzuron(ECD)
187	Tefluthrin(ECD)	188	Terbufos(NPD)*	189	Terbutylazine(ECD,NPD)
190	Tetrachlorvinphos(FPD)	191	Tetradifon(ECD)	192	Thiazopyr(ECD,NPD)
193	Thifluzamide(ECD,NPD)	194	Thiometon(ECD,NPD)	195	Tolclofos-methyl(ECD,NPD)
196	Tolfenpyrad(NPD)	197	Tolylfluanid(ECD,NPD)	198	Tralomethrin(ECD,NPD)
199	Triadimefon(ECD,NPD)	200	Triazophos(NPD)	201	Tribufos(FPD)
202	Triflumizole(ECD,NPD)	203	Triflumuron(ECD)	204	Uniconazole(ECD)
205	Vernolate(ECD)	206	Vinclozoline(ECD,NPD)	207	Zoxamide(ECD,NPD)

주7) GC-MS/MS 분석 대상(283종) 및 상세 조건은 아래와 같다.

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	토막이온 (Fragmention, m/z)	충돌 에너지 (Colllisionenergy, eV)
1	2,6-Diisoporpylnaphthalene	11.511	212.33	212	212	197	15
					197	167	5
2	Acrinathrin	24.552	541.4	541	181	152	30
						127	30
3	Aldrin	15.506	364.9	362	263	193	30
						226	20
4	Allethrin	17.187	302.4	302.2	123	81	10
						95	10
5	Allidochlor	8.078	173.6	173	132	132	5
						56	10
						138	5
6	Ametryn	14.399	227.3	227	227	185	10
						170	10
7	Anilofos	23.201	367.8	367	226	157	10
						184	10
8	Aspon	15.534	378.4	378.1	211	115	15
					210	146	10
9	Atrazine	12.334	216.7	215	215	173	10
						200	10
10	Azaconazole	18.742	300.1	299	217	217	5
						173	20
11	Azinphos-ethyl	25.081	345.4	345	160	132	5
						105	10
						77	15
12	Azinphos-methyl*	23.912	317.3	317	160	132	5
						104	5
13	Benalaxyl	21.237	325.4	325.2	148	105	15
					148	77	5
14	α-BHC	11.867	290.8	288	181	145	25
						109	25
15	β-BHC	12.367	290.8	288	181	109	30
						145	30
16	δ-BHC	12.615	290.8	288	181	145	10
						109	10
17	γ-BHC	13.227	290.8	288	181	145	10
						109	10
18	Benodanil	20.597	323.1	323	231	76	25
						203	15
19	Benzoylprop-ethyl	23.028	366.2	365.1	105	51	35
						77	15
20	Bifenox	23.957	342.1	341	341	310	15
21	Bifenthrin	22.71	422.9	422
					190	126	10
					181	166
							15
						167	15
22	Binapacry	18.939	322.3	322	83	83	5
						54	10
23	Bromacil	14.865	261.1	295	205	188	25
						162	25
24	Bromobutide	11.642	312.2	311	119	91	15
						65	30
25	Bromophos-methyl	15.996	366	364	331	316	25
						286	35
26	Bromopropylate	22.74	428.1	426	341	183	10
						185	10
27	Bupirimate	18.637	316.4	316	273	193	10
						109	15
						150	10
28	Butafenacil	26.673	474.8	474	331	331	10
						180	10
29	Butralin	16.316	295.3	295.2	266	174	20
						220	10
30	Butylate	7.815	217.4	217.2	156	57	5
					146	90	5
31	Cadusafos	11.589	270.4	270	159	131	15
						97	15
32	Captafol*	21.7	349.1	347	79	77	20
						51	20
33	Captan*	16.845	300.6	299	149	70	20
						79	20
34	Carbophenothion	20.648	342.9	342	342	157	10
						296	5
35	Chinomethionat	18.586	234.3	234	206	148	25
						121	25
36	Chlorbufam	11.776	223.7	223	153	90	20
					153	125	10
37	Chlordane	17.767	409.8	406	373	373	5
						265	15
						300	25
38	Chlordane-trans	17.606	409.8	406	272	237	15
					373	266	20
39	Chlorethoxyfos	10.106	336	333.9	97	65	15
					153	97	10
40	Chlorfenapyr	18.919	407.6	406	59	59	10
						57	25
41	Chlorfenson	18.379	303.2	302	111	75	15
					175	111	10
42	Chlorfluazuron	18.325	540.7	539	321	304	10
					321	97	15
43	Chlorflurenol-methyl	17.547	274.7	274	215	152	20
					217	152	25
44	Chloridazon	20.96	221.6	221	221	220	10
						105	15
						77	20
45	Chlorobenzilate	19.484	325.2	324	251	111	30
						139	30
46	Chloroneb	8.691	207.1	206	191	113	15
					206	191	10
47	Chloropropylate	20.044	339.2	338	139	111	15
					251	139	15
48	Chlorothalonil*	12.969	365.9	264	266	133	20
						170	20
49	Chlorpyrifos*	15.307	350.6	349	314	258	15
						285	15
50	Chlorpyrifos-methyl	14.007	322.5	321	286	93	20
						271	20
51	Chlorthal-dimethyl	15.475	332	330	301	301	10
						273	15
						222	25
52	Chlorthin	15.983	297.65	297	297	109	10
					109	79	10
53	Chlorthiophos	20.671	361.2	360	325	269	10
					297	269	5
54	Chlozolinate	17.001	332.1	331	186	145	15
					188	147	15
55	Cinmethylin	14.516	274.4	274	123	123	5
						81	10
						95	10
56	Clomeprop*	23.45	324.2	323	288	288	20
						132	25
						120	30
57	Cyanazine	15.369	240.7	240	225	225	10
						189	10
58	Cyanophos	12.64	243.2	243	243	148	5
						109	15
59	Cycloate	11.114	215.4	215	154	154	5
						73	10
						72	10
60	Cycloprothrin	15.3	482.4	481	209	116	20
						141	15
						169	15
61	Cyflufenamid*	18.9	412.4	412	188	88	30
62	Cyfluthrin*	27.487	434.3	433	226	206	10
						199	10
63	Cyhalofop-butyl	24.348	357.4	357	256	120	10
						91	20
						158	30
64	Cyhalothrin*	24.22	449.9	449	181	152	25
						127	25
65	Cypermethrin*	27.7	416.3	415	181	152	30
						127	30
66	Cyproconazole	19.087	291.8	291	222	82	10
						125	10
67	Cyprodinil*	16.315	225.3	225	224	208	25
						224	25
68	Deltamethrin*	30.821	505.2	503	253	93	25
						174	25
69	Demeton-O	9.952	258.3	258.1	88	60	5
					171	115	10
70	Demeton-S	11.526	258.3	258.1	88	60	5
					170	114	10
71	Demeton-S-methyl-sulfone	14.732	262.3	262	169	109	15
						125	5
72	Desmetryn	13.709	213.3	213.1	213	58	10
73	Diallate	11.678	270.2	269	234
						171	5
						234
							10
						192	10
						150	25
74	Diazinon	12.742	304.3	304	304	179	30
						137	30
75	Dichlofenthion	13.85	315.2	314	279	223	15
					223	205	15
76	Dichlofluanid*	15.07	333.2	332	224	123	25
						77	25
77	Dichlormid	7.135	207	207	166	56	10
					172	108	5
78	Dichlorvos*	7.738	221	220	185	93	20
						109	20
79	Dicloran	12.118	207	206	206	148	20
						176	20
80	Dicofol	15.771	370.5	368	139	75	25
						111	25
81	Dieldrin*	18.61	380.9	378	263	193	30
						228	20
82	Diethatyl-ethyl	18.487	311.8	311.1	162	147	10
					188	160	5
83	Diethofencarb	15.302	267.3	267	225	196	5
						168	5
84	Diflufenican	21.587	384.3	394	266	266	10
						246	15
						238	15
85	Dimepiperate	16.913	263.4	263	145	69	25
						111	25
86	Dimethachlor	13.848	255.7	255	134	134	10
						105	15
						78	25
87	Dimethenamid	13.875	275.8	275	230	154	20
						137	20
88	Dimethoate	12.06	229.3	229	125	79	20
						63	20
89	Dimethylvinphos	15.346	331.5	330	295	109	20
						280	20
90	Diniconazole	19.62	326.2	325	268	232	20
						171	20
91	Dinitramine	12.902	322.2	322.1	261	195	20
						241	10
92	Dioxathion	12.189	456.5	456	125	97	10
93	Diphenamid	15.958	239.3	239	167	79	30
						165
							10
						152	10
94	Diphenylamine	11.013	169.2	169	169	169	10
						167	10
95	Dithiopyr	14.514	401.4	401	286	210	15
						238	15
96	p,p-DDD	19.772	320	318	235	165	30
						199	30
97	p,p-DDE	18.416	318.1	316	246	176	25
						211	25
98	o,p-DDT	19.872	354.5	352	235	165	20
						199	20
99	p,p-DDT	21.033	354.5	352	235	165	20
						199	20
100	Edifenphos	20.727	310.4	310	173	109	10
						155	10
101	α-Endosulfan	17.76	406.9	404	195	125	25
						159	25
102	β-Endosulfan	19.61	406.9	404	241	170	20
						206	20
103	Endosulfan-sulfate	20.87	422.9	420	272	237	30
						143	30
104	Endrin	19.28	380.9	378	263	193	30
						228	30
105	EPN	22.674	323.3	323	157	77	15
						110	15
106	Epoxiconazole	22.693	329.8	329.1	192	111	25
						138	10
107	EPTC	7.122	189.3	189.1	128	86	5
					132	90	5
108	Esprocarb	15.087	265.4	265	222	162	5
						151	5
109	Etaconazole	20.37	328.2	327.1	173	109	30
					173	145	15
110	Ethalfluralin	10.502	333.3	333.1	276	202	30
					316	276	15
111	Etofenprox	29.057	376.5	376.2	163	135	15
					163	107	10
112	Ethion	19.767	384.5	384	231	175	10
						157	10
113	Ethofumesate	15.139	286.3	286.1	161	105	10
					207	161	5
114	Ethoprophos	11.045	242.3	242	158	114	20
						97	20
115	Etoxazole	22.988	359.4	359	141	112	20
						113	15
						141	20
116	Etridiazole	8.096	247.5	245.9	183	140	10
					211	183	30
117	Etrimfos	13.157	292.3	292	181	153	5
						98	5
118	Fenamidone	23.024	311.4	311	238	103	30
						238	30
119	Fenarimol*	24.827	331.2	330	251	139	25
						111	25
120	Fenazaquin*	23.332	306.4	306	160	117	20
						145	20
121	Fenbuconazole*	26.95	336.8	336	129	102	10
						78	10
122	Fenchlorphos	14.609	321.5	319.9	285	93	20
						270	15
123	Fenfuram	12.848	201.2	201.1	109	53	15
					201	109	10
124	Fenitrothion	14.843	277.2	277	277	109	10
						260	10
125	Fenobucarb	10.733	207.3	207	121	103	15
						91	15
126	Fenothiocarb*	17.537	253.4	253	160	72	15
127	Fenoxanil	19.139	329.2	328	189	125	15
						154	15
128	Fenoxycarb	22.816	301.3	301	186	109	15
						157	15
129	Fenpropathrin*	23.024	349.4	349	265	210	10
						181	20
130	Fenson	16.091	268.7	268	141	77	5
					268	77	20
131	Fenthion	15.412	278.3	278	278	109	25
						125	25
132	Fenvalerate*	29.395	419.9	419	225	119	15
						147	10
133	Fipronil	17.198	437.2	436	367	213	30
					367	255	30
134	Flamprop-isopropyl	20.35	363.8	363.1	105	51	30
					105	77	15
135	Flonicamid*	10.504	229.2	229	174	146	10
						126	25
136	Fluchloralin	12.776	355.7	355.1	326
						119	25
						63
							15
					306	264	10
137	Fludioxonil	18.057	248.2	248	248	154	10
						182	10
138	Flufenpyr-ethyl	20.213	408.8	408	408	345	10
						373	10
139	Flumetralin	18.235	510.4	509.1	143	107	20
						117	20
140	Flumiclorac-pentyl*	31.119	423.9	423	318	260	20
						107	30
141	Flumioxazine	29.351	354.3	354	354	354	5
						326	10
						312	10
142	Fluopyram	17.096	396.76	396	173	145	20
					173	95	35
143	Fluorodifen	18.559	328.2	328	190	75	20
					190	126	10
144	Flurochloridone	16.13	312.1	311	187	159	10
					311	174	15
145	Flurtamone	24.543	333.3	333.1	333	120	15
					199	157	20
146	Flusilazole	18.567	315.4	315	233	165	30
						109	30
147	Fluthiacet-methyl	33.032	403.9	403	318	260	20
						107	30
148	Flutolanil	19.979	323.3	323	173	145	20
						95	20
149	Flutriafol	18.183	301.3	301.1	123	95	25
					123	75	15
150	Fluvalinate*	29.803	502.9	502	250	207	25
						200	25
151	Folpet*	17.023	296.6	295	260	130	10
						232	10
152	Fonofos	12.808	246.3	246	246	137	10
						109	15
153	Fosthiazate	15.975	283.3	283	195	103	10
						139	10
154	Fthalide	15.858	271.9	270	243	179	30
						215	30
155	Furathiocarb	23.527	382.5	382	163	107	10
						135	10
156	Halfenprox	28.586	477.3	476.1	265	115	15
157	Heptachlor	14.49	373.3	370	263	115	25
					272	237	20
						239	20
158	Heptachlor-epoxide	16.625	389.3	386	353	263	15
						282	15
159	Heptenophos	9.507	250.6	250	124	89	20
					124	63	30
160	Hexachlorbenzene	11.996	284.8	282	284	284	5
						249	20
						213	20
161	Hexaconazole	18.44	314.2	313.1	231	175	35
					214	159	30
162	Imazalil*	18.076	297.2	296	215	173	10
						215	10
163	Indanofan	23.172	340.8	340	139	75	30
						111	30
164	Indoxacarb	30.608	527.8	527	150	123	25
						114	25
165	Iprobenfos	13.43	288.3	288	204	91	5
						171	5
166	Iprodione	19.568	330.2	329	187	124	20
						159	20
167	Iprovalicarb	18.829	320.4	320	134	134	10
						94	15
						98	10
168	Isazofos	13.055	313.7	313	161	119	10
						146	10
169	Isofenphos	16.541	345.4	345	213	121	10
						185	10
170	Isofenphos-methyl*	16.129	331.4	331	199	121	15
						93	25
171	Isopropalin	16.579	309.4	309.2	264	222	5
					238	165	10
172	Isoprothiolane	18.178	290.4	290	118	90	15
						118	15
173	Isoxanthion	19.015	313.3	313	177	177	5
						130	5
						77	15
174	Kresoxim-methyl	18.654	313.4	313	131	90	20
						116	20
175	Lactofen*	24.641	461.8	461	344	223	20
						344	10
						167	25
176	Leptophos	24.718	412.1	409.9	171	77	15
					155	77	15
177	Malathion	15.07	330.4	330	173	99	10
						127	10
178	Mecarbam	16.646	329.4	329	131	74	15
						86	15
179	Mefenacet	24.252	298.4	298	192	136	10
						164	10
180	Mefenpyr-diethyl	22.038	373.3	372	299	299	5
						253	15
						272	5
181	Mepronil	20.21	269.3	269	119	91	5
						107	5
182	Metconazole	23.302	319.8	319	125	89	20
						99	20
						125	25
183	Methidathion	17.217	302.3	302	145	145	5
						85	5
184	Methoprotryne	19.324	271.4	271.1	256	170	25
					256	212	15
185	Methoxychlor	22.923	345.7	344	227	169	25
						212	25
186	Methyl pentachlorophenyl sulfide*	15.064	296.4	294	296	246	30
						263	30
187	Methyl trithion	19.812	314.8	314.8	157	75	5
					157	121	15
188	Metolachlor	15.489	283.8	283.1	238	162	10
					162	133	20
189	Metrafenone	25.122	409.3	408	393	224	15
						362	15
190	Metribuzin	13.832	214.3	214.1	198	55	30
					198	89	15
191	MGK-264	16.166	275.39	275.39	164	98	40
					164	80	35
192	Molinate	10.219	187.3	173	126	98	15
						83	15
193	Myclobutanil	18.503	288.8	288	179	125	10
						152	10
194	Napropamide	18.374	271.4	271.2	128	72	20
					271	72	35
195	Nitrapyrin	9.384	230.9	229	194	133	20
						158	20
196	Nitrothal-isopropyl	15.758	295.3	295	236	194	10
						148	20
						120	30
197	cis-Nonachlor*	19.786	444.2	440	407	300	20
						144	20
						335	10
198	trans-Nonachlor*	17.847	444.2	440	409	301	25
						263	25
199	Nuarimol	21.403	314.7	314	107	107	5
						79	5
200	Ofurace	20.321	281.7	281	232	186	15
						158	15
201	Oxadixyl	19.673	278.3	278	233	118	25
						146	25
202	Oxydemeton-methyl	6.783	246.3	246	109	109	5
						79	10
203	Paclobutrazol	17.464	293.8	293	236	125	10
						167	10
204	Parathion-ethyl	15.511	291.3	291	291	109	15
205	Parathion-methyl	14.168	263.2	263	263	109	10
						127	20
						246	5
206	Pebulate	9.454	203.3	203	128	128	5
						72	5
207	Penconazole	16.467	284.2	283	248	157	30
						248	5
208	Pendimethalin*	16.294	281.3	281	252	208	5
						191	5
209	Pentachloroaniline	13.719	265.4	263	265	194	30
						203	30
210	Permethrin	26.293	391.3	390	183	182	10
						154	10
						166	15
211	Phenthoate	16.74	320.4	320	274	121	10
						246	10
212	Phentoxazone	23.882	353.8	353	285	70	10
						285	5
						187	20
213	Phosalone	23.817	367.8	367	182	111	25
						138	10
						102	25
214	Phosmet	22.538	317.3	317	160	132	15
						104	15
215	Phosphamidone	13.728	299.7	299	264	127	20
						193	10
216	Picolinafen	22.793	376.3	376	376	376	5
						239	10
						266	10
217	Picoxystrobin	17.674	367.3	367	145	116	10
						102	30
						115	30
218	Piperophos*	22.757	353.5	353	320	122	10
						81	25
219	Pirimicarb*	13.372	238.3	238	238	116	10
						96	25
220	Pirimiphos-ethyl	15.914	333.4	333	333	180	10
						163	10
221	Pirimiphos-methyl	14.755	305.3	305	305	180	15
						233	15
222	Probenazole	12.519	223.3	223	130	77	20
						103	20
223	Prochloraz*	26.367	376.7	375	180	180	10
						138	15
						95	25
224	Procymidone	16.892	284.1	283	283	96	10
						283	10
225	Profenofos	18.275	373.6	372	139	97	5
						121	5
226	Profluralin	12.392	347.3	347.1	318	54.8	10
					318	199	15
227	Prometon	11.72	225.3	225.2	210	168	5
					183	168	5
228	Pronamide	12.389	256.1	255	173	145	15
					175	147	15
229	Propachlor	10.811	211.7	211	176	120	15
						57	15
						92	20
230	Propazine	12.374	229.7	229	229	173	25
						105	30
231	Propetamphos	12.319	281.3	281.1	138	64	15
					138	110	10
232	Propham	9.419	179.2	179	179	137	10
						93	15
233	Propisochlor	14.319	283.8	283	162	119	20
						144	20
234	Propyzamide	12.722	256.1	255	173	145	15
						109	30
235	Prothiofos	18.139	345.2	344	267	221	20
						239	20
236	Pyracarbolid	16.222	217.3	217.11	125	55	15
					125	97	5
237	Pyraclofos	25.37	360.8	360	194	138	10
						132	10
238	Pyrazophos	24.863	373.4	373	221	149	15
						193	15
239	Pyridaben	26.304	364.9	364	147	105	10
						132	10
240	Pyridalyl*	28.416	491.1	489	204	147	15
						175	15
241	Pyrifenox	16.618	295.2	294	262	227	10
						192	15
						91	20
242	Pyrimidifen	29.07	377.9	377	184	169	20
						157	20
243	Pyriminobac-methyl	20.87	361.4	361	302	256	10
						230	10
244	Quinalphos	16.782	298.3	298	146	118	20
						91	20
245	Quinoxyfen	21.314	308.1	307	237	208	30
					307	237	20
246	Quintozene	12.519	295.3	293	237	143	20
						119	20
247	Secbumeton	12.856	225.3	225.2	196	85	10
					169	154	5
248	Simeconazole	14.187	293.4	293	121	101	15
						75	15
						91	15
249	Spiroxamine	14.977	297.5	297.3	100	58	10
					100	72	5
250	Sulfotep	10.962	322.3	322	322	146	25
					322	174	15
251	Sulprofos	20.315	322.4	322	322	156	15
						139	15
252	TCMTB	18.005	238.4	238	180	180	10
						136	20
253	Tebuconazole*	9.75	307.8	307	250	125	10
						153	10
254	Tebufenpyrad	23.201	333.9	333	171	88	25
						171	25
255	Tebupirimfos	13.349	318.4	318	261	137	15
						153	15
256	Tefluthrin	13.06	418.7	418	177	127	5
						157	5
257	Terbacil	12.837	216.7	216.1	160	76	15
					160	117	5
258	Terbufos	12.64	288.4	288	231	129	25
						175	25
259	Terbumeton	12.031	225.3	225.2	169	141	5
					169	154	5
260	Terbuthylazine	12.615	229.7	229	214	104	25
						83	25
261	Tetrachlorvinphos	17.407	366	396	109	109	5
						89	10
262	Tetraconazole	15.97	372.1	371	336	204	10
					336	218	20
263	Tetradifon	23.616	356	354	356	159	20
						229	20
264	Tetramethrin	23.563	331.4	331.2	164	77	25
					164	107	10
265	Tetrasul	20.702	324.1	321.9	324	252	15
					322	252	15
266	Thiazopyr	15.147	396.4	396	128	128	5
						85	25
267	Thifluzamide	18.445	528.1	526	194	125	20
						166	20
268	Thiometon	11.966	246.3	246	125	79	10
						63	20
269	Tolclofos-methyl	14.207	301.1	300	265	250	20
						93	20
270	Tolfenpyrad	31.684	383.9	383	383	171	171
						212	10
271	Tolyfluanid	16.567	347.3	542	238	91	35
						137	35
272	Tralomethrin	30.815	665	661	253	93	15
						172	15
273	Triadimefon	15.611	293.8	293	208	111	30
						181	15
274	Triadimenol	17.16	295.8	295.1	128	65	20
					168	70	20
275	Triazophos	20.237	313.3	313	161	106	15
						92	15
276	Tribufos	18.486	314.5	314	202	147	5
						113	15
277	Triflumizole	16.939	345.7	345	206	179	15
						186	10
278	Triflumuron	9.4	358.7	358	139	111	15
						75	15
279	Trifluralin	10.73	335.3	335.1	264	160	10
					306	264	25
280	Uniconazole	18.44	291.8	291	234	165	10
						137	20
						102	25
281	Vernolate	9.308	203.3	203	128	128	5
						86	5
						43	10
282	Vinclozolin	14.094	286.1	285	285	213	10
						186	10
283	Zoxamide	16.997	336.6	335	187	123	25
						159	25

※ 각 토막이온(fragment ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 토막 이온도 적용이 가능함.

※ 위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precursor ion) 및 토막이온(fragment ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 토막이온(fragment ion)간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율이 ± 20∼30% 이내에서 일치하여야 한다.

나) 액체크로마토그래프 분석 대상(83종)

1	Acetamiprid(UVD)*	2	Aldicarb(FLD)	3	Amisulbrom(UVD)
4	Azafenidin(UVD)**	5	Azoxystrobin(UVD)	6	Bendiocarb(FLD)
7	Benzoximate(UVD)*	8	Boscalid(UVD)	9	Bromoxynil(UVD)
10	Butocarboxim(FLD)	11	Carbaryl(FLD)	12	Carbofuran(FLD)
13	Chlorantraniliprole (UVD)	14	Chlorimuron-ethyl(UVD)	15	Chlorobenzuron(UVD)
16	Chlorotoluron(UVD)	17	Chromafenozide(UVD)	18	Cinosulfuron(UVD)
19	Clothianidin(UVD)*	20	Cyazofamid(UVD)	21	Cymoxanil(UVD)
22	Dimethomorph(UVD)	23	Ethaboxam(UVD)	24	Ethametsulfuron-methyl(UVD)
25	Ethiofencarb(FLD)	26	Fenhexamid(UVD)	27	Fenpyroximate(UVD)*
28	Ferimzone(UVD)	29	Fluacrypyrim(UVD)	30	Flubendiamide(UVD)
31	Flufenacet(UVD)	32	Flufenoxuron(UVD)	33	Fluquinconazole(UVD)
34	Flusulfamide(UVD)	35	Forchlorfenuron(UVD)	36	Hexaflumuron(UVD)
37	Imazamox(UVD)	38	Imazapic(UVD)	39	Imazaquin(UVD)
40	Imazethapyr(UVD)	41	Imibenconazole(UVD)	42	Iprovalicarb(UVD)
43	Isoprocarb(FLD)	44	Isoproturon(UVD)	45	Lufenuron(UVD)
46	Mepanipyrim(NPD, UVD)	47	Metamifop(UVD)	48	Methabenzthiazuron(UVD)
49	Methiocarb(FLD)	50	Methomyl(FLD)*	51	Methoxyfenozide(UVD)
52	Metolcarb(FLD)	53	Nitenpyram(UVD)	54	Novaluron(UVD)
55	Oxamyl(FLD)*	56	Oxaziclomefon(UVD)	57	Phenmedipham(UVD)
58	Pirimicarb(FLD)	59	Promecarb(FLD)	60	Propoxur(FLD)
61	Pyraclostrobin(UVD)	62	Pyrazolate(UVD)	63	Pyribenzoxim(UVD)
64	Pyributicarb(UVD)	65	Pyridate(UVD)	66	Pyrimethanil(UVD)
67	Pyriproxyfen(UVD)	68	Pyroquilon(UVD)	69	Quinoclamine(UVD)
70	Rimsulfuron(UVD)	71	Spirodiclofen(UVD)	72	Tebufenozide(UVD)
73	Teflubenzuron(UVD)	74	Thenychlor(UVD)	75	Thiacloprid(UVD)*
76	Thiamethoxam(UVD)*	77	Thiodicarb(FLD)	78	Tiadinil(UVD)
79	Tribenuron-methyl (UVD)	80	Tricyclazole(NPD, UVD)	81	Trifloxystrobin(ECD, UVD)
82	2,3,5-Trimethacarb (FLD)	83	3,4,5-Trimethacarb(FLD)

주8) LC-MS/MS 분석 대상(117종) 및 상세 조건은 아래와 같다.

순번	물질명 (compound)	이온화 (Ionization mode)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	토막이온 (Fragmention, m/z)	충돌 에너지 (Collision energy, eV)
1	Acetamiprid*	positive	4.99	222.7	222	223	90	33
							99	36
							126	20
2	Aldicarb	positive	5.57	190.3	190	157	109	29
							110	15
							116	9
3	Amisulbrom	negative	6.76	466.3	465	359	66	36
							131	19
							277	15
4	Asulam	positive	1.8	230.2	230	231	92	15
							108	15
							156	10
							199	5
5	Azamethiphos	positive	5.79	324.7	324	325	76	51
							112	33
							139	25
6	Azoxystrobin	positive	7.86	403.4	403	404	172	52
							183	39
							372	14
7	Bendiocarb	positive	6.24	223.2	223	224	81	33
							109	19
							167	18
8	Bensulide	positive	9.84	397.5	397	398	141	33
							314	11
							356	5
9	Benzoximate*	positive	11.11	363.8	363	364	105	31
							184	33
							199	11
10	Bixafen	positive	11.5	414.2	413	414	266	26
							374	24
							394	15
11	Boscalid	positive	8.24	343.2	342	343	112	39
							140	21
							307	19
12	Bromoxynil*	negative	5.33	276.9	275	276	79	44
							81	43
13	Butocarboxim	positive	5.36	190.3	190	191	47	27
							59	45
							75	9
14	Carbaryl	positive	6.49	201.2	201	202	117	24
							127	31
							145	11
15	Carbetamide	positive	8.06	236.3	236	237	92	30
							120	15
							192	8
16	Carbofuran	positive	6.33	221.3	221	222	123	22
							165	12
17	Chlorantraniliprole	positive	7.2	483.2	481	484	194	32
							286	15
							453	16
18	Chlorimuron-ethyl	positive	7.79	414.8	414	415	121	32
							185	27
							186	17
19	Chlorobenzuron	negative	6.97	309.2	308	307	126	31
							264	18
							271	13
20	Chlorotoluron	positive	6.38	212.7	212	213	72	27
							140	26
							77	26
21	Chromafenozide*	positive	8.76	394.5	394	395	147	41
							175	20
							339	5
22	Cinosulfuron	positive	5.86	413.4	413	414	83	37
							183	16
23	Clothianidin*	positive	6.37	249.7	249	250	66	46
							93	34
							131	19
24	Cyazofamid	positive	9.49	324.8	324	325	108	16
							217	20
							261	8
25	Cycloprothrin	positive	14.46	482.4	481	462	147	34
							341	26
							445	13
26	Cymoxanil	positive	11.1	198.2	198	199	113	35
							141	27
							184	19
27	Demeton-S- methyl sulfon	positive	6.57	262.3	262	263	109	28
							169	16
							231	13
28	Dicrotophos	positive	4.22	237.2	237	238	72	32
							127	18
							193	9
29	Dimethomorph	positive	7.18	387.9	387	388	139	33
							165	32
							301	20
30	Ethaboxam	positive	6.31	320.4	320	321	183	23
							200	26
							237	18
31	Ethametsulfuron-methyl	positive	6.17	410.4	410	411	83	45
							168	28
							196	15
32	Ethiofencarb	positive	6.69	225.3	225	226	51	65
							77	43
							107	16
33	Fenhexamid	positive	8.26	302.2	301	302	55	35
							97	21
							143	39
34	Fenpyroximate*	positive	13.16	421.5	421	422	138	32
							214	29
							366	15
35	Ferimzone	positive	5.61	254.3	254	255	117	29
							124	21
							132	20
36	Fluacrypyrim	positive	11.1	426.4	426	427	115	53
							117	42
							145	29
37	Fluazinam	negative	8.28	465.1	464	463	387	19
							398	19
							416	22
38	Flubendiamide	positive	9.26	682.4	682	683	256	61
							274	29
							408	13
39	Flufenacet	positive	9.04	363.3	363	364	109	34
							124	32
							152	20
40	Flufenoxuron	negative	8.63	488.8	488	487	304	22
							411	23
							467	19
41	Fluometuron	positive	8.92	232.2	232	233	145	36
							160	28
							168	22
42	Fluquinconazole	positive	8.36	376.2	375	376	272	34
							307	26
							349	21
43	Fluridone	positive	7.41	329.3	329	330	91	49
							115	54
							310	29
44	Flusulfamide	negative	7.27	415.2	414	413	171	45
							179	40
							283	29
45	Forchlorfenuron	positive	6.37	247.7	247	248	93	34
							129	17
							155	16
46	Hexaflumuron	negative	7.64	461.1	460	459	175	39
							276	22
							439	15
47	Imazamox	positive	4.73	305.3	305	306	163	35
							193	26
							217	21
48	Imazapic	positive	4.79	275.3	275	276	145	35
							163	26
							231	20
49	Imazaquin	positive	5.79	311.3	311	312	198	28
							199	28
50	Imazethapyr	positive	5.35	289.3	289	290	177	27
							245	20
51	Imibenconazole	positive	11.28	411.7	410	411	125	33
							342	16
52	Ipconazole	positive	12.97	333.9	333	334	89	60
							125	39
							19	21
53	Isoprocarb	positive	6.92	193.2	193	194	77	55
							95	16
							152	12
54	Isoproturon	positive	6.59	206.3	206	207	72	17
							165	14
55	Isoxaben	positive	10.25	332.4	332	333	107	59
							150	40
							165	18
56	Lenacil	positive	9.39	234.3	234	235	135	35
							136	34
							153	15
57	Lufenuron	negative	8.3	511.2	510	509	175	43
							326	20
							339	16
58	Malaoxon	positive	8.29	314.3	314	315	99	23
							125	33
							269	8
59	Mepanipyrim	positive	8.81	223.3	223	224	104	27
							106	28
							131	23
60	Mesosulfuron-methyl	positive	8.8	503.5	503	504	139	55
							182	26
							306	25
61	Metamifop*	positive	11.01	440.9	440	441	103	41
							288	18
62	Metamitron	positive	7.3	202.2	202	203	104	22
							174	16
							175	17
63	Methabenzthiazuron	positive	6.31	221.3	221	222	124	30
							150	34
							165	17
64	Methiocarb	positive	6.69	225.3	225	226	78	42
							91	33
							122	19
65	Methomyl*	positive	4.38	162.2	162	163	73	29
							88	11
							106	11
66	Methoxyfenozide	positive	8.5	368.5	368	369	105	43
							149	18
							313	5
67	Metolcarb	positive	5.94	165.2	165	166	91	26
							94	31
							109	11
68	Metominostrobin	positive	9.43	284.3	284	285	194	21
							196	15
							238	11
69	Metosulam	positive	8.29	418.3	417	418	140	56
							174	34
							175	27
70	Nitenpyram	positive	3.92	270.7	270	271	196	18
							225	11
71	Novaluron	negative	12.92	492.7	492	491.2	305	17
							333	22
							470	14
72	Oxamyl*	positive	4.14	219.3	219	237	72	16
							90	10
							220	5
73	Oxaziclomefon	positive	12.18	376.3	375	376	133	32
							161	27
							190	15
74	Oxydemeton-methyl	positive	6.49	246.3	246	247	109	28
							125	24
							169	14
75	Phenmedipham	positive	7.41	300.3	300	301	93	36
							136	34
							108	19
76	Pinoxaden	positive	12.19	400.5	400	401	101	44
							159	52
							317	23
77	Promecarb	positive	7.97	207.3	207	208	91	34
							109	17
							151	7
78	Propaquizafop	positive	13.61	443.9	443	444	299	25
							327	25
							371	17
79	Propoxur	positive	6.17	209.2	209	210	93	25
							111	14
							168	5
80	Propyrisulfuron	positive	10.38	455.9	455	456	196	16
							218	29
							260	18
81	Prosulfocarb	positive	13.24	251.4	251	252	65	48
							91	20
							128	13
82	Prothioconazole	negative	9.07	344.3	343	342	100	24
							264	21
							306	17
83	Pyraclonil	positive	8.76	314.8	314	315	169	30
							241	24
							276	18
84	Pyraclostrobin	positive	10.38	387.3	387	388	149	30
							163	25
							296	13
85	Pyraflufen-ethyl	positive	11.88	413.2	412	413	253	38
							261	36
							339	21
86	Pyrazolate	positive	10.69	439.3	438	439	145	53
							173	21
							249	30
87	Pyrazolynate	positive	12.48	439.3	438	439	91	35
							145	54
							173	22
88	Pyribenzoxim	positive	12.12	609.3	609	610	180	32
							413	15
89	Pyributicarb	positive	12.8	330.4	330	331	91	25
							105	37
							108	31
90	Pyridate	positive	15.68	378.9	378	379	104	37
							207	17
							351	8
91	Pyrimethanil	positive	7.44	199.3	199	200	77	41
							82	26
							107	25
92	Pyriproxyfen	positive	12.55	321.4	321	322	96	16
							129	31
							185	23
93	Pyroquilon	positive	5.42	173.2	173	174	105	33
							117	31
							132	23
							174	5
94	Quinoclamine	positive	6.58	207.6	207	208	77	35
							105	27
							208	5
95	Rimsulfuron	positive	6.04	431.4	431	432	139	40
							182	24
							325	15
96	Spirodiclofen	positive	14.36	411.3	410	411	213	35
							215	22
							313	8
97	Sulfentrazone_NH4	positive	8.44	387.2	386	404	178	36
							307	27
							387	13
98	Tebufenozide	positive	9.26	352.5	352	353	105	38
							133	19
							297	5
99	Tebuthiuron	positive	8.59	228.3	228	229	116	28
							157	29
							172	18
100	Teflubenzuron	negative	7.98	381.1	380	379	196	25
							339	15
							359	11
101	Tepraloxydim	positive	10.92 8.62	341.8	341	342	166	21
							222	16
							250	13
102	Thenylchlor	positive	9.02	323.8	323	324	59	38
							97	42
							127	17
103	Thiacloprid*	positive	5.34	252.7	252	253	99	39
							126	21
							186	14
104	Thiamethoxam*	positive	4.47	291.7	291	292	108	40
							181	23
							211	13
105	Thiodicarb	positive	5.84	354.5	354	355	73	56
							79	31
							88	16
106	Tiadinil	negative	6.5	267.7	267	266	71	17
							178	19
							238	15
107	Tralkoxydim	positive	14.26	329.4	329	330	138	21
							284	13
							285	14
108	Triasulfuron	positive	8	401.8	401	402	137	34
							141	22
							167	19
109	Tribenuron-methyl	positive	7.01	395.4	395	396	83	35
							155	15
							181	20
110	Tricyclazole	positive	4.96	189.2	189	190	92	35
							109	34
111	Tridemorph	positive	11.35	297.5	297	298	136	28
							98	29
							116	25
112	Trifloxystrobin	positive	11.14	408.4	408	409	130	26
							116	32
							145	41
113	Trifloxysulfuron	positive	8.91	459.3	437	438	186	17
							139	46
							182	21
114	2,3,5-Trimethacarb	positive	6.92	193.2	193	194	256	21
							107	38
							122	27
115	3,4,5-Trimethacarb	positive	6.96	193.2	193	194	137	13
							107	34
							122	25
116	Triticonazole	positive	7.59	317.8	317	318	137	11
							70	35
							125	35
117	XMC	positive	6.53	179.2	179	180	77	47
							108	29
							123	12

※ 각 토막이온(fragment ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 토막 이온도 적용이 가능함.

※ 위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름시간(retention time)과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precusor ion) 및 토막이온(fragment ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 토막이온(fragment ion)간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율이 ± 20∼30% 이내에서 일치하여야 한다.

※ 토막이온간 반응세기의 비율 허용 범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위(%)
〉50	±20
〉20, ≤50	±25
〉10, ≤20	±30

주9) 이 시험법을 이용하여 위의 분석대상 성분중 * 표시된 농약이 식품에서 검출될 경우 정량분석은 식품공전 내 계열별 분석법 혹은 단성분 분석법으로 한다.

주10) 위의 분석대상 성분 중 ** 표시된 농약은 장기 미생산 품목이다.

4.1.3 ∼ 4.1.4.45 (현행과 같음)

4.1.4.46 에테폰(Ethephon)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류 및 서류 등의 -----------.

2) (현행과 같음)

3) (현행과 같음)

가) 기체크로마토그래프 - 질소ㆍ인 검출기(GC-NPD)

나) 기체크로마토그래프 - 질량분석기(GC-MS)

4) (현행과 같음)

가) 용매 : ----------------- 특급

나) 물 : 3차 증류수---------

----

다) 표준원액 : 표준품을 ------

-------------------.

라) (현행과 같음)

마) 기타시약 : -------------

--------

5) (현행과 같음)

가) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 20 g(콩류 및 곡류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 그 20 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 잘게 갈아 혼합한 20 g)을 정밀히 달아 1 N 염산 10 mL를 가하여 산성화 시킨 후 무수황산나트륨 70 g을 첨가하여 탈수하고 에틸아세테이트 100 mL를 가하여 15분간 진탕하여 추출한다. 추출액을 부흐너 깔때기로 흡인 여과한 후, 에틸아세테이트 20 mL로 용기 및 잔사를 씻어 앞의 여액과 합하여 40℃ 이하의 수욕상에서 감압 농축한다. 농축 건고물을 아세토니트릴 50 mL에 용해시킨 후 250 mL 분액깔때기에 옮기고, 헥산 30 mL를 가하여 2분간 격렬히 진탕한 후 층이 완전히 분리될 때까지 정치하여 분리된 아세토니트릴층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받은 후 40℃ 이하의 수욕 상에서 감압 농축 한다.

나) 메틸화

농축에 의해 얻어진 건고물은 메탄올 4 mL를 가하여 재용해한 후, 이중 2 mL를 시험관에 취한다. 여기에 2 N-트리메틸실릴다이아조메탄 용액 1 mL를 넣고 실온에서 30분간 메틸화한다. 메틸화에 의해 얻어진 용액을 100 mL 분액깔때기에 옮기고, 5% 염화나트륨 수용액 30 mL 및 헥산 25 mL를 가하여 2분간 격렬히 진탕한 후 층이 완전히 분리될 때까지 정치하여 분리된 수용액층을 취한다. 수용액에 디클로로메탄 25 mL를 가하여 2분간 격렬히 진탕한 후 층이 완전히 분리될 때까지 정치하여 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 과정을 1회 반복하여 앞서 받은 디클로로메탄층과 합한 후 40℃ 이하의 수욕 상에서 감압 농축한다. 최종적으로 농축에 의해 얻어진 잔류물은 아세톤 2 mL로 재용해하여 시험용액으로 사용한다.

6) (현행과 같음)

가) (현행과 같음)

(1) 칼럼 : DB-5 (30 m × 0.25 mm i.d., 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상가스 및 유량 : 질소, 1 mL/min.

(3) 오븐 온도 : 80℃에서 검체를 주입하고 3분간 유지한 후 5℃/분의 비율로 90℃까지 온도를 상승시켜 5분간 유지하고 10℃/분의 비율로 150℃까지 온도를 상승시켜 10분간 유지한다.

(4) 주입부 온도 : 250℃

(5) 검출기 온도 : 300℃

(6) 주입량 : 1 μL, splitless mode

나) 검량선 작성

-----------------------

---------------------------------------------------------피크 ---------

---------------------------.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

에테폰(12.1분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 에테폰을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5MS (30 m × 0.25 mm i.d., 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상가스 및 유량 : 헬륨, 1 mL/min.

(3) 오븐온도 : 60℃에서 검체를 주입하고 10℃/분의 비율로 온도를 180℃로 상승시켜 1분간 유지하고 30℃/분의 비율로 250℃까지 온도를 상승시켜 2분간 유지한다.

(4) 주입부 : 250℃

(5) 인터페이스 온도 : 250℃

(6) 분자량 범위 : 50～650 m/z

(7) 주입량 : 1 μL, splitless mode

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	관측이온 (m/z)
8.4	144.5	145	109, 113

4.1.4.47 ∼ 4.1.4.75 (현행과 같음)

4.1.4.76 이나벤파이드(Inabenfide)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류 및 서류 등의 -----------.

2) (현행과 같음)

검체를 아세톤으로 추출한 후 디클로로메탄으로 액-액 분배하고 플로리실 카트리지로 1차 정제한 후 아미노프로필 카트리지로 2차 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) (현행과 같음)

가) 액체크로마토그래프 - 자외부흡광검출기(HPLC/UVD)

나) 액체크로마토그래프 - 질량분석기(LC-MS)

4) (현행과 같음)

가) 용매 : -------------- 특급

나) 물 : 3차 증류수 ------

----

다) 표준원액 : 표준품을 아세톤에 녹여 100 mg/kg이 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세톤에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

마) 플로리실 카트리지 : 플로리실(1g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 아미노프로필 카트리지 : 아미노프로필(1g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

사) (현행과 같음)

5) (현행과 같음)

가) (현행과 같음)

검체를 분쇄하여 균질화한 후 20 g(콩류 및 곡류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 그 20 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 잘게 갈아 혼합한 20 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세톤 100 mL을 가하여 진탕기에서 10분간 진탕한 후 추출물을 여과지와 여과보조제가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과하고, 아세톤 20 mL로 용기 및 잔사를 씻어 앞의 여액과 합하여 40℃ 이하의 수욕상에서 약 20 mL로 감압농축하였다. 여과액을 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 증류수 100 mL 및 포화식염수 30 mL를 가한 후 디클로로메탄 70 mL를 가하여 2분간 격렬히 진탕한 후 층이 완전히 분리될 때까지 정치하여 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 과정을 1회 반복하여 앞서 받은 디클로로메탄층과 합하여 40℃ 이하의 수욕 상에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려버린다. 플라스크를 상온으로 냉각한 후,  건고물을 헥산/아세톤 혼합액(90/10, v/v) 2 mL에 용해시킨다.

나) 정제

헥산/아세톤 혼합액(90/10, v/v) 5 mL를 통과시켜 활성화시킨 플로리실 카트리지(Florisil cartridge)에 상기 재용액 1 mL를 첨가하고, 헥산/아세톤 혼합액(90/10, v/v) 10 mL로 용출시켜 버리고, 헥산/아세톤 혼합액(80/20, v/v) 8 mL로 용출시킨다. 이어서 용리액 전량을 헥산/아세톤 혼합액(80/20, v/v) 5 mL를 통과시켜 활성화시킨 아미노프로필 카트리지(NH2 cartridge)에 첨가하고, 헥산/아세톤 혼합액(80/20, v/v) 10 mL로 용출시켜 버리고, 헥산/아세톤 혼합액(70/30, v/v) 10 mL로 용출시켜 받은 후 40℃ 이하의 수욕 상에서 감압 농축하여, 건고물을 50% 아세토니트릴 2 mL로 재용해하여 시험용액으로 한다.

<삭    제>

<삭    제>

6) (현행과 같음)

가) 액체크로마토그래프----

---

(1) 칼럼 : C18(4.6 mm i.d.×250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 검출기 및 파장: 자외부흡광검출기(272nm)

(3) 이동상 : 아세토니트릴/물 (48/52, v/v)

(4) 유속 : 1 mL/min

(5) 칼럼 온도 : 40℃

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

-----------------------

------액체크로마토그래프에 ----------------------------------- 피크 ------ ----------------------------.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

이나벤파이드 (10.2분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

-----------------------

--- 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 이나벤파이드를 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(2.1 mm i.d × 50 mm, 1.7 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.05% 아세트산 포함 아세토니트릴

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
7.2	338.96	339	321, 80

4.1.4.77 ∼ 4.1.4.131 (현행과 같음)

4.1.4.132 퀸메락(Quinmerac)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류 및 서류 등의 식품에 적용한다.

2) (현행과 같음)

검체를 아세톤으로 추출한 후 디클로르메탄과 헥산을 이용하여 액-액 분배하고 벤젠, 디메틸설폭사이드, 요오드화메틸, 수소화나트륨으로 메틸화하여 실리카 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) (현행과 같음)

가) 액체크로마토그래프 - 자외부흡광검출기(HPLC/UVD)

나) 액체크로마토그래프 - 질량분석기(LC-MS/MS)

4) (현행과 같음)

가) 용매 : -------------- 특급

나) 물 : 3차 증류수-------

----

다) 표준원액 : 표준품을 ----

--------------------.

라) 표준용액 : 표준원액 1 mL를 취하여 플라스크에 넣고 실온에서 질소를 통과하면서 증발건고 시킨 후 메틸화에 따라 실험하고 아세토니트릴로 적절한 농도로 희석해 사용한다.

마) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) (현행과 같음)

가) (현행과 같음)

검체를 분쇄하여 균질화한 후 20 g(콩류 및 곡류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 그 20 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 잘게 갈아 혼합한 20 g)을 정밀히 달아 1 N 염산 수용액 1 mL를 가한 후 5분간 방치하여 산성화 시킨 후 아세톤 100 mL를 가하여 10분간 진탕하여 추출한다. 추출액을 부흐너 깔때기로 흡인 여과한 후, 아세톤 20 mL로 용기 및 잔사를 씻어 앞의 여액과 합하여 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축 한다. 농축 추출액을 250 mL 분액깔때기에 옮기고, 5% 염화나트륨 수용액 80 mL 및 디클로로메탄 70 mL를 가하여 2분간 격렬히 진탕한 후 층이 완전히 분리될 때까지 정치하여 분리된 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 과정을 1회 반복하여 앞서 받은 디클로로메탄층을 합한 후 40℃ 이하의 수욕 상에서 감압농축한다.

나) 메틸화

농축 건고물을 벤젠 4 mL를 가하여 재용해하여, 이중 2 mL를 감압플라스크에 취한 후 디메틸설폭사이드(DMSO) 2 mL, 요오드화메틸 2 mL 및 수소화나트륨 0.2 g을 가하여 테프론 테이프로 실링하여 막은 후 40℃ 수욕 상에서 30분간 메틸화시킨 후 증류수 10 mL를 서서히 가하면서 반응을 종료시킨다. 메틸화에 의해 얻어진 용액을 분액깔때기에 옮기고, 5% 염화나트륨 수용액 30 mL 및 헥산 25 mL를 가하여 2분간 격렬히 진탕한 후 층이 완전히 분리될 때까지 정치하여 분리된 헥산층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 과정을 1회 반복하여 앞서 받은 헥산층과 합한 후 40℃ 이하의 수욕 상에서 감압 농축 한 후 건고물을 헥산 2 mL에 용해시킨다.

다) 정제

헥산 5 mL를 통과시켜 활성화시킨 Silica SPE 카트리지에 상기 재용액 전량을 첨가하고, 헥산 8 mL 및 헥산/아세톤 혼합액(90/10, v/v) 5 mL를 차례로 용출시켜 버리고, 헥산/아세톤 혼합액(90/10, v/v) 5 mL로 용출시켜 받은 후 40℃ 이하의 수욕 상에서 감압 농축하여, 건고물을 50% 아세토니트릴 2 mL로 재용해하여 시험용액으로 사용한다.

6) (현행과 같음)

가) 액체크로마토그래프----

----

(1) 칼럼 : C18(4.6 mm i.d.×250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물(50/50, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출기 파장 : 240 nm

(6) 주입량 : 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

----------------------

-----액체크로마토그래프에 -------------------------------------피크---- ----------------------------.

다) (현행과 같음)

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

퀸메락(7.9분)

라) (현행과 같음)

<삭    제>

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 퀸메락을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (2.1 mm i.d. × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 포함 아세토니트릴/0.1% 포름산 수용액(20/80, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
4.6	235	221.9	141, 149

4.1.4.133 ∼ 4.1.4.180 (현행과 같음)

4.1.4.181 옥사티아피프롤린(Oxathiapiprolin)

1) 시험법 적용범위

과일류, 서류, 채소류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 옥사티아피프롤린을 아세토니트릴로 추출하고 디클로로메탄으로 액-액 분배한 후, 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프 - 자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

나) 액체크로마토그래프 - 질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1000 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴/물(50/50, v/v)에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

마) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 20 g(콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 20 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 잘게 갈아 혼합한 20 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(콩류 등 건조 검체의 경우 증류수 40 mL를 가한 후 30분간 방치) 아세토니트릴 100 mL을 가하여 진탕기에서 10분간 진탕한다. 추출물을 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 아세토니트릴 40 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한다. 합친 여액을 40℃ 이하의 수욕상에서 감압하여 용매를 모두 날려버린 후 증류수 100 mL를 가하고 1 N NaOH를 천천히 가하여 pH를 9～10으로 조절한다. 이를 500 mL 용량의 분액여두에 옮기고 포화식염수 10 mL와 디클로로메탄 50 mL를 차례로 가한 후 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치시킨 후 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 남아있는 수용액 층에 디클로로메탄 50 mL를 추가로 가하여 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하의 수욕 상에서 감압하여 용매를 모두 날려버린 후, 잔류물에 디클로로메탄을 가하여 최종 부피가 16 mL가 되게 한다. [지방성 검체의 경우 잔류물에 헥산 30 mL를 건고물에 가하여 녹인 후 250 mL 분량의 분액 여두에 옮기고 아세토니트릴 30 mL로 2회 분배 추출한다. 합친 아세토니트릴 층을 40℃에서 감압 농축한 후 잔류물에 디클로로메탄을 가하여 최종부피 16 mL가 되게 한다.]

나) 정제

실리카 카트리지에 디클로로메탄 5 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 추출액 중 4 mL를 카트리지 상단에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출시켜 버리고 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸 아세테이트/디클로로메탄(15/85, v/v) 8 mL를 유출시켜 씻어 버리고 에틸 아세테이트/디클로로메탄(20/80, v/v) 10 mL를 가하고 유출시켜 받은 시험액을 감압농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압하여 용매를 모두 날려버리고 플라스크를 상온으로 냉각한 후, 잔류물에 아세토니트릴/물(50/50, v/v)을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한 뒤 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (4.6 mm i.d. × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 (65/35, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 50℃

(5) 검출기 파장 : 260 nm

(6) 주입량 : 20 μ

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

옥사티아피프롤린 (5.6분)

라) 정량한계

0.01 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻은 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 옥사티아피프롤린을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (2.1 mm i.d. × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼 온도 : 40℃

(3) 이동상

시간(분)	아세토니트릴 (%)	물(%)
0	10	90
3	10	90
10	95	5
13	10	90
15	10	90

(4) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
9.4	539.5	539	540

4.1.4.182 인다지플람(Indaziflam)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 서류, 채소류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 인다지플람을 아세토니트릴로 추출한 후 실리카 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프 - 질소·인 검출기(GC-NPD)

나) 기체크로마토그래프 - 질량분석기(GC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 각각 아세톤에 녹여 1000 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세톤에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

마) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) C18 카트리지 : C18(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

사) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 20 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 그 20 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 잘게 갈아 혼합한 20 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 및 콩류 등 건조 검체의 경우 증류수 40 mL를 가한 후 30분간 방치) 아세토니트릴 50mL를 가하여 진탕기에서 5분간 진탕한다. 추출물을 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과하고 아세토니트릴 20 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한다. 합친 여액을 40℃ 이하의 수욕상에서 감압하여 용매를 모두 날려버린 후 증류수 100 mL을 가한다. 이를 500 mL 용량의 분액여두에 옮기고 포화식염수 30 mL와 디클로로메탄 50 mL를 가한 후 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치시킨 후 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 남아있는 수용액 층에 50 mL를 추가로 가하여 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하의 수욕 상에서 감압하여 용매를 모두 날려버린 후, 잔류물에 헥산을 가하여 최종부피가 10 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다. [지방성 검체의 경우 잔류물에 헥산 30 mL를 건고물에 가하여 녹인 후 250 mL 분량의 분액 여두에 옮기고 아세토니트릴 30 mL로 2회 분배 추출한다. 합친 아세토니트릴 층을 40℃에서 감압 농축한 후 잔류물에 헥산을 가하여 최종부피 10 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터를 이용해 여과한 후 시험용액으로 한다.]

나) 정제

실리카 카트리지에 헥산 5 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 추출액을 카트리지 상단에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출시켜 버리고 차례로 에틸 아세테이트/헥산(30/70, v/v) 5 mL를 용출시켜 씻어버린 후 에틸 아세테이트/헥산(40/60, v/v) 5 mL를 용출시켜 받는다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압하여 용매를 모두 날려버리고 플라스크를 상온으로 냉각한 후, 잔류물에 아세톤을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

( * 채소류의 경우 실리카 카트리지 정제 후 다음 과정을 추가한다. C18 카트리지에 디클로로메탄 5 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출하여 버린 후 고정상 상단이 노출되기 전에 건고물을 용해한 5 mL의 디클로로메탄 용액을 가한다. 이어 디클로로메탄 5 mL를 가하여 버린 후 메탄올/디클로로메탄(2/98, v/v) 10 mL를 가하여 용출시켜 받는다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압하여 용매를 모두 날려버리고 플라스크를 상온으로 냉각한 후, 잔류물에 아세톤을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.)

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5 (0.25 mm i.d. × 30 m, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상가스 및 유량 : 질소, 1 mL/min

(3) 오븐온도 : 220℃에서 검체를 주입하고 5분간 유지 후 20℃/min의 비율로 온도를 280℃까지 상승시켜 5분간 유지 후 5℃/min의 비율로 온도를 300℃까지 상승시켜 3분간 유지

(4) 주입부 온도 : 260℃

(5) 검출기 온도 : 280℃

(6) 주입량 : 1 μL, splitless

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

인다지플람 (8.9 분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 인다지플람을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5MS (0.25 mm i.d. × 30 m, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상가스 및 유량 : 헬륨, 1 mL/min

(3) 칼럼오븐온도 : 220℃에서 검체를 주입하고 5분간 유지 후 20℃/min의 비율로 온도를 280℃까지 상승시켜 5분간 유지 후 5℃/min의 비율로 온도를 300℃까지 상승시켜 3분간 유지

(4) 주입부 : 260℃

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 분자량 범위 : 50～450 m/z

(7) 주입량 : 1 μL, splitless

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
7.8	301.4	301	144, 286

4.1.4.183 아이속사플루톨(Isoxaflutole)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 서류, 채소류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 아이속사플루톨 및 아이속사플루톨 디케토니트릴을 0.1% 아세트산 수용액/아세토니트릴(20/80, v/v)로 추출하고 디클로로메탄으로 액-액 분배한 후, 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 아이속사플루톨 및 아이속사플루톨 디케토니트릴 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 10 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 10 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg를 잘게 갈아 혼합한 10 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 및 콩류 등 건조 검체의 경우 0.1% 아세트산 수용액 20 mL를 가한 후 30분간 방치) 0.1% 아세트산 수용액/아세토니트릴 (20/80, v/v) 50 mL를 가하여 진탕기에서 10분간 진탕한다. 추출물을 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 아세토니트릴 20 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한다. 합친 여액에 증류수 100 mL를 가하고 pH 미터기를 이용해 1 N HCl를 천천히 가해 pH 2가 되도록 한다. 이를 500 mL 용량의 분액여두에 옮기고 염화나트륨 15 g 및 디클로로메탄 50 mL를 차례로 가한 후 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치시킨 후 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 남아있는 수용액 층에 디클로로메탄 50 mL를 추가로 가하여 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하의 수욕 상에서 감압하여 용매를 모두 날려버린 후, 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종부피 5 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다. [지방성 검체의 경우 잔류물에 헥산 30 mL를 건고물에 가하여 녹인 후 250 mL 분량의 분액 여두에 옮기고 아세토니트릴 30 mL로 2회 분배 추출한다. 합친 아세토니트릴 층을 40℃에서 감압 농축한 후 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종부피 5 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터를 이용해 여과한 후 시험용액으로 한다.]

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (2.1 mm i.d. × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼 온도 : 40℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 포름산을 함유한 메탄올

(나) 이동상 B : 0.1% 포름산 수용액

시간(분)	A(%)	B(%)
0	10	90
4	10	90
9	90	10
10	90	10
12	10	90
16	10	90

(4) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) 이온화 : ESI positive-ion mode

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Spray voltage : 4.5 kV

(4) Collision gas : 아르곤

(5) 충돌에너지

분석성분	선구이온 (Precursor ion, m/z)	토막이온 (Fragment ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
아이속사플루톨	360.2	220	30
		251	20
아이속사플루톨 디케토니트릴	360.2	69	10
		251	20

※ 각 토막이온에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 토막이온도 적용이 가능함

다) 검량선 작성

표준용액을 아세토니트릴에 일정 농도로 희석한 다음 검체에 주입하고 시험용액의 조제과정에 따라 시험한 후, 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 이온의 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선(matrix matched calibration curve)을 작성한다.

라) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프- 질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

아이속사플루톨 (A, 9.4 분), 아이속사플루톨 디케토니트릴 (B, 8.8 분)

마) 정량한계

0.01 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻은 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

4.2 ∼ 4.3 (현행과 같음)

5. 식품 중 잔류동물용의약품시험법

5.1 (현행과 같음)

5.2 정성시험법

5.2.1 (현행과 같음)

5.2.2 물리․화학적 시험법

5.2.2.1 축산물 중 동물용의약품 동시다성분 시험법

5.2.2.1.1 축산물 중 항균제 동시 다성분 시험법

(현행 5.2.2.1과 같음)

5.2.2.1.2 축산물 중 구충제 동시 다성분 시험법

1) 시험법 적용범위

축산물에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출하고 황산마그네슘(MgSO4) 및 일차 이차 아민(Primary Secondary Amine, PSA)로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올 또는 DMSO (Dimethylsulfoxide)에 녹여 100 mg/L가 되게 하고 이를 영하 20℃에 보관한다. 사용 시 표준품을 실온에 두어 용액의 온도가 실온과 동일해지면 사용한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 DMSO로 희석하여 적당한 농도가 되게 하고, 냉장고에 보관한다.

마) 내부표준원액 : 셀라멕틴(Selamectin) 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 DMSO(Dimethylsulfoxide)에 녹여 100 mg/L가 되게 하고 이를 영하 20℃에 보관한다. 사용 시 표준품을 실온에 두어 용액의 온도가 실온과 동일해지면 사용한다.

바) 내부표준용액 : 내부표준원액을 DMSO로 희석하여 적당한 농도가 되게 하고, 냉장고에 보관한다.

사) 맥바인(Macllvaine) 완충용액 (pH 2) : 0.1 M 구연산(Citric acid, anhydrous) 500 mL에 0.2 M 인산나트륨(Disodium hrdrogen phosphate) 45 mL 첨가하여 pH 2를 맞춘다.

아) 20 mM 개미산 수용액 : 100 mL 용량플라스크에 개미산 0.125 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

자) 0.1% 개미산(Formic acid) 수용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

차) 0.2% 개미산을 함유한 메탄올 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 1 mL을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

카) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 조직(간, 신장), 유

균질화된 검체 2 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 내부표준용액 20 μL를 첨가한다. 15초간 혼합한 후 염화나트륨 1 g을 넣은 후 균질화하고 물 2 mL를 넣고 1분간 균질화한다. 1% 초산을 포함한 아세토니트릴 10 mL를 넣고 15분간 강하게 균질화한 후 4,500 G에서 10분간 원심분리한다. 상층액을 취하여 MgSO4 900 mg, PSA 150 mg을 포함한 15 mL 원심분리관에 옮긴 후 30초간 강하게 균질화하고, 4,500 G에서 10분간 원심분리한 후 상층액을 유리튜브에 옮긴다. 50℃, 질소가스 감압농축한 후 DMSO 500 μL로 녹이고 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 조직(근육), 알

균질화된 검체 2 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 내부표준용액 20 μL를 첨가한다. 15초간 혼합한 후 염화나트륨 1 g을 넣어 균질화하고 맥바인 완충용액 2 mL를 넣고 1분간 균질화한다. 아세토니트릴:메탄올(9:1) 혼합용액 10 mL를 넣고 15분간 강하게 균질한 후 4,500 G에서 10분간 원심분리한다. 상층액을 취하여 MgSO4 900 mg, PSA 150 mg을 포함한 15 mL 원심분리관에 옮긴 후 30초간 강하게 균질화하고, 4,500 G에서 10분간 원심분리한 후 상층액을 유리튜브에 옮긴다. 50℃, 질소가스 감압농축한 후 DMSO 500 μL로 녹이고 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18 (2.1 × 100 mm, 1.8 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산과 20 mM 개미산암모늄을 함유한 물

(나) 이동상 B : 0.2% 개미산을 함유한 메탄올

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0.0	90	10
0.1	90	10
2.0	5	95
9.0	5	95
10.0	90	10
15.0	90	10

(3) 유속 : 0.25 mL/분

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive, negative)

(2) Capillary Temperature : 350℃

(3) Collision gas : Ar(아르곤)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

연번	물질명 (Compound)	이온화 (Ionization mode)	머무름 시간 (분)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy, eV)
1	니클로사미드 (Niclosamide)	negative	5.94	325	289	15
					171	26
2	니트록시닐 (Nitroxynil)	negative	4.27	289	127	25
					162	10
3	도라멕틴 (Doramectin)	positive	7.62	922	778	45
					449	45
4	라폭사니드 (Rafoxanide)	negative	8.60	624	127	35
					345	35
5	레바미졸 (Levamisole)	positive	1.70	205	178	20
					123	30
6	모란텔 (Morantel)	positive	3.92	221	164	25
					111	25
7	목시덱틴 (Moxidectin)	positive	7.68	662	467	40
					549	40
8	비치오놀 (Bithionol)	negative	6.13	355	163	20
					194	25
9	아바멕틴 (Abamectin)	positive	6.97	895.4	751	45
					449	45
10	에마멕틴 (Emamectin)	positive	5.53	886.4	158	35
					82	35
11	에프리노멕틴 (Eprinomectin)	positive	6.65	937	490	55
					368	55
12	이버멕틴 (Ivermectin)	positive	8.30	898	753	45
					609	45
13	옥시클로자니드 (Oxyclozanide)	negative	5.31	400	202	20
					364	15
14	클로르설론 (Clorsulon)	negative	3.94	378 380	342	3
					344	6
15	클로르플루아주론 (Chlorfluazuron)	negative	6.24	540	357	20
					177	40
16	클로산텔 (Closantel)	negative	6.90	661	127	50
					345	35
17	피란텔 (Pyrantel)	positive	3.68	207	150	30
					109	45
18	프라지콴텔 (Praziquantel)	positive	4.90	313	203	15
					174	35
19	플루아주론 (Fluazuron)	positive	5.86	506	158	20
					349	20
20	셀라멕틴* (Selamectin)	negative	8.35	770	333	15
					608	15

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

※ 셀라멕틴(Selamectin)은 아버멕틴계 구충제의 내부표준물질임

7) 정성시험

가) 위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다.

※ 주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

8) 정량시험

가) 정성시험에서 검출된 잔류동물용의약품은 식품공전 5.3의 정량시험법을 따른다.

나) 5.3 정량시험법에 해당물질의 시험법이 없을 경우, 정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

5.2.2.1.3 축산물 중 비스테로이드성 항염증제(NSAIDs) 동시 다성분 시험법

1) 시험법 적용범위

축산물에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 개미산 암모늄이 포함된 아세토니트릴과 물 혼합용액(4:1, v/v)으로 추출하고 C18을 이용한 분산고체상추출법으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 하고 이를 영하 20℃에 보관한다. 사용 시 표준품을 실온에 두어 용액의 온도가 실온과 동일해지면 사용한다.

라) 표준용액 : 각 표준원액을 물로 희석하여 적당한 농도가 되게 하고, 냉장고에 보관한다.

마) 200 mM 개미산 : 100 mL 용량플라스크에 개미산 1.25 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 개미산(Formic acid) 수용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 1 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

아) C18 충전제 : 입자크기 37∼55 μm, 공극크기 125 Å 또는 이와 동등한 것

자) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 2 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 200 mM 개미산암모늄 0.1 mL과 물 2 mL을 가하여 균질화한다. 아세토니트릴 8 mL을 가하고 15분간 강하게 진탕 혼합한 후 10,000 G에서 10분간 원심분리한다. 상층액을 취하여 C18 분말 500 mg을 분산시킨 후, 헥산 10 mL을 첨가하여 1분간 진탕 혼합한다. 10,000 G에서 5분간 원심분리 하고, 눈금이 표시된 시험관에 하층액 5 mL 취해 옮긴 후, 40℃에서 1 mL이 되도록 질소 농축한다. 농축액 1 mL 중 0.5 mL을 취하여 0.2 μm 필터(Polyvinylidenedifluoride, PVDF)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18 (2.1 × 50 mm, 1.7 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산 수용액

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0.00	90	10
0.20	90	10
2.50	5	95
3.50	5	95
3.51	90	10

(3) 유속 : 0.5 mL/분

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive, negative)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : Ar(아르곤)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

연번	물질명 (Compound)	이온화 (Ionization mode)	머무름 시간 (분)	선구 이온 (Precursor ion, m/z)	생성 이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision energy, eV)
1	디클로페낙 (Diclofenac)	negative	2.20	294.1	250.1	10
					214.2	20
2	멜록시캄 (Meloxicam)	negative	2.02	350.0	146.1	20
					286.1	15
3	아세틸 살리실산 (Acetyl salicylic acid)	negative	1.53	137.0	93.1	15
					65.2	30
4	카프로펜 (Carprofen)	negative	2.15	272.0	228.0	15
					226.0	30
5	케토프로펜 (Ketoprofen)	positive	2.00	255.0	209.1	15
					105.1	25
6	톨페남산 (Tolfenamic acid)	negative	2.36	260.0	216.1	15
					35.1	25
7	파라세타몰 (Paracetamol)	positive	0.56	152.0	110.1	20
					65.1	30
8	페닐부타존 (Phenylbutazone)	negative	2.27	307.1	131.1	25
					279.2	20
9	플루닉신 (Flunixin)	negative	2.05	295.0	251.1	15
					209.1	30

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30 % 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

Paracetamol 152.00>110.05 (+)

Acetylsalicylic acid 137.00>93.10 (-)

Ketoprofen 255.00>209.05 (+)

Oxyphenyl butazone 322.20>295.10 (-)

Meloxicam 350.00>146.10 (-)

Flunixin 295.00>251.10 (-)

Carprofen 272.00>228.00 (-)

Diclofenac 294.10>250.05 (-)

Phenylbutazone 307.10>131.05 (-)

Tolfenamic acid 260.00>216.10 (-)

그림 1. 비스테로이드성 항염증제의 크로마토그램(0.1 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정성시험에서 검출된 잔류동물용의약품은 식품공전 5.3의 정량시험법을 따른다.

나) 5.3 정량시험법에 해당물질의 시험법이 없을 경우, 음성검체를 정성시험과 똑같은 조건에서 조제한 시험용액에 혼합표준용액을 일정농도로 첨가하여 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

5.2.2.2 ～ 5.2.2.3 (현행과 같음)

5.3 정량시험법

5.3.1 --------------------- ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------하이그로마이신B(Hygromycin B), 파로모마이신(Paromomycin, aminosidine, monomycin)

5.3.2～5.3.35 (현행과 같음)

5.3.36 메벤다졸(Mebendazole), 알벤다졸(Albendazole), 옥스펜다졸(Oxfendazole), 옥시벤다졸(Oxibendazole), 트리클라벤다졸(Triclabendazole), 티아벤다졸(Thiabendazole), 페반텔(Febantel), 펜벤다졸(Fenbendazole), 플루벤다졸(Flubendazole)

1) 시험법 적용범위

축·수산물 등--------.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 분산고체상 추출법(Dispersive solid phase extraction)으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 각 표준품(주1) 참조)을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 디메틸설폭사이드(DMSO)로 표시선까지 채워 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 혼합표준용액 : 각 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 내부 표준물질 표준원액 : 옥시벤다졸-D7 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 DMSO로 표시선까지 채워 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 내부 표준물질 표준원액은 냉동 보관한다.

바) 내부 표준물질 용액 : 내부 표준물질 표준원액을 메탄올로 희석하여 1 mg/L가 되게 한다.

사) 맥바인(Macllvaine) 완충용액 (pH 2) : 0.1 M 구연산(Citric acid, anhydrous) 500 mL에 0.2 M 인산나트륨(Disodium hydrogen phosphate) 45 mL를 첨가하여 pH 2로 맞춘다.

아) 산화방지용액 : 250 mL 용량플라스크에 EDTA․4Na(Tetra sodium-ethylene diamine tetraacetate) 0.07 g, 아스코르빈산 9 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

자) 20 mM 개미산암모늄 용액 : 1 L 용량플라스크에 개미산암모늄(Ammonium formate) 1.26 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

차) 0.1% 개미산 용액 : 100 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 0.1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

카) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

주1. 벤지미다졸계 구충제 및 대

검사항목	분석대상물질
메벤다졸(Mebendazole)	메벤다졸(Mebendazole), 메벤다졸아민(Mebendazole-amine), 5-하이드록시 메벤다졸(5-Hydroxy Mebendazole)
알벤다졸(Albendazole)	알벤다졸(Albendazole), 알벤다졸 설폭사이드(Albendazole sulfoxide), 알벤다졸 설폰(Albendazole sulfone), 2-아미노알벤다졸설폰(2-Amino albendazole sulfone)
옥시벤다졸(Oxibendazole)	옥시벤다졸(Oxibendazole)
옥스펜다졸(Oxfendazole)/ 페반텔(Febantel)/ 펜벤다졸(Fenbendazole)	옥스펜다졸(Oxfendazole), 페반텔(Febantel), 펜벤다졸 (Fenbendazole),옥스펜다졸 설폰(Oxfendazole sulfone)
트리클라벤다졸 (Triclabendazole)	트리클라벤다졸(Triclabendazole), 케토트리클라벤다졸(Keto-triclabendazole)
티아벤다졸(Thiabendazole)	티아벤다졸(Thiabendazole), 5-하이드록시 티아벤다졸(5-Hydroxy thiabendazole)
플루벤다졸(Flubendazole)	플루벤다졸(Flubendazole), 2-아미노 플루벤다졸(2-Amino flubendazole)

사산물

5) 시험용액의 조제

가) 식육(근육), 연어 및 장어 이외 어류

균질화한 검체 4 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 산화방지용액 1 mL와 황산암모늄 2 g을 첨가하여 10분간 교반한다. 균질화한 검체에 1 mg/L 옥시벤다졸-D7(내부표준물질) 400 μL를 첨가한 후 60분간 평형화(Equilbration) 시킨다. 염화나트륨 0.3 g과 맥바인 완충용액 2 mL를 넣고 5분간 교반한다. ⓐ아세토니트릴 5 mL를 넣어 15분간 강하게 교반하고 -4℃에서 5,600 G 로 20분간 원심분리한 후 상층액을 취하여 산화방지용액 50 μL를 첨가한다. ⓑ잔사에 아세토니트릴 5 mL를 넣어 15분간 강하게 교반하고 -4℃에서 5,600 G 로 20분간 원심분리한 후 상층액을 취하여 산화방지용액 50 μL를 첨가한다. ⓐ와 ⓑ의 상층액을 합한 후 이산화망간 900 mg과 일차 이차 아민(Primary secondary amine, PSA) 150 mg을 포함한 15 mL 원심분리관에 옮겨 10분간 균질화한 후 상온에서 5,600 G로 15분간 원심분리한다. 상층액을 10 mL 둥근바닥플라스크에 옮겨 감압 농축한 후 메탄올 500 μL를 넣어 녹인다. 마이크로 원심분리기 튜브에 옮겨 상온에서 3,500 G로 5분간 원심분리한 후 상층액을 시험용액으로 한다.

나) 지방, 간, 신장, 유, 알, 연어, 장어

균질화한 검체 4 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 산화방지용액 1 mL와 황산암모늄 2 g을 첨가하여 10분간 교반한다. 균질화한 검체에 1 mg/L 옥시벤다졸-D7(내부표준물질) 400 μL를 첨가한 후 60분간 평형화(Equilibration) 시킨다. 유는 염화나트륨 1 g과 황산마그네슘 4 g을 첨가하고, 그 외는 염화나트륨 0.3 g을 첨가하여 5분간 교반한다. ⓐ0.1% 암모니아 함유 아세토니트릴 5 mL를 넣고 15분간 강하게 교반시킨 후 -4℃에서 5,600 G로 20분간 원심분리 후 상층액을 취하여 산화방지용액 50 μL를 첨가한다. ⓑ잔사에 0.1% 암모니아 함유 아세토니트릴 5 mL를 넣고 15분간 강하게 교반시킨 후 -4℃에서 5,600 G로 20분간 원심분리 후 상층액을 취하여 산화방지용액 50 μL를 첨가한다. ⓐ와 ⓑ의 상층액을 합한 후 모아진 상층액을 이산화망간 900 mg, 일차 이차 아민(Primary secondary amine, PSA) 150 mg과  C18 150 mg이 포함된 15 mL 원심분리관에 옮겨 10분간 균질화한 후 상온에서 5,600 G로 15분간 원심분리한다. 상층액을 둥근바닥플라스크에 옮겨 감압 농축한 후 메탄올 500 μL을 넣고 녹인 후, 마이크로 원심분리기 튜브에 옮겨 상온에서 3,500 G로 5분간 원심분리한 후 상층액을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건(1) 칼럼 : C18 컬럼 (Atlantis Ⓡ T3 , 2.1 mm × 100 mm, 3 μm)  또는 이와 동등한 것 (중간의 일차리간드 밀도(1.6 μmoles/m2)와 End-cap을 갖고 있어 넓은 pH 범위에서 우수한 성능을 제공하고 매우 극성인 화합물에 머무름을 주어 분리하는 실리카 기반의 역상 C18 칼럼, Trifunctional C18 bonded at an intermediate primary-ligand density, 1.6 μmoles/m2,  and having end-cap)

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 20 mM 개미산암모늄이 포함된 물

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산이 포함된 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0.0	83.0	17.0
0.1	83.0	17.0
7.0	55.0	45.0
12.0	55.0	45.0
14.0	5.0	95.0
18.5	5.0	95.0
21.0	83.0	17.0
23.0	83.0	17.0

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(케토트리클라벤다졸 : negative, 그 외 물질 : positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)1	충돌에너지 (Collision Energy, eV)
1	메벤다졸 (Mebendazole)	11.68	295.3	296	264	22
					105	38
					77	44
2	메벤다졸아민 (Mebendazole-amine)	8.02	237.3	238	133	42
					105	28
					77	42
3	5-하이드록시 메벤다졸 (5-Hydroxy Mebendazole)	9.46	297.3	298	266	22
					160	38
					79	46
4	알벤다졸 (Albendazole)	13.39	265.3	266	234	20
					191	38
					159	46
5	알벤다졸 설폭사이드 (Albendazole sulfoxide)	7.17	281.3	282	240	10
					208	24
					159	44
6	알벤다졸 설폰 (Albendazole sulfone)	9.04	297.3	298	266	20
					224	30
					159	42
7	2-아미노알벤다졸설폰 (2-Amino albendazole sulfone)	3.61	239.3	240	198	18
					133	34
					106	52
8	옥시벤다졸 (Oxibendazole)	11.10	249.3	250	218	18
					176	32
					148	42
9	옥스펜다졸 (Oxfendazole)	9.17	315.4	316	284	18
					191	22
					159	36
10	옥스펜다졸 설폰 (Oxfendazole sulfone)	10.77	331.4	332	300	24
					159	44
					77	42
11	페반텔 (Febantel)	17.30	446.4	447	415	10
					383	18
					280	36
12	펜벤다졸 (Fenbendazole)	15.70	299.4	300	268	22
					159	40
					131	54
13	트리클라벤다졸 (Triclabendazole)	17.72	359.7	361	346	30
					274	44
					199	50
14	케토트리클라벤다졸 (Keto-triclabendazole)	16.57	327.9	327	181	24
					146	35
					118	45
15	티아벤다졸 (Thiabendazole)	7.67	201.3	202	175	26
					131	38
					65	52
16	5-하이드록시 티아벤다졸 (5-Hydroxy thiabendazole)	3.55	217.2	218	191	28
					147	38
					108	38
17	플루벤다졸 (Flubendazole)	12.29	313.3	314	282	22
					123	40
					95	64
18	2-아미노 플루벤다졸 (2-Amino flubendazole)	8.71	255.3	256	133	46
					123	30
					95	48
19	옥시벤다졸-d7 (내부표준물질) (Oxibendazole d7)	11.00	256.3	257	225	16
					177	30
					149	42

(4) 분석대상물질의 개별 조건

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다((주2) 참조)

주2. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

메벤다졸	메벤다졸 아민
5-하이드록시 메벤다졸	알벤다졸
알벤다졸 설폭사이드	알벤다졸 설폰
2-아미노알벤다졸 설폰	옥시벤다졸
옥스펜다졸	옥스펜다졸 설폰
페반텔	펜벤다졸
트리클라벤다졸	케토트리클라벤다졸
티아벤다졸	5-하이드록시 티아벤다졸
플루벤다졸	2-아미노 플루벤다졸
옥시벤다졸-d7(내부표준물질)

그림 1. 메벤다졸(11.68분), 메벤다졸아민(8.02분), 5-하이드록시 메벤다졸(9.46), 알벤다졸(13.39), 알벤다졸 설폭사이드(7.17), 2-아미노알벤다졸설폰(3.61), 옥시벤다졸(11.10), 옥스펜다졸(9.17), 옥스펜다졸 설폰(10.77), 페반텔(17.30), 펜벤다졸(15.70), 트리클라벤다졸(16.57), 티아벤다졸 (7.67), 5-하이드록시 티아벤다졸(3.55), 플루벤다졸(12.29), 2-아미노 플루벤다졸(8.71), 옥시벤다졸-d7(11.00)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 매트릭스시료(Sample blank)에 혼합표준용액을 일정농도로 첨가하여 표준물질과 내부표준물질과의 피이크 면적(또는 높이)의 비로부터 표준물질 각각의 검량선을 작성하고 검량선에 의하여 시료를 정량한다. 시험용액의 크로마토그램으로부터 대상성분의 정량이온(Quantitative ion)과 내부표준물질의 정량이온과의 피이크 면적(또는 높이) 비에 따라 각각 정량한다.

✳ 페반텔(FB), 펜벤다졸(FBZ), 옥스펜다졸(OXF)은 옥스펜다졸 설폰(OXF-SO2)등가치로 환산하여 그 합을 구한다.

[eqn: C _{OFZ-SO _{2}} `=` LEFT ( C _{FBZ} TIMES {M _{OXF-SO _{2}}} over {M _{FBZ}} `+`C _{OXF} TIMES {M _{OXF-SO _{2}}} over {M _{OXF}}]

[eqn: +`C _{OXF-SO _{2}} TIMES {M _{OXF-SO _{2}}} over {M _{OXF-SO _{2}}} ` RIGHT )]

[eqn: =C _{FBZ} TIMES {331} over {299} +C _{OXF} TIMES {331} over {315} +C _{OXF-SO2} TIMES {331} over {331}# =C _{FBZ} TIMES 1.107+C _{OXF} TIMES 1.051+C _{OXF-SO2} TIMES 1`]

* C : 농도(mg/kg), M : 분자량

✳ 메벤다졸(MBZ)은 메벤다졸(MBZ), 메벤다졸 아민(MBZ-NH2,), 5-하이드록시 메벤다졸(5OH-MBZ)을 메벤다졸(MBZ) 등가치로 환산하여 그 합을 구한다.

[eqn: C _{MBZ} `=` LEFT ( C _{MBZ} TIMES {M _{MBZ}} over {M _{MBZ}} `+`C _{MBZ-NH _{2}} TIMES {M _{MBZ}} over {M _{MBZ-NH _{2}}}]

[eqn: `+`C _{5OH-MBZ} TIMES {M _{MBZ}} over {M _{5OH-MBZ}} RIGHT )]

[eqn: =C _{MBZ} TIMES {295} over {295} +C _{MBZ-NH _{2}} TIMES {295} over {237} +C _{5OH-MBZ} TIMES {295} over {297}# =C _{MBZ} TIMES 1+C _{MBZ-NH _{2}} TIMES 1.245+C _{5OH-MBZ} TIMES 0.993`]

* C : 농도(mg/kg), M : 분자량

나) 정량한계

물질	정량한계(mg/kg 또는 mg/L)
	축산물						수산물
	근육	지방	간	신장	유	알	넙치	연어
메벤다졸 (Mebendazole)	0.003	0.003	0.01	0.001	0.002	0.003	0.005	0.003
메벤다졸아민 (Mebendazole-amine)	0.003	0.001	0.003	0.0007	0.002	0.002	0.004	0.003
5-하이드록시 메벤다졸 (5-Hydroxy Mebendazole)	0.003	0.001	0.001	0.001	0.002	0.002	0.004	0.002
알벤다졸 (Albendazole)	0.03	0.004	0.3	0.4	0.003	0.004	0.01	0.009
알벤다졸 설폭사이드 (Albendazole sulfoxide)	0.004	0.004	0.2	0.1	0.003	0.001	0.004	0.002
알벤다졸 설폰 (Albendazole sulfone)	0.001	0.002	0.05	0.07	0.001	0.0008	0.004	0.002
2-아미노알벤다졸설폰 (2-Amino albendazole sulfone)	0.0009	0.0007	0.05	0.09	0.002	0.002	0.002	0.004
옥시벤다졸 (Oxibendazole)	0.01	0.05	0.03	0.008	0.003	0.002	0.02	0.1
옥스펜다졸 (Oxfendazole)	0.003	0.004	0.03	0.003	0.002	0.003	0.01	0.006
옥스펜다졸 설폰 (Oxfendazole sulfone)	0.004	0.002	0.001	0.002	0.003	0.003	0.004	0.002
페반텔 (Febantel)	0.004	0.002	0.01	0.004	0.003	0.002	0.005	0.005
펜벤다졸 (Fenbendazole)	0.004	0.006	0.03	0.006	0.001	0.001	0.008	0.007
트리클라벤다졸 (Triclabendazole)	0.03	0.02	0.08	0.08	0.0007	0.004	0.07	0.04
케토트리클라벤다졸 (Keto-triclabendazole)	0.03	0.01	0.04	0.03	0.002	0.004	0.09	0.03
티아벤다졸 (Thiabendazole)	0.01	0.01	0.01	0.03	0.02	0.001	0.008	0.03
5-하이드록시 티아벤다졸 (5-Hydroxy thiabendazole)	0.003	0.002	0.003	0.004	0.003	0.002	0.0007	0.002
플루벤다졸 (Flubendazole)	0.004	0.002	0.0009	0.003	0.004	0.05	0.004	0.003
2-아미노 플루벤다졸 (2-Amino flubendazole)	0.001	0.002	0.002	0.002	0.003	0.002	0.003	0.003

<삭    제>

5.3.37 ～ 5.3.45 (현행과 같음)

5.3.46 독시싸이클린(Doxycycline), 미노싸이클린(Minocycline), 옥시테트라싸이클린(Oxytetracycline), 클로르테트라싸이클린(Chlortetracycline),  테트라싸이클린(Tetracycline)

5.3.46.1 제1법

1) (현행과 같음)

2) 분석원리

검체 중의 분석대상물질을 EDTA와 옥살산을 첨가한 아세토니트릴과 아세트산에틸 혼합액으로 추출한 후 헥산으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 각 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 혼합표준용액 : 각 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 0.1% 개미산(Formic acid) : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 개미산(Formic acid)을 함유한 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 1 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 옥살산과 EDTA를 각각 0.2 g을 가하여 10분간 진탕한다. 여기에 아세토니트릴과 아세트산에틸 (2:1, v/v) 혼합액을 20 mL을 넣어 15분간 진탕 혼합하고, 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심 분리한 후 상층액을 50 mL 원심분리관에 취한다. 상층액에 헥산 20 mL을 넣어 5분간 진탕하고 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심 분리한 후 하층액만 15 mL 원심분리관에 취하여 40℃에서 질소농축 한다. 0.1% 포름산을 함유한 아세토니트릴 1 mL을 가한 뒤 재분산하여 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심분리 하여 상층액을 0.45 μm 필터( Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：Xbridge C18 (2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 포름산을 함유한 물

(나) 이동상 B : 0.1% 포름산을 함유한 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
6	70	30
10	70	30
11	95	5
17	95	5

(3) 유속 : 0.3 mL/분

(4) 칼럼온도 : 30℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI (Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량	선구 이온 (Precusor ion, m/z)	생성 이온 (Fragment ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision Energy, eV)
1	독시싸이클린 (Doxycycline)	9.72	444.43	445	428	23
					153	41
					201	51
2	미노싸이클린 (Minocycline)	6.33	457.47	458	441	27
					283	55
					131	103
3	옥시테트라싸이클린 (Oxytetracycline)	7.11	460.43	461	426	23
					443	19
					201	43
4	클로르테트라싸이클린 (Chlortetracycline)	9.23	478.88	479	444	25
					154	35
					462	23
5	테트라싸이클린 (Tetracycline)	7.58	444.43	445	410	23
					427	19
					226	73

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	± 20%
> 20%, ≤ 50%	± 25%
> 10%, ≤ 20%	± 30%

나) 표준품 크로마토그램

독시싸이클린(Doxycycline)

미노싸이클린(Minocycline)

옥시테트라싸이클린(Oxytetracycline)

클로르테트라사이클린(Chlortetracycline)

테트라사이클린(Tetracycline)

그림 1. 독시싸이클린(9.72분, 0.02 mg/kg), 미노싸이클린(6.33분, 0.02 mg/kg), 옥시테트라싸이클린(7.11분, 0.01 mg/kg), 클로르테트라싸이클린(9.23분, 0.01 mg/kg), 테트라싸이클린(7.58분, 0.01 mg/kg) 표준품의 크로마토그램

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

독시싸이클린(Doxycycline) : 0.01 mg/kg

미노싸이클린(Minocycline) : 0.01 mg/kg

옥시테트라싸이클린(Oxytetracycline) : 0.005 mg/kg

클로르테트라싸이클린(Chlortetracycline) : 0.005 mg/kg

테트라싸이클린(Tetracycline): 0.005 mg/kg

5.3.46.2 제2법

1) 시험법 적용범위

--------------(단, 미노싸이클린은 제외한다.)

2) ～ 8) (현행과 같음)

5.3.47～5.3.72 (현행과 같음)

<삭    제>

5.3.73 ～ 5.3.91 (현행과 같음)

<삭    제>

5.3.92 ～ 5.3.108 (현행과 같음)

5.3.109 날록손(Naloxone), 알트레노제스트(Altrenogest), 요힘빈(Yohimbine), 치오펜네이트(Thiophanate)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 삼불화초산이 함유된 아세토니트릴과 황산마그네슘, 염화나트륨, 시트르산나트륨, 시트르산수소나트륨으로 추출하고 C18과 황산마그네슘을 이용한 분산고체상추출법(Dispersive solid phase extraction)으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 각 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 혼합표준용액 : 각 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 0.1% 삼불화초산(Trifluoroacetic acid, TFA)이 함유된 아세토니트릴 : 1000 mL 용량플라스크에 삼불화초산(TFA) 1 mL를 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

바) 0.2% 개미산(Formic acid) : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 2 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 물 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

아) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 메탄올 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

자) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 0.1% 삼불화초산이 함유된 아세토니트릴 20 mL를 가한 후 5분간 진탕한다. 염화나트륨 1 g, 황산마그네슘 4 g, 시트르산나트륨 1 g, 시트르산수소나트륨 0.5 g을 넣어 5분간 진탕한 후, 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심 분리하고 상층액을 취하여 50℃에서 10 mL가 되도록 질소 농축한다. 여기에 C18 150 mg과 황산마그네슘 900 mg을 넣어 5분간 진탕한 후 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심 분리한다. 상층액을 취하여 50℃에서 질소농축한 후 이동상A 0.5 mL와 이동상B 0.5 mL에 녹여 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심 분리한 후, 0.45 μm 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE) 로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：Xbridge C18 (2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.2% 개미산 : 10 mM 개미산암모늄을 함유한 물(1:1, v/v)

(나) 이동상 B : 0.2% 개미산 : 10 mM 개미산암모늄을 함유한 메탄올(1:1, v/v)

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	100	0
5	100	0
10	0	100
25	0	100
26	100	0
35	100	0

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 30℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량	선구 이온 (Precusor ion, m/z)	생성 이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision Energy, eV)
1	날록손 (naloxone)	12.92	327.37	328	310	23
					212	57
					128	101
2	알트레노제스트 (altrenogest)	15.74	310.42	311	227	37
					115	105
					165	75
3	요힘빈 (Yohimbine)	14.11	354.44	355	144	45
					115	105
					212	35
4	치오펜네이트 (Thiophanate)	15.04	370.48	371	151	33
					93	97
					118	97

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다 ※주1 참조

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

날록손(Naloxone)

알트레노제스트(Altrenogest)

요힘빈(Yohimbine)

치오펜네이트(Thiophanate)

그림 1. 날록손(12.92분, 0.1 mg/kg), 알트레노제스트(15.74분, 0.1 mg/kg), 요힘빈(14.11분, 0.1 mg/kg), 치오펜네이트(15.04분, 0.1 mg/kg) 표준품의 크로마토그램

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 면적(또는 높이)의 비로부터 표준물질의 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 정량이온과의 피크 면적(또는 높이) 비에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

날록손(Naloxone) : 0.005 mg/kg

알트레노제스트(Altrenogest) : 0.0002 mg/kg

요힘빈(Yohimbine) : 0.0005 mg/kg

치오펜네이트(Thiophanate) : 0.002 mg/kg

5.3.110 비치오놀(Bithionol)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 분석대상물질을 개미산이 함유된 아세토니트릴과 황산마그네슘, 염화나트륨, 시트르산나트륨, 시트르산수소나트륨으로 추출하고 C18과 황산마그네슘으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 아세토니트릴에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 0.1% 개미산 (Formic acid) : 1000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 0.1% 개미산이 함유된 아세토니트릴 20 mL을 가한 후 5분간 진탕한다. 여기에 염화나트륨 1 g, 황산마그네슘 4 g, 시트르산나트륨 1 g, 시트르산수소나트륨 0.5 g을 넣어 5분간 진탕한 후, 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심 분리하고 상층액을 취하여 50℃에서 10 mL가 되도록 질소 농축한다. 여기에 C18 150 mg과 황산마그네슘 900 mg을 넣어 5분간 진탕한 후 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심 분리한다. 상층액을 취하여 50℃에서 질소농축한 후 이동상A 0.5 mL와 이동상B 0.5 mL에 녹여 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심 분리한 후, 0.45 μm 필터(PTFE, Polytetrafluoroethylene)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：Xbridge C18 (2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산을 함유한 물

(나) 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	90	10
3	90	10
5	5	95
18	5	95
18.1	90	10
25	90	10

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 25℃

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Negative)

(2) Gas temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질의 충돌 에너지

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량	선구이온 (Precusor ion, m/z)	생성 이온 (product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision Energy, eV)
1	비치오놀 (Bithionol)	11.93	353.88	355	161	-34
					163	-36
					194	-38

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

그림. 비치오놀(11.9분) 표준품의 크로마토그램 (0.001 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

비치오놀(Bithionol) : 0.00025 mg/kg

5.3.111 폴리믹신 비(Polymyxin B)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 삼염화초산이 함유된 아세토니트릴과 삼불화초산으로 추출하여 Plexa 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 0.1% 개미산 수용액으로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) Plexa 카트리지 : N-vinylpyrrolidine과 Divinylbenzene이 Copolymer의 형태로 결합된 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(6 cc, 200 mg) 또는 이와 동등한 것

바) 0.1% 개미산(Formic acid) : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 0.1% 개미산(Formic acid)을 함유한 메탄올 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 1 mL을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

아) 10% 삼염화초산(Trichloroacetic acid)이 함유된 아세토니트릴 : 100 mL 용량플라스크에 삼염화초산 10 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

자) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 10% 삼염화초산이 함유된 아세토니트릴 3 mL을 가한 후 5분간 진탕한다. 0.5% 삼불화초산 용액 12 mL을 가하고 5분간 진탕한다. 4℃, 2,600 G에서 20분간 원심분리하고 상층액을 50 mL 원심 분리관에 옮긴 후, 40℃에서 질소 농축하여 12 mL 이하가 되도록 한다. 이를 1분간 진탕한 후, 4℃, 15,000 G에서 20분간 원심분리 한다. 미리 메탄올 5 mL과 물 5 mL로 Plexa 카트리지를 활성화시킨 후 추출액을 흡착시키고 2% 메탄올 수용액 5 mL로 2회 세척한다. 새로운 원심 분리관에 2% 개미산 함유 아세토니트릴 : 메탄올(1:1, v/v) 혼합용액 10 mL로 용출한 후, 40℃ 이하의 수욕 중에서 질소농축 한다. 잔류물은 0.1% 개미산 용액 1 mL로 재분산하여 1분간 진탕한 후 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심분리하고 0.2 μm 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE,)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：XBridge C18 (2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산을 함유한 물

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
4	95	5
8	30	70
16	30	70
20	95	5
25	95	5

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 20℃

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량	선구 이온 (Precusor ion, m/z)	생성 이온 (product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision Energy, eV)
폴리믹신 B (Polymyxin B)	11.48	1301.56	402	396	19
				241	21
				202	23

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 ± 20～30% 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 폴리믹신 비(11.48분) 표준품의 크로마토그램(0.02 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

폴리믹신 비(Polymyxin B) : 0.01 mg/kg

5.3.112 페노뷰카브(Fenobucarb)

1) 시험법 적용범위

축‧수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 분석대상물질을 삼불화초산이 함유된 아세토니트릴과 황산마그네슘, 염화나트륨, 시트르산나트륨, 시트르산수소나트륨으로 추출하고 C18과 황산마그네슘을 이용하여 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 0.1% 삼불화초산(Trifluroacetic acid, TFA)이 함유된 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 삼불화초산 1 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

바) 0.2% 개미산(Formic acid) : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 2 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 물 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

아) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 메탄올 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

자) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 0.1% 삼불화초산이 함유된 아세토니트릴 20 mL을 가한 후 5분간 진탕한다. 염화나트륨 1 g, 황산마그네슘 4 g, 시트르산나트륨 1 g, 시트르산수소나트륨 0.5 g을 넣어 5분간 진탕한 후, 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심 분리하고 상층액을 취하여 50℃에서 10 mL이 되도록 질소 농축한다. 여기에 C18 150 mg과 황산마그네슘 900 mg을 넣어 5분간 진탕한 후 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심 분리한다. 상층액을 취하여 50℃에서 질소농축한 후 이동상A 0.5 mL와 이동상B 0.5 mL에 녹여 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심 분리한 후, 0.45 μm 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18 (2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.2% 개미산 : 10 mM 개미산암모늄을 함유한 물(1:1, v/v)

(나) 이동상 B : 0.2% 개미산 : 10 mM 개미산암모늄을 함유한 메탄올(1:1, v/v)

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
1	95	5
2	5	95
10	5	95
11	95	5
15	95	5

(3) 유속 : 0.3 mL/분

(4) 칼럼온도 : 30℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량	선구 이온 (Precusor ion, m/z)	생성 이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision Energy, eV)
페노부카브 (Fenobucarb)	6.73	207.27	208	95	17
				152	11
				77	51

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 페노뷰카브(6.73분) 표준품의 크로마토그램 (0.01 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

페노뷰카브(Fenobucarb) : 0.002 mg/kg

5.3.113 페노티아진(Phenothiazine)

1) 시험법 적용범위

축산물(식육) 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 분석대상물질을 개미산과 개미산암모늄이 함유된 아세토니트릴로 추출하여 헥산으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 0.2% 개미산이 함유된 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 2 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

바) 개미산암모늄과 0.2% 개미산이 함유된 아세토니트릴 혼합용액 :  1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 20 mL 증류수에 녹인 후 0.2% 개미산이 함유된 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

사) 0.2% 개미산(Formic acid) : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 2 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

아) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 물 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

자) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 개미산암모늄과 0.2% 개미산이 함유된 아세토니트릴 혼합용액(바) 20 mL 가한 뒤 5분간 진탕한다. 이를 2,600 G에서 15분간 원심 분리한 후 상층액을 취한 뒤 헥산 20 mL을 첨가하여 5분간 진탕한다. 2,600 G에서 15분간 원심 분리한다. 상층액을 취하여 50℃에서 질소농축한 후 아세토니트릴 3 mL로 재분산하여 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심 분리하여 0.45 μm 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18 (2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.2% 개미산 : 10 mM 개미산암모늄을 함유한 물(1:1, v/v)

(나) 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
5	70	30
15	70	30
20	95	5
25	95	5

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 35℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량	선구 이온 (Precusor ion, m/z)	생성 이온 (product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision Energy, eV)
페노티아진 (Phenothiazine)	13.00	199.27	199	167	33
				166	39
				139	53

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 페노티아진(13.0분) 표준품의 크로마토그램(0.04 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

페노티아진(Phenothiazine) : 0.001 mg/kg

5.3.114 푸마길린(Fumagillin)

1) 시험법 적용범위

꿀, 어류 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 물 또는 개미산이 함유된 아세토니트릴로 추출하고 Strata-X 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) Strata-X 카트리지 : 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(6 cc, 200 mg) 또는 이와 동등한 것

바) 0.1% 개미산(Formic acid) : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 0.1% 개미산(Formic acid)을 함유한 메탄올 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 1 mL을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

아) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 물 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

자) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 메탄올 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

차) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 꿀

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 증류수를 10 mL 가하여 10분간 진탕한 후 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심분리한다. 미리 메탄올 5 mL과 물 5 mL로 Strata-X 카트리지를 활성화시킨 후 추출액을 흡착시키고 40% 메탄올 수용액 5 mL로 2회 세척한다. 새로운 원심 분리관에 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴 6 mL로 용출한 후, 40℃ 이하의 수욕 중에서 질소농축 한다. 잔류물을 0.1% 개미산과 10 mM 개미산암모늄을 함유한 메탄올로 재분산하여 1분간 진탕한 후 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심분리하고 0.2 μm 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

나) 어류

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴을 20 mL 가한 후 5분간 진탕한다. 여기에 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심분리한 후 상층액을 취하여 40℃ 이하의 수욕 중에서 질소농축 하여 0.5 mL이 되게 하고 증류수 5 mL로 재분산한다. 미리 메탄올 5 mL과 물 5 mL로 Strata-X 카트리지를 활성화시킨 후 추출액을 흡착시키고 40% 메탄올 수용액 5 mL로 세척한다. 새로운 원심 분리관에 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴 10 mL로 용출한 후, 40℃ 이하의 수욕 중에서 질소농축 한다. 잔류물을 0.1% 개미산과 10 mM 개미산암모늄을 함유한 메탄올로 재분산하여 1분간 진탕한 후 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심분리하고 0.2 μm 필터( Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：Phenomenex Luna C18 (2.0 × 100 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산 : 10mM 개미산암모늄을 함유한 물(1:1, v/v)

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산 : 10mM 개미산암모늄을 함유한 메탄올(1:1, v/v)

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
5	95	5
10	5	95
20	5	95
25	95	5
30	95	5

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 35℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량	선구 이온 (Precusor ion, m/z)	생성 이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision Energy, eV)
푸마길린 (Fumagillin)	16.62	458.54	459	131	41
				177	21
				103	83

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 푸마길린(16.62분)표준품의 크로마토그램(0.02 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

푸마길린(Fumagillin) : 0.01 mg/kg

5.3.115 니스타틴(Nystatin), 메토미데이트(Metomidate), 부파바쿠온(Buparvaquone), 아르사닐산(p-Arsanilic acid)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 분석대상물질을 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기 (LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 :

(1) 니스타틴 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 DMSO (Dimethylsulfoxide)에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

(2) 부파바쿠온, 메토미데이트, 아르사닐산 각 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 혼합표준용액 : 각 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 아세토니트릴 :  1,000 mL 용량플라스크에 0.63 g의 개미산암모늄을 넣고 20 mL의 물로 잘 녹인 뒤 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 개미산(Formic acid)을 함유한 물 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

아) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 10 mM 개미산암모늄이 함유된 아세토니트릴 20 mL을 가하여 15분간 진탕 혼합한 후 4℃, 2,600  G에서 15분간 원심분리한다. 상층액을 50 mL 원심분리관에 취하고 20 mL 헥산을 넣어 10분간 진탕한 후 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심분리한다. 상층액을 15 mL 원심분리관에 취하고 40℃에서 0.5 mL이 될 때까지 질소농축한다. 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴 0.5 mL을 가한 뒤 재분산하고 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심분리하여 상층액을 0.45 μm 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : Phenomenex Luna (2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산을 함유한 물

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	100	0
5	100	0
7	5	95
17	5	95
20	100	0
25	100	0

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량	선구 이온 (Precursor ion, m/z)	생성 이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision energy, eV)
1	니스타틴 (Nystatin)	11.28	926.09	926.580	297.0	39
					691.3	33
					673.3	33
2	메토미데이트 (Metomidate)	11.72	230.26	231.151	127.1	13
					95.1	29
					105.1	27
3	부파바쿠온 (Buparvaquone)	16.87	326.43	327.225	189.0	29
					115.1	67
					57.1	53
4	아르사닐산 (p-Arsanilic acid)	11.74	217.05	217.236	155.1	19
					111.0	21
					173.0	15

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

니스타틴 (Nystatin)

메토미데이트 (Metomidate)

부파바쿠온 (Buparvaquone)

아르사닐산(p-Arsanilic acid)

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 니스타틴(11.28분), 메토미데이트(11.72분), 부파바쿠온(16.87분), 아르사닐산(11.74분) 표준품의 크로마토그램 (0.01 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 면적(또는 높이)의 비로부터 표준물질의 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 정량이온과의 피크 면적(또는 높이) 비에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

니스타틴(Nystatin) : 0.005 mg/kg

메토미데이트(Metomidate) : 0.005 mg/kg

부파바쿠온(Buparvaquone) : 0.005 mg/kg

아르사닐산(p-Arsanilic acid) : 0.005 mg/kg

5.3.116 나이트록소린(Nitroxoline)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 분석대상물질을 10 mM 개미산암모늄이 함유된 아세토니트릴과 황산마그네슘, 염화나트륨, 시트르산나트륨, 시트르산수소나트륨으로 추출하고 C18과 황산마그네슘으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 0.1% 삼불화초산을 함유한 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 0.1% 삼불화초산을 함유한 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 0.1% 삼불화초산(Trifluroacetic acid, TFA)이 함유된 메탄올 : 1,000 mL 용량플라스크에 삼불화초산 1 mL을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 삼불화초산이 함유된 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 삼불화초산 1 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

사) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)이 함유된 아세토니트릴 :     1,000 mL 용량플라스크에 0.63 g의 개미산암모늄을 넣고 20 mL의 물로 잘 녹인 뒤 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

아) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 10 mM 개미산암모늄이 함유된 아세토니트릴 20 mL을 가하여 5분간 진탕 혼합한다. 여기에 염화나트륨 1 g, 황산마그네슘 4 g, 시트르산나트륨 1 g, 시트르산수소나트륨 0.5 g을 넣어 15분간 진탕한 후, 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심 분리한다.  새로운 원심분리관에 상층액을 취하고, C18 150 mg과 황산마그네슘 900 mg을 넣어 10분간 진탕한 후 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심 분리한다. 상층액을 15 mL 원심분리관에 취하여 40℃에서 0.5 mL이 될 때까지 질소농축한다. 0.1% 삼불화초산이 함유된 아세토니트릴 1.5 mL을 가한 뒤 재분산하고 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심 분리하여 0.45 μm 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : Phenomenex Luna C18 (2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 삼불화초산을 함유한 물

(나) 이동상 B : 0.1% 삼불화초산을 함유한 아세토니트릴(ACN)

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
3	95	5
6	5	95
13	5	95
15	95	5
20	95	5

(3) 유속 : 0.25 mL/분

(4) 칼럼온도 : 30℃

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량	선구 이온 (Precursor ion, m/z)	생성 이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision energy, eV)
나이트록소린 (Nitroxoline)	9.10	190.156	191.154	145.1	27
				127.0	43
				117.1	41

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다 ※주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 니트로소린 (9.10분) 표준품의 크로마토그램 (0.01 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

나이트록소린(Nitroxoline) : 0.005 mg/kg

5.3.117 데하이드로콜산(Dehydrocholic acid), 안트라닐산(Anthranilic acid)

1) 시험법 적용범위

축‧수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 분석대상물질을 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 각 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 혼합표준용액 : 각 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 0.63 g의 개미산암모늄을 넣고 20 mL의 물로 잘 녹인 뒤 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 개미산(Formic acid)을 함유한 물 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

아) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 10 mM 개미산암모늄이 함유된 아세토니트릴 20 mL을 가하여 15분간 진탕 혼합한 후, 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심 분리한다. 상층액을 50 mL 원심분리관에 취하고  20 mL 헥산을 넣어 10분간 진탕 혼합한 후 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심분리한다. 상층액을 15 mL 원심분리관에 취하고 40℃에서 0.5 mL이 될 때까지 질소농축한다. 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴 1.5 mL을 가한 뒤 재분산하고 4℃, 15,000G에서 10분간 원심분리 하여 상층액을 0.45 μm 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：Phenomenex Luna (2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산을 함유한 물

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	100	0
3	100	0
5	5	95
15	5	95
17	100	0
20	100	0

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 30℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Negative)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량	선구 이온 (Precursor ion, m/z)	생성 이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision energy, eV)
1	데하이드로콜산 (Dehydrocholic acid)	10.19	402.52	401.155	249.3	-44
					331.3	-24
					215.3	-46
2	안트라닐산 (Anthranilic acid)	9.70	137.14	135.887	92.1	-20
					65.1	-44
					90.0	-50

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

데하이드로콜산(Dehydrocholic acid)

안트라닐산(Anthranilic acid)

그림 1. 데하이드로콜산(10.19분), 안트라닐산(9.70분) 표준품의 크로마토그램(0.01 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

데하이드로콜산(Dehydrocholic acid) : 0.005 mg/kg

안트라닐산(Anthranilic acid) : 0.005 mg/kg

5.3.118 메텐아민(Methenamine)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 분석대상물질을 10 mM 개미산암모늄이 함유된 아세토니트릴로 추출한 뒤 헥산과 황산마그네슘, 일차 이차 아민(Primary secondary amine, PSA)으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다..

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 물 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 0.63 g의 개미산암모늄을 넣고 20 mL의 물로 잘 녹인 뒤 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 10 mM 개미산암모늄을 함유한 아세토니트릴 20 mL을 가하여 15분간 진탕 혼합한 후 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심 분리한다. 상층액을 50 mL 원심분리관에 취하여 20 mL 헥산을 넣어 10분간 진탕 혼합하고 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심분리한다. 상층액을 15 mL 원심분리관에 취하고 황산마그네슘 900 mg과 PSA 50 mg을 넣고 5분간 진탕 혼합한 뒤 2,600 G에서 15분간 원심 분리한다. 상층액을 취하여 40℃에서 0.5 mL가 될 때까지 질소농축한 후 아세토니트릴 1.5 mL을 가한 뒤 재분산한다. 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심분리 한 후 상층액을 0.45 μm 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：XBridge HILIC (2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 10 mM 개미산암모늄을 함유한 물

(나) 이동상 B : 아세토니트릴(ACN)

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	25	75
10	25	75

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 35℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량	선구 이온 (Precursor ion, m/z)	생성 이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision energy, eV)
메텐아민 (Methenamine)	3.74	140.19	141.176	112.0	17
				42.1	37
				85.1	21

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 메텐아민(3.74분) 표준품의 크로마토그램 (0.01 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

메텐아민(Methenamine) : 0.002 mg/kg

5.3.119 토노포스판(Tonophosphan)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 분석대상물질을 10 mM 개미산암모늄을 함유한 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 물 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 0.63 g의 개미산암모늄을 넣고 20 mL의 물로 잘 녹인 뒤 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 10 mM 개미산암모늄을 함유한 아세토니트릴 20 mL을 가하여 15분간 진탕 혼합한 후 2,600 G에서 15분간 원심분리한다. 상층액을 취하여 헥산 20 mL을 가하고 10분간 진탕한 후 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심분리한다. 상층액을 취하여 40℃에서 0.5 mL이 될 때까지 질소농축한 후 아세토니트릴 1.5 mL을 가하여 재분산하고 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심 분리한 후, 0.45 μm 멤브레인 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：Phenomenex Luna C18 (2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 10 mM 개미산암모늄을 함유한 물

(나) 이동상 B : 아세토니트릴(ACN)

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
3	5	95
7	5	95
8	95	5
20	95	5

(3) 유속 : 0.3 mL/분

(4) 칼럼온도 : 35℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성 이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision energy, eV)
토노포스판 (Tonophosphan)	4.76	220.16	200.190	136.2	19
				134.0	39
				121.2	29

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 토노포스판(4.76분) 표준품의 크로마토그램 (0.01 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

토노포스판(Tonophosphan) : 0.005 mg/kg

5.3.120 세파드록실(Cefadroxil)

1) 시험법 적용범위

수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 물과 아세토니트릴을 가하여 초음파로 추출하고 헥산으로 지방을 제거하여 MCX 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 물에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 0.1% 개미산으로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) MCX 카트리지(3cc, 60 mg) 또는 이와 동등한 것

바) 2% 개미산(Formic acid) : 100 mL 용량플라스크에 개미산 2 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 5% 수산화암모늄을 함유한 메탄올 : 100 mL 용량플라스크에 수산화암모늄 5 mL을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

아) 0.1% 개미산을 함유한 물 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

자) 기타시약 : 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취한다. 여기에 ⓐ(증류수 1 mL과 아세토니트릴 4 mL을 가하고 흔들어 섞은 후 10분간 초음파 추출한 뒤 9,000 G에서 10분간 원심분리하여 상층액을 취한다). 다시한번 ⓑ(잔류물에 증류수 1 mL과 아세토니트릴 4 mL을 가하고 흔들어 섞은 후 10분간 초음파 추출한 뒤 9,000 G에서 10분간 원심분리 한다). ⓐ와 ⓑ의 상층액을 합한 후 헥산 10 mL을 10분간 진탕 혼합 한다. 하층액을 40℃에서 농축한 후 0.1% 개미산을 함유한 물 2 mL로 재용해한 것을 추출액으로 한다. 미리 메탄올 2 mL과 증류수 1 mL로 활성화시킨 MCX 카트리지에 추출액을 흡착시키고 2% 개미산 2 mL과 메탄올 2 mL로 세척한 후, 5% 수산화암모늄을 함유한 메탄올 2 mL로 용출시킨다. 용출액은 40℃에서 질소농축한 후 0.1% 개미산을 함유한 물 2 mL에 녹인 후 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : C18(2.1 ｘ 150 mm, 3 µm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 :

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산을 함유한 물

(나) 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	100	0
7	85	15
15	80	20
20	100	0
25	100	0

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 35℃

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량	선구 이온 (Precursor ion, m/z)	생성 이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision energy, eV)
세파드록실 (Cefadroxil)	9.21	363.39	364	114	22
				208	15

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 세파드록실(9.21분)표준품의 크로마토그램(1 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

세파드록실(Cefadroxil) : 0.005 mg/kg

5.3.121 수산화브롬글루타민 마그네슘염(L-Glutamic acid magnesium salt hydrobromide), 아미노메탄설폰산(Aminomethanesulfonic acid)

1) 시험법 적용범위

축‧수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 분석대상물질을 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)이 함유한 아세토니트릴로 추출하고 원심분리 하여 얻어진 상층액을 헥산으로 정제하여 농축한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 각 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 증류수에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 혼합표준용액 : 각 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 0.63 g의 개미산암모늄을 넣고 20 mL의 물로 잘 녹인 뒤 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 개미산(Formic acid)을 함유한 물 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

아) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 10 mM 개미산암모늄이 함유된 아세토니트릴 20 mL을 가하여 15분간 진탕 혼합한 후, 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심 분리한다. 상층액을 50 mL 원심분리관에 취하고 20 mL 헥산을 넣어 10분간 진탕한 후 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심분리한다. 상층액을 15 mL 원심분리관에 취하고 40℃에서 0.5 mL이 될 때까지 질소농축한다. 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴 1.5 mL을 가한 뒤 재분산하고 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심분리하여  상층액을 0.45 μm 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：Xbridge HILIC C18 (2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산을 함유한 물

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	35	65
10	35	65

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 30℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Negative)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량	선구 이온 (Precusor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision energy, eV)
1	수산화브롬 글루타민 (L-Glutamic acid magnesium salt hydrobromide)	1.61	250.33	145.914	102.1	-16
					128.2	-16
					74.1	-24
2	아미노메탄 설폰산 (Aminomethane- sulfonic acid)	1.64	111.12	109.843	81.0	-16
					80.0	-28
					64.0	-56

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

수산화브롬글루타민 마그네슘염

(L-Glutamic acid magnesium salt hydrobromide)

아미노메탄설폰산 (Aminomethanesulfonic acid)

그림 1. 수산화브롬글루타민 마그네슘염(1.61분), 아미노메탄설폰산(1.64분) 표준품의 크로마토그램(0.01 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

수산화브롬글루타민 마그네슘염(L-Glutamic acid magnesium salt hydrobromide) : 0.005 mg/kg

아미노메탄설폰산(Aminomethanesulfonic acid) : 0.002 mg/kg

5.3.122 염산메틸에페드린(DL-Methylephedrine HCl), 플루메타손(Flumethasone), 하이드록시디메틸피리미딘(2-Hydroxy-4,6-dimethylpyrimidine)

1) 시험법 적용범위

축‧수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 분석대상물질을 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 각 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 혼합표준용액 : 각 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 10 mM 개미산암모늄을 함유한 물 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 10 mM 개미산암모늄을 함유한 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 20 mL의 물과 0.63 g의 개미산암모늄을 넣고 잘 녹인 뒤 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 10 mM 개미산암모늄을 함유한 아세토니트릴 20 mL을 가하여 15분간 진탕 혼합한 후, 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심 분리한다. 상징액을 50 mL 원심분리관에 취하고 여기에 20 mL 헥산을 넣어 10분간 진탕 혼합한 후 4℃, 2,600 G에서 15분간 원심분리한다. 상징액을 15 mL 원심분리관에 담아 40℃에서 0.5 mL이 될 때까지 질소농축한 후 아세토니트릴 1.5 mL을 가한 뒤 재분산하고 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심분리 하여 상징액을 0.45 μm 멤브레인 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：Xbridge HILIC(2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 10 mM 개미산암모늄을 함유한 물

(나) 이동상 B : 아세토니트릴(ACN)

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	25	75
10	25	75

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 30℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량	선구이온 (Precusor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision energy, eV)
1	염산메틸 에페드린 (DL-methylephedrine HCl)	1.98	215.72	179.881	162.1	15
					117.1	27
					91.1	43
2	플루메타손 (Flumethasone)	1.59	410.45	411.296	253.2	21
					121.2	37
					115.2	101
3	하이드록시 디메틸피리미딘 (2-Hydroxy-4,6-dimethylpyrimidine)	1.89	124.14	125.147	82.2	23
					42.2	43
					107.1	21

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30 % 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

염산메틸에페드린 (DL-Methylephedrine HCl)

플루메타손 (Flumethasone)

하이드록시디메틸피리미딘 (2-Hydroxy-4,6-dimethylpyrimidine)

그림 1. 염산메틸에페드린(1.98분), 플플루메타손(1.59분), 하이드록시디메틸피리미딘(1.89분) 표준품의 크로마토그램(0.01 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

염산메틸에페드린(DL-Methylephedrine HCl) : 0.005 mg/kg

플루메타손(Flumethasone) : 0.002 mg/kg

하이드록시디메틸피리미딘(2-Hydroxy-4,6-dimethylpyrimidine) : 0.002 mg/kg

8. 식품표시 관련 시험법

8.2 방사선 조사식품 확인시험

8.2.2 열발광법 (Thermoluminescence, TL)

1) 시험법 적용범위

가) (현행과 같음)

나) 후추, 육두구, 정향, 밤, 버섯(건조포함), 감자, 건조채소류(분말포함), 향신료조제품, 곡류(분말포함), 두류(분말포함), 어류분말, 패류분말, 갑각류분말, 된장분말, 고추장분말, 간장분말, 전분, 효모식품, 효소식품, 알로에분말, 인삼(홍삼 포함) 제품류, 복합조미식품, 클로렐라제품, 스피루리나제품, 조미건어포류, 특수의료용도등식품 분말차, 침출차, 소스류, 2종 이상이 혼합된 식품과 광물질(silicate minerals)이 분리가 가능한 식품에 적용한다.

[별표 4] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) (현행과 같음)

(2) 글루포시네이트(Glufosinate(ammonium))

(현행과 같음)

옥수수	0.05

마	0.05

양상추	0.05

생강	0.05

(3) ∼ (8) (현행과 같음)

(9) 델타메트린(Deltamethrin)

◎ 잔류물의 정의 : Deltamethrin(이성질체의 합)

(현행과 같음)

(10) ∼ (30) (현행과 같음)

(31) 마이클로뷰타닐(Myclobutanil)

(현행과 같음)

바나나	4.0†

(32) ∼ (44) (현행과 같음)

(45) 메티다티온(Methidathion)

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농산물	0.01

(46) ∼ (110) (현행과 같음)

(111) 카바릴(Carbaryl: NAC)

(현행과 같음)

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<삭    제>

<삭    제>

마늘	0.05

풋마늘	0.05

양파	0.05

(112) ∼ (130) (현행과 같음)

(131) 클로르피리포스(Chlorpyrifos)

(현행과 같음)

커피	0.05†

(132) (현행과 같음)

(133) 테부코나졸(Tebuconazole)

(현행과 같음)

체리	2.0

(134) ∼ (139) (현행과 같음)

(140) 트랄로메트린(Tralomethrin)

◎ 잔류물의 정의 : Deltamethrin(이성질체의 합)

(현행과 같음)

(141) ∼ (161) (현행과 같음)

(162) 페니트로티온(Fenitrothion: MEP)

(현행과 같음)

무(뿌리)	0.05

무(잎)	0.05

(163) ∼ (177) (현행과 같음)

(178) 폭심(Phoxim)

(현행과 같음)

배추	0.05

무(잎)	0.05

무(뿌리)	0.05

엇갈이배추	0.05

(179) ∼ (205) (현행과 같음)

(206) 클로르페나피르(Chlorfenapyr)

(현행과 같음)

엇갈이배추	3.0

(207) ∼ (217) (현행과 같음)

(218) 디메토모르프(Dimethomorph)

(현행과 같음)

양배추	0.05

(219) ∼ (227) (현행과 같음)

(228) 아족시스트로빈(Azoxystrobin)

(현행과 같음)

파슬리(향미나리)	20

(229) ∼ (232) (현행과 같음)

(233) 펜사이큐론(Pencycuron)

(현행과 같음)

양파	0.05

파	0.05

(234) 펜피록시메이트(Fenpyroximate)

(현행과 같음)

포도	2.0

감	0.05

복숭아	0.3

(235) ∼ (238) (현행과 같음)

(239) 플루아지남(Fluazinam)

(현행과 같음)

고추	3.0

배	1.0

피망	3.0

양배추	0.05

(240) ∼ (241) (현행과 같음)

(242) 루페뉴론(Lufenuron)

(현행과 같음)

엇갈이배추	1.0

(243) ∼ (285) (현행과 같음)

(286) 에트리디아졸(Etridiazole)

(현행과 같음)

딸기	0.05

(287) ∼ (308) (현행과 같음)

(309) 플루톨라닐(Flutolanil)

(현행과 같음)

오디	5.0

(310) ∼ (352) (현행과 같음)

(353) 메트코나졸(Metconazole)

(현행과 같음)

옥수수	0.02†

면실	0.25†

블루베리	0.4†

감자	0.02†

(354) ∼ (390) (현행과 같음)

(391) 만디프로파미드(Mandipropamid)

(현행과 같음)

딸기	0.1

상추	30

양상추	30

(392) ∼ (398) (현행과 같음)

(399) 사이플루메토펜(Cyflumetofen)

(현행과 같음)

감	0.2

(400) ∼ (407) (현행과 같음)

(408) 스피네토람(Spinetoram)

(현행과 같음)

생강	0.05

(409) ∼ (421) (현행과 같음)

(422) 펜티오피라드(Penthiopyrad)

(현행과 같음)

오디	2.0

(423) 피콕시스트로빈(Picoxystrobin)

(현행과 같음)

고추	1.0

피망	1.0

(424) 피리플루퀴나존(Pyrifluquinazon)

(현행과 같음)

무(뿌리)	0.05

무(잎)	2.0

배추	0.3

엇갈이배추	1.0

상추	1.0

양상추	1.0

가지	0.1

(425) (현행과 같음)

(426) 아메톡트라딘(Ametoctradin)

(현행과 같음)

감귤	2.0

시금치	30

양배추	0.05

(427) ∼ (434) (현행과 같음)

(435) 펜피라자민(Fenpyrazamine)

(현행과 같음)

부추	1.0

상추	15

양상추	15

파	5.0

(436) (현행과 같음)

(437) 플룩사피록사드(Fluxapyroxad)

(현행과 같음)

고추	1.0

피망	1.0

(438) (현행과 같음)

(439) 스피로테트라맷(Spirotetramat)

(현행과 같음)

딸기	3.0

(440) (현행과 같음)

(441) 피리벤카브(Pyribencarb)

(현행과 같음)

쌀	0.05

(442) 플루피라디퓨론(Flupyradifurone)

(현행과 같음)

배	0.3

(443) ∼ (449) (현행과 같음)

(450) 옥사티아피프롤린(Oxathiapiprolin)

◎ 잔류물의 정의 : Oxathiapiprolin

고추	0.7

피망	0.7

양파	0.05

오이	0.1

토마토	0.7

포도	1.0

(451) 인다지플람(Indaziflam)

◎ 잔류물의 정의 : Indaziflam

감귤	0.05

사과	0.05

(452) 아이속사플루톨(Isoxaflutole)

◎ 잔류물의 정의 : Isoxaflutole과 isoxaflutole diketonitrile의 합을 isoxaflutole로 함

대두	0.02†

[별표 5] 인삼의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (79) (현행과 같음)

(80) 델타메트린(Deltamethrin)

◎ 잔류물의 정의 : Deltamethrin (이성질체의 합)

수삼	0.05

건삼	0.05

(81) 펜피라자민(Fenpyrazamine)

◎ 잔류물의 정의 : Fenpyrazamine

수삼	0.5

건삼	1.0

[별표 6] (현행과 같음)

[별표 7] 식품 중 동물용의약품의 잔류허용기준

(1) ～ (4) (현행과 같음)

(5) 다노플록사신(Danofloxacin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Danofloxacin

(현행과 같음)

유	0.3

(16) 벤질페니실린(Benzylpenicillin, Penicillin G, Procaine benzilpenicillin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Benzylpenicillin

(현행과 같음)

(22) 아목시실린(Amoxicillin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Amoxicillin

(현행과 같음)

유	0.004

알	0.01

(23) 알벤다졸(Albendazole) : 구충제

◎ 잔류물의 정의 : Albendazole, albendazole sulphoxide, albendazole sulfone, 2-amino albendazole sulphone의 합을 albendazole로 함

(현행과 같음)

(24) (현행과 같음)

(25) 암피실린(Ampicillin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Ampicillin

(현행과 같음)

알	0.01

(26) ～ (36) (현행과 같음)

(37) 티아벤다졸(Thiabendazole) : 구충제

◎ 잔류물의 정의 : Thiabendazole, 5-hydroxy thiabendazole의 합을 thiabendazole로 함

(현행과 같음)

(38) ～ (40) (현행과 같음)

(41) 트리클라벤다졸(Triclabendazole) : 구충제

◎ 잔류물의 정의 : Triclabendazole, ketotriclabendazole의 합을 triclabedazole로 함

(현행과 같음)

(42) ～ (43) (현행과 같음)

(44) 페반텔/펜벤다졸/옥스펜다졸(Febantel/ Fenbendazole/Oxfendazole) : 구충제

◎ 잔류물의 정의 : Febantel, fenbendazole, oxfendazole, oxfendazole sulfone을 oxfendazole sulfone으로 환산한 값의 합

(현행과 같음)

(45) 플루벤다졸(Flubendazole) : 구충제

◎ 잔류물의 정의 : Flubendazole 2-aminoflubendazole 의 합을 flubendazole로 함

(현행과 같음)

(46) ～ (79) (현행과 같음)

(80) 나프실린(Nafcillin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Nafcillin

(현행과 같음)

유	0.03

(81) (현행과 같음)

(82) 디클록사실린(Dicloxacillin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Dicloxacillin

(현행과 같음)

유	0.03

(83) (현행과 같음)

(84) 마보플록사신(Marbofloxacin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Marbofloxacin

(현행과 같음)

유	0.075

(85) 세파세트릴(Cefacetrile) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Cefacetrile

(현행과 같음)

유	0.05

(86) 세파졸린(Cefazolin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Cefazolin

(현행과 같음)

유	0.05

(87) 세파피린(Cephapirin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Cephapirin과 des- acetylcephapirin의 합을 cephapirin으로 함

(현행과 같음)

유	0.03

(88) 세팔렉신(Cefalexin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Cefalexin

(현행과 같음)

유	0.1

(89) 세팔로니움(Cefalonium) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Cefalonium

(현행과 같음)

유	0.01

(90) 세포페라존(Cefoperazone) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Cefoperazone

(현행과 같음)

유	0.03

(91) 세푸록심(Cefuroxime) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Cefuroxime

(현행과 같음)

유	0.02

(92) 세프퀴놈(Cefquinome) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Cefquinome

(현행과 같음)

유	0.02

(93) 오비플록사신(Orbifloxacin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Orbifloxacin

(현행과 같음)

유	0.02

(94) 옥시벤다졸(Oxibendazole) : 구충제

◎ 잔류물의 정의 : Oxibendazole

(현행과 같음)

유	0.03

알	0.03

(95) (현행과 같음)

(96) 카나마이신(Kanamycin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Kanamycin

(현행과 같음)

유	0.1

알	0.5

(97) 클라불라닌산(Clavulanic acid) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Clavulanic acid

(현행과 같음)

유	0.2

(98) 클록사실린(Cloxacillin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Cloxacillin

(현행과 같음)

유	0.03

(99) 키타사마이신(Kitasamycin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Kitasamycin

(현행과 같음)

알	0.2

(100) ～ (113) (현행과 같음)

(114) 메벤다졸(Mebendazole) : 구충제

◎ 잔류물의 정의 : Mebendazole, mebendazole amine,  5-hydroxy mebendazole을 mebendazole로 환산한 값의 합을 mebendazole로 함

(현행과 같음)

(115) ～ (119) (현행과 같음)

(120) 설피린(Sulpyrine, Dipyrone, Metamizole) : 항염증제

◎ 잔류물의 정의 : 4-methylamino antipyrine(MAP)

(현행과 같음)

(121) ～ (147) (현행과 같음)

(148) 알트레노제스트(Altrenogest) : 기타

◎ 잔류물의 정의 : Altrenogest

돼지근육	0.0005

돼지간	0.003

돼지지방	0.002

(149) 날록손(Naloxone) : 기타

◎ 잔류물의 정의 : Naloxone

사슴근육	0.01

(150) 요힘빈(Yohimbine) : 기타

◎ 잔류물의 정의 : Yohimbine

사슴근육	0.01

(151) 치오펜네이트(Thiophanate) : 구충제

◎ 잔류물의 정의 : Thiophanate

돼지근육	0.01

(152) 비치오놀(Bithionol) : 구충제

◎ 잔류물의 정의 : Bithionol

소근육	0.01

말근육	0.01

양근육	0.01

염소근육	0.01

어류	0.01

(153) 폴리믹신 B(Polymyxin B) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Polymyxin B

소근육	0.01

돼지근육	0.01

말근육	0.01

(154) 페노뷰카브(Fenobucarb) : 살충제

◎ 잔류물의 정의 : Fenobucarb

소근육	0.01

말근육	0.01

양근육	0.01

돼지근육	0.01

닭근육	0.01

유	0.01

알	0.01

어류	0.01

(155) 페노티아진(Phenothiazine) : 진정제

◎ 잔류물의 정의 : Phenothiazine

소근육	0.01

말근육	0.01

양근육	0.01

돼지근육	0.01

(156) 푸마길린(Fumagillin) : 항원충제

◎ 잔류물의 정의 : Fumagillin

어류	0.01

(157) 미노싸이클린(Minocycline) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Minocycline

소근육	0.01

돼지근육	0.01

(158) 파로모마이신(Paromomycin, Aminosidine, Monomycin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Paromomycin

소근육	0.01

말근육	0.01

양근육	0.01

돼지근육	0.01

닭근육	0.01

유	0.01

(159) 니스타틴(Nystatin) : 항원충제

◎ 잔류물의 정의 : Nystatin

소근육	0.01

(160) 메토미데이트(Metomidate) : 진정제

◎ 잔류물의 정의 : Metomidate

돼지근육	0.01

(161) 부파바쿠온(Buparvaquone) : 항원충제

◎ 잔류물의 정의 : Buparvaquone

돼지근육	0.01

(162) 아르사닐산(Arsanilic acid) : 기타

◎ 잔류물의 정의 : Arsanilic acid

돼지근육	0.01

닭근육	0.01

오리근육	0.01

(163) 나이트록소린(Niroxoline) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Niroxoline

소근육	0.01

돼지근육	0.01

닭근육	0.01

양근육	0.01

(164) 데하이드로콜산(Dehydrocholic acid) : 기타

◎ 잔류물의 정의 : Dehydrocholic acid

어류	0.01

(165) 안트라닐산(Anthranilic acid) : 항염증제

◎ 잔류물의 정의 : Anthranilic acid

돼지근육	0.01

(166) 메텐아민(Methenamine) : 기타

◎ 잔류물의 정의 : Methenamine

소근육	0.01

돼지근육	0.01

닭근육	0.01

(167) 토노포스판(Tonophosphan) : 기타

◎ 잔류물의 정의 : Tonophosphan

소근육	0.01

돼지근육	0.01

말근육	0.01

(168) 세파드록실(Cefadroxil) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Cefadroxil

어류	0.01

(169) 수산화브롬글루타민 마그네슘염(L-Glutamic acid magnesium salt hydrobromide) : 진정제

◎ 잔류물의 정의 : L-Glutamic acid magnesium salt hydrobromide

닭근육	0.01

(170) 아미노메탄설폰산(Amino methane sulphonic acid) : 기타

◎ 잔류물의 정의 : Amino methaesulphonic acid

소근육	0.01

말근육	0.01

돼지근육	0.01

(171) 염산메틸에페드린(DL-Methyl ephedrine HCl) : 기타

◎ 잔류물의 정의 : DL-Methyl ephedrine HCl

소근육	0.01

돼지근육	0.01

(172) 플루메타손(Flumethasone) : 항염증제

◎ 잔류물의 정의 : Flumethasone

소근육	0.01

돼지근육	0.01

말근육	0.01

(173) 하이드록시디메틸피리미딘(2-Hydroxy-4,6-dimethylpyrimidine) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : 2-Hydroxy -4,6-dimethylpyrimidine

닭근육	0.01

[별표 8] (현행과 같음)

신․ 구조문 대비표